黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) H siao 或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根。黄芪药用历史悠久，最早见于《五十二病方》,性微温，味甘，归肺、脾二经，具有补气固表、托毒排脓、利水消肿等功效，可用于气虚乏力、表虚自汗、血虚痿黄、食少便溏、中气下陷等症状的治疗[1-4。

文献收载的黄芪炮制方法较多，蜜炙、酒炙、盐炙、清炒、米炒、麦麸炒等方法较多应用[5,6]。不同方法炮制的黄芪药效不同，盐炙黄芪可引药下行入肾经，增强滋阴降火、利水消肿的功效[7]。

《中国药典》和各省的中药材炮制规范收载的主要是蜜炙黄芪。《河南省中药饮片炮制规范》(2005年版)收载盐炙黄芪，但其质量标准控制水平比较落后。为进一步完善该品种的质量标准，本研究对盐炙黄芪药材的性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分和浸出物的含量进行了系统研究，并采用液相色谱方法测定黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，为进一步完善和提升盐炙黄芪药材的质量标准提供参考。

1、材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

万能高速粉碎机(800Y,浙江红景天工贸有限公司);电子天平(ME204E,上海梅特勒-托利多仪器有限公司);硅胶G薄层板(GF254,青岛海洋化工有限公司);超声波清洗仪(SB-5200DT,宁波新芝生物科技股份有限公司);旋转蒸发器(RE-2000B,郑州科泰实验设备有限公司);数显恒温水浴锅(HH-4,常州国华电器有限公司)。

1.1.2 试剂与药材

分析级甲酸、甲醇、三氯甲烷和乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司),氨水(烟台三和化学试剂有限公司);色谱级乙腈、甲醇(美国Thermo Fisher 公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);食用盐(山东省盐业集团有限公司)。

12批黄芪药材均购买于河北省安国市中药材批发市场，样品信息见表1。黄芪甲苷对照品(批号为110781-202118,纯度为99.8%,中国食品药品检定研究院),毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品 (批号为111920-201907,纯度为96.8%,中国食品药品检定研究院)。

表1 黄芪样品收集情况

1.2 方法

1.2.1 盐炙黄芪的炮制方法

综合各标准中的炮制方法，确定盐炙黄芪炮制方法如下：取食盐，加适量水溶解，喷洒于黄芪片上，拌匀，闷透，置热锅内，用文火炒至表面微变色，取出，晾凉。每100 kg黄芪用食盐2 kg[8,9]。

1.2.2 性状和显微鉴别

采用《中国药典》(2020年版)通则0212和2001项下的方法，对盐炙黄芪饮片性状特征和粉末的显微特征进行观察并描述。

1.2.3 薄层色谱鉴别黄芪甲苷

按照薄层色谱法(《中国药典》2020年版通则0502)试验，吸取黄芪甲苷含量测定项下的供试品溶液及对照品溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365 nm)下检视。

1.2.4 薄层色谱鉴别对照药材

取盐炙黄芪粉末2 g, 加乙醇30 mL,加热回流20 min, 滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液15 mL使之溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6,用乙酸乙酯15 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干。残渣加乙酸乙酯1 mL使之溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2 g, 同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法(《中国药典》2020年版通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365 nm)下检视。

1.2.5 水分、总灰分和浸出物的测定

水分、总灰分和浸出物的测定分别按照《中国药典》(2020版)通则中的水分测定法的第二法(烘干法)、总灰分测定法和水溶性浸出物测定方法进行测定。

1.2.6 黄芪甲苷的含量测定

采用SHIMADZU LC-20AT高效液相色谱仪和Phenomenex C18(5 μm; 250×4.6 mm)色谱柱分析样品，以乙腈-水(32∶68)为流动相，采用蒸发光散射检测器检测，载气流速为2.5 mL/min, 漂移管温度为100℃。

供试品溶液的制备如下：精密称取盐炙黄芪粉末(过四号筛)1 g, 置具塞锥形瓶中，精密加入含4%浓氨试液的80%甲醇溶液50 mL,密塞，称定重量，回流4 h, 放冷，再称定重量，用含4%浓氨试液的80%甲醇溶液补足减失的重量，过滤，精密量取续滤液25 mL,蒸干，残渣用80%甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加80%甲醇至刻度，过滤，即得。

对照品溶液的制备如下：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇-水(80∶20)溶解制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

按照《中国药典》(2020年版)通则0512高效液相色谱法项下要求对方法的系统适用性、线性、精密度、稳定性和加样回收率进行考察。

1.2.7 毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定

采用依利特高效液相色谱仪和Waters Bridge C18 (250×4.6 mm, 5 μm)色谱柱分析样品，流动相为乙腈(A)和0.2%甲酸溶液(B)。梯度洗脱程序为0 min (20%A)～20 min (40%A)～30 min(40%A),检测波长为260 nm, 流速为1 mL/min。

