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清胰Ⅱ号制剂对胡蜂毒致MODS大鼠多脏器功能的保护作用

2025-01-10 54 上传者：管理员

摘要：目的观察清胰Ⅱ号制剂对胡蜂毒致多脏器功能障碍综合征(MODS)大鼠多脏器功能的保护作用。方法将SPF级健康雄性SD大鼠36只随机数字表法分为模型组、空白对照组及清胰Ⅱ号组，每组12只。清胰Ⅱ号组和模型组利用静脉注射胡蜂毒的方法建立MODS大鼠模型，空白对照组静脉注射等体积0.9%氯化钠注射液，清胰Ⅱ号组同时鼻饲清胰Ⅱ号制剂10 ml/kg,而模型组和对照组鼻饲等体积0.9%氯化钠注射液。干预24 h、72 h后，比较3组心肝肾功能指标[血清肌钙蛋白T(cTnT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血肌酐(SCr)]、血清肠道功能指标[二胺氧化酶(DAO)、内毒素(ETX)]、血清炎性因子[白介素(IL)-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平及结直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65的表达。结果 (1)心、肝、肾、肠道功能指标及炎性因子：与空白对照组比较，模型组大鼠干预24 h、72 h的血清cTnT、ALT、SCr、DAO、ETX、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组比较，清胰Ⅱ号组血清干预24 h、72 h的cTnT、ALT、SCr、DAO、ETX、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平均降低(P<0.05)。(2)结直肠组织蛋白表达：与空白对照组比较，模型组结肠及直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65均上调，但清胰Ⅱ号组结肠及直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65低于模型组(P<0.05)。结论清胰Ⅱ号制剂可降低血清cTnT、ALT、SCr、DAO水平，通过介导Akt/NF-κB信号通路对胡蜂毒致MODS大鼠的心肝肾及肠道等多器官具有良好的修复和保护作用。

关键词：
MODS
多脏器功能障碍综合征
清胰Ⅱ号制剂
炎性因子
胡蜂毒
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多脏器功能障碍综合征(MODS)是许多急性病患者致死的重要原因，是临床中亟需解决的一项难题。MODS发病率和病死率极高，主要会引起多种器官系统发生功能障碍，以心、肺、脑、肾衰竭表现明显，而肝、胃肠等系统在后期也有明显损伤表现[1-2]。一旦出现MODS,可能会发展为不可恢复性，这种功能障碍后很难维持内环境稳定，造成机体免疫系统紊乱[3]。因此亟需寻找一种可有效预防和治疗MODS的药物应用于临床实践中。清胰Ⅱ号制剂是一种中药复方制剂，具有疏肝清热、杀虫驱蛔的功效[4]。相关研究发现，其能抑制胰脏出血、坏死，降低MODS的发生，对组织细胞起保护功能[4]。本文通过建立MODS大鼠模型，观察清胰Ⅱ号制剂对机体细胞因子、不同脏器的影响及其作用机制，进一步确定其在MODS中的预防和治疗作用。

1、材料与方法

1.1 实验动物

选取SPF级健康雄性SD大鼠36只，周龄12周，购自浙江维通利华实验动物有限公司。本实验经遵义医科大学附属医院实验动物福利伦理委员会批准。

1.2 药物、试剂与仪器

胡蜂毒购自陕西三禾药业有限公司；丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血肌酐(SCr)诊断试剂盒、白介素(IL)- 6、IL- 8、IL-1β、二胺氧化酶(DAO)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内毒素(ETX)酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒购自Sinobestbio公司；抗体Akt、p-Akt、p65、p-p65、GAPDH购自Proteintech生物有限公司；清胰Ⅱ号制剂由遵义医科大学附属医院提供。酶标仪(瑞士帝肯全自动酶标仪);低温离心机(湖南湘仪有限公司);干燥箱(上海一恒有限公司)。

1.3 方法

将36只SPF级雄性SD大鼠随机数字表法分为模型组、空白对照组及清胰Ⅱ号组，每组12只。清胰Ⅱ号组和模型组均利用静脉注射胡蜂毒40 mg/kg诱发SD大鼠MODS,建立能模拟MODS临床病理的大鼠模型，空白对照组静脉注射等体积0.9%氯化钠注射液。清胰Ⅱ号组同时鼻饲清胰Ⅱ号制剂10 ml/kg, 而模型组和对照组鼻饲等体积0.9%氯化钠注射液。

1.4 观察指标与方法

(1)重要器官功能指标：造模后给予不同药物干预24 h、72 h后，麻醉大鼠后采血，收集血清，加入肝素抗凝管中保存，参照试剂盒说明书操作，检测血清cTnT、ALT及SCr水平，评估患者心肝肾功能。(2)血清DAO、ETX水平及炎性因子水平：造模后给予不同药物干预24 h、72 h后，麻醉大鼠后采血，收集血清，采用酶联免疫吸附法测定血清DAO、ETX、IL- 6、IL- 8、IL-1β、TNF-α水平。(3)结直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65的表达：取部分结肠和直肠组织，通过机器匀浆，用低温离心机2 500 r/min, 离心10～15 min, 取上清液置于EP管，采用BCA法检测蛋白浓度，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65水平，GAPDH作为内参。

1.5 统计学方法

采用GraphPad Prism软件进行数据分析。计量资料用

表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 血清cTnT、ALT、SCr水平比较

与空白对照组比较，模型组大鼠干预24h、72h的cTnT、ALT和SCr水平均升高(P<0.05);与模型组比较，清胰Ⅱ号组干预24h、72h的cTnT、ALT和SCr水平均降低(P<0.05),见表1。

2.2 血清DAO、ETX水平比较

与空白对照组比较，模型组大鼠干预24h、72h的DAO、ETX水平均升高(P<0.05);与模型组比较，清胰Ⅱ号组干预24h、72h的DAO、ETX水平均降低(P<0.05),见表2。

2.3 血清炎性因子水平比较

与空白对照组比较，模型组大鼠干预24h、72h的IL- 6、IL- 8、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组比较，清胰Ⅱ号组干预24h、72h的IL- 6、IL- 8、IL-1β、TNF-α水平均显著降低(P<0.05),见表3。

2.4 大鼠结直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65表达量比较

与空白对照组比较，模型组结肠及直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65均上调，但清胰Ⅱ号组结肠及直肠组织中p-Akt/Akt、p65、p-p65低于模型组(P<0.05),见图1和图2。

表13组干预24h、72h血清cTnT、ALT、SCr水平比较

表23组干预24h、72h血清DAO、ETX水平比较

表33组干预24h、72h血清炎性因子水平比较

3、讨论

胡蜂毒对人体的损害程度与进入人体的部位及毒液的量有关。被胡蜂蜇伤中毒后，易导致组织器官损伤，可累及心肌、肝脏、肾脏等，甚至影响机体免疫系统，严重时还可导致患者死亡[5- 6],因此亟需寻找一种药物积极干预和治疗。

cTnT是仅存在心肌特异的调节蛋白，是心肌损害特异性较高的标志物[7- 8]。有研究表明，ETX与TNF-α产生呈正相关，主要通过刺激单核巨噬细胞产生一系列细胞因子的反应[9]。本研究中清胰Ⅱ号组与模型组相比，cTnT、ETX、IL- 6、IL- 8、IL-1β、TNF-α水平明显降低，揭示清胰Ⅱ号制剂可下调相关促炎因子，减轻心肌和组织损伤，延缓MODS发展病程。

肠道是全身炎性反应的原动力，促使血液合成较多炎性因子，MODS发生时患者肠道屏障功能受到阻碍，加剧炎性反应，因此，检测外周血中DAO活性能反映肠上皮细胞成熟及完整性，可作为肠黏膜屏障功能监控的主要指标[10-11]。本研究中，清胰Ⅱ号组与模型组相比，DAO水平明显降低，说明清胰Ⅱ号制剂对肠道功能保护功能更明显。Akt/NF-κB信号通路在调节对感染的免疫应答、炎性反应中起关键作用[12]。本研究发现清胰Ⅱ号组可下调肠组织p-Akt/Akt水平，提示清胰Ⅱ号制剂抑制Akt信号通路后，p-AKt、Akt水平降低。p65与NF-κB信号通路活性呈正相关，结果显示清胰Ⅱ号组p65、p-p65水平均显著低于模型组，提示p65表达降低，抑制NF-κB表达，达到减轻胡蜂毒的毒性伤害，对组织起保护与治疗作用。

综上所述，清胰Ⅱ号制剂能够减轻胡蜂毒对不同脏器的损伤，其机制可能是通过降低Akt/NF-κB活性从而抑制炎性反应，为MODS的治疗提供新的思路和方法。

图13组结肠组织p-Akt/Akt、p65、p-p65表达量

图23组直肠组织p-Akt/Akt、p65、p-p65表达量

参考文献:

[2]凤尔稳,凌进华,朱冠能,等.蜂蛰伤并发多脏器功能障碍综合征危险因素分析[J].创伤与急危重病医学,2021,9(2):93- 96.

[4]尚献会,李建国,范振海,等.清胰Ⅱ号对重症急性胰腺炎大鼠胰腺及肠组织中MCP-1表达的影响[J].中国老年学杂志,2017,37(21):5233-5236.

[5]刘红玲.糖皮质激素联合血液净化治疗蜂蜇伤性多脏器功能障碍综合征患者的临床效果[J].数理医药学杂志,2020,33(5):646- 648.

[6]王华荣,李卫东,蒋沙沙,等.I-Bil､Cys C､APTT对胡蜂蛰伤发生多器官功能障碍综合征的联合预测价值[J].西部医学,2022,34(12):1792-1796.

[8]李丹丹.脓毒血症时心肌损伤和心肌标志物的研究进展[J].医学综述,2016,22(2):223-226.

[9]曹书华,高红梅,王永强,等.“神农33号”对多器官功能障碍综合征大鼠细胞因子的影响[J].中华急诊医学杂志,2003,12(2):94- 96.

[10]蔡治方,彭慈军,傲宇,等.清胰Ⅱ号对急性胰腺炎的保护作用研究[J].中国现代医学杂志,2019,29(6):6-10.

[11]周小爽,欧水平.清胰Ⅱ号临床与实验研究现状分析[J].遵义医学院学报,2017,40(5):579-582.