供试品溶液的制备如下：取本品粉末(过四号筛)约1 g, 精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 mL,称定重量，加热回流4 h, 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL,回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的制备如下：精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含500 μg的溶液。再吸取上述对照品储备液适量，用甲醇稀释成系列浓度的对照品溶液。

按照《中国药典》(2020年版)通则0512高效液相色谱法项下要求对方法的系统适用性、线性、精密度、稳定性和加样回收率进行考察。

2、结果

2.1 性状和显微鉴别

根据对盐炙黄芪样品的实际观察(图1A),并参照《河南省中药饮片炮制规范》(2005年版)和《中国药典》(2020年版)炙黄芪项的描述，确定盐炙黄芪的性状特征为呈圆形或椭圆形的厚片，直径0.6 ～3.5 cm, 厚0.1～ 0.4 cm。外表皮淡棕黄色或淡棕褐色，可见纵皱纹或纵沟。切面皮部黄白色，偶见炒制的焦黄色，有放射状纹理和裂隙，中心偶有枯朽状，黑褐色或呈空洞，嚼之微有咸味。

显微鉴别见图1B。盐炙黄芪粉末黄白色，显微镜下可观测到木栓细胞、石细胞、导管及纤维等特征结构，具体描述为纤维成束或散离，直径8～30 μm, 壁厚，表面有纵裂纹，初生壁常与次生壁分离，两端常断裂成须状，或较平截。具缘纹孔导管无色或橙黄色，具缘纹孔排列紧密。

图1 盐炙黄芪的药材外观图和粉末纤维特征图  

2.2 薄层色谱鉴别黄芪甲苷

与黄芪甲苷对照品色谱对比，12批盐炙黄芪的薄层色谱与日光下在相应的位置上呈现清晰的棕褐色斑点(图2A),在365 nm紫外光下呈现清晰的橙黄色荧光斑点(图2B)。

图2 盐炙黄芪中黄芪甲苷的薄层色谱鉴别图谱   下载原图

A.日光下；B.365 nm紫外光下。1、14为黄芪甲苷；2～13为12批盐炙黄芪。

2.3 薄层色谱鉴别对照药材

在365 nm紫外光下检视，12批盐炙黄芪的薄层色谱斑点分离度良好且清晰。与黄芪对照药材色谱对比，12批供试品与对照药材在相应的位置上呈现相同颜色荧光斑点(图3)。

图3 盐炙黄芪对照药材的薄层色谱鉴别图谱  

2.4 水分、总灰分和浸出物的测定

分别按照《中国药典》(2020版)通则中的水分测定法的第二法(烘干法)、总灰分测定法和水溶性浸出物测定方法对12批盐炙黄芪中的水分、总灰分和浸出物进行了测定。见表2。

表2 12批炙黄芪中水分、浸出物、总灰分测定结果/%

2.5 黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定

分别按照“1.2.6”和“1.2.7”项下方法测定盐炙黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，在各自的测定条件下，黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的色谱峰峰形良好，出峰时间适宜，典型色谱图见图4、5。

2.5.1 线性关系的考察

分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(540 μg/mL)2、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪，按照“1.2.6”项下色谱条件进行测定，以峰面积的自然对数lnA为纵坐标，进样质量的自然对数lnM为横坐标，作线性回归，得到方程y=1.640 7x+9.764 8(R2=0.999 4)。结果表明，黄芪甲苷在1.08～10.8 μg的进样量范围内，进样量自然对数与峰面积自然对数之间的线性关系良好。

图4 黄芪甲苷标准溶液和盐炙黄芪供试品溶液的色谱图   

图5 毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和盐炙黄芪供试品溶液色谱图   

将毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液用甲醇逐级稀释得到212、106、53、21.2、10.6 μg/mL的线性工作溶液。按“1.2.7”项下色谱条件分析，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷的峰面积作为纵坐标，溶液质量浓度(μg/mL)作为横坐标，采用最小二乘法进行线性回归，得到方程y=35.057x+68.665 (R2=0.999 6),表明，毛蕊异黄酮葡萄糖苷在(10.6～212.0)μg/mL的进样浓度范围内，进样浓度与峰面积之间的线性关系良好。

2.5.2 精密度考察

取黄芪甲苷对照品溶液和毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液，分别按照“1.2.6”和“1.2.7”项下色谱条件，连续进样6次，黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的峰面积RSD分别为1.4%和1.2%。这表明，方法的精密度符合要求。

2.5.3 重复性考察

取同一批盐炙黄芪样品6份，分别按照“1.2.6”和“1.2.7”项下方法制备黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的供试品溶液，以各自色谱条件进样分析，按外标两点法对数方程计算黄芪甲苷的含量，按外标法计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的RSD分别为1.9%和1.5%。这表明，方法的重复性符合要求。

2.5.4 稳定性考察

取同一批盐炙黄芪样品，分别按照“1.2.6”和“1.2.7”项下方法制备黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的供试品溶液，在制备后常温下0、2、4、8 h进样分析，黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的峰面积RSD分别为1.4%和1.9%。这表明，黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的供试品溶液在8 h内稳定。

2.5.5 回收率考察

取同一批盐炙黄芪样品粉末6份，每份约0.5 g, 精密称定，加入黄芪甲苷对照品659 μg, 按照“1.2.6”项下制备供试品溶液和进样分析， 测定黄芪甲苷的回收率，结果见表3。

取同一批盐炙黄芪样品粉末6份，每份约0.5 g, 精密称定，精密加入147 μg毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，按“1.27”项下制备供试品溶液和进样分析，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷的回收率，结果见表3。

表3 黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷回收率试验结果

2.5.6 样品测定

分别按照“1.2.6”和“1.2.7”项下方法测定12批盐炙黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，见表4。

表4 12批盐炙黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量/%

3、讨论

12批盐炙黄芪样品的水分含量在2.3%～6.9%之间，平均值为4.5%。根据测定结果和《中国药典》(2020年版)四部通则相关要求，确定盐炙黄芪水分不得超过10.0%。12批盐炙黄芪样品的总灰分含量在2.3%～5.2%之间，平均值为4.0%。水溶性浸出物在27.0%～46.3%之间，平均值为35.3%。而《中国药典》(2020年版)收载的黄芪规定总灰分不得超过5.0%,水溶性浸出物不得少于17.0%。由于盐炙黄芪的炮制过程中加入了食盐，根据测定结果和炮制过程，确定盐炙黄芪的总灰分不得超过7.0%,水溶性浸出物不得少于19.0%。

黄芪甲苷为黄芪中主要的黄芪皂苷类成分，具有免疫调节、降血糖和抗纤维化等多种药效作用[10,11]。毛蕊异黄酮葡萄糖苷为黄芪中主要的黄酮类成分，具有提高心肌功能、抗氧化等功效[12]。黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷是《中国药典》(2020版)中黄芪的含量测定指标。为保证质量标准的统一性和可控性，本研究测定了盐炙黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。测定结果表明，12批次盐炙黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差别较大，黄芪甲苷的含量在0.055 4%～0.198 8%之间，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量在0.022 3%～0.079 2%之间。最终根据测定结果规定黄芪甲苷不得少于0.050%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷不得少于0.020%。

本研究首次建立了盐炙黄芪的专属性强、全面的质量控制方法，所建立的标准可用于盐炙黄芪的质量控制，可为该药材的临床应用和后续开发提供参考依据。

参考文献:

[1]赵国平,戴慎,陈仁寿.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,2006:1281-1282.

[2]中华人民共和国药典2020年版.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2020.

[3]胡妮娜,张晓娟.黄芪的化学成分及药理作用研究进展[J].中医药信息,2021,38(1):76-82.

[4]吕琴,赵文晓,王世军,等.黄芪活血功效及现代药理学研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(9):215-224.

[5]闫丽丽.黄芪炮制方法研究进展[J].农业科技与装备,2019(2):65-66.

[6]孙乐,吴鹏,王春艳,等.黄芪饮片炮制工艺优选[J].时珍国医国药,2020,31(7):1616-1619.

[7]李曼曼,刘永.不同炮制方法对中药黄芪化学成分的影响[J].中西医结合研究,2020,12(1):17-19.

[8]陈靖,刘建鑫,何其睿,等.黄芪炮制工艺优化及不同炮制品成分比较[J].中国药房,2012,23(39):3679-3681.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[S].北京:中国医药科技出版社,2020.

[10]河南省中药饮片炮制规范(2005年版)[M].河南:河南人民出版社,2005.

[11]崔悦,高兴,韩丽琴,等.UFLC-MS/MS法同时测定黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量[J].中药新药与临床药理,2021,32(12):1855-1858.

[12]裴文菡,何凡,程春松,等.中药黄芪质量评价方法的研究进展[J].中国现代应用药学,2020,37(5):620-628.

基金资助:国家科学自然基金(82174039; 81803494); 山东省自然科学基金(ZR2020MH371);泰山学者青年专家项目(tsqn202103110);国家级大学生创新创业训练计划(S202210440019);山东省中医药科技发展计划(2017-225);山东省中医药科技项目(Z-2022085);

文章来源:徐倩倩,王丽,张婉莹等.盐炙黄芪的质量标准[J].滨州医学院学报,2024,47(02):81-86.