中药紫菀为菊科多年生草本植物的干燥根及根茎。春秋二季采挖，除去有节的根茎（习称“母根”）和泥沙，变成辫状晒干或直接晒干[1]。别名有青菀，还魂草等，生长于低山阴坡湿地，山顶和低山草地及沼泽地，海拔400～2000m。据统计全世界约有250种，广泛分布于亚洲，北美洲，欧洲，其中中国约有近百种，主要产地有安徽，河北，河南，甘肃，东北，内蒙古，山西，陕西等地。其中安徽亳州为紫菀的道地产区，已有三百多年的栽培史，亳紫菀之名见于《药物出产辩》[2]。紫菀味辛，苦，温，归肺经，具有润肺下气，化痰止咳的功效，临床常用于气逆咳嗽，痰吐不利，肺虚久咳，痰中带血等症。现代研究表明紫菀中化学成分较多，主要含有三萜及其苷类、甾醇类、蒽醌类、肽类及黄酮类[3,4,5,6]。紫菀化痰止咳的主要成分为三萜类成分紫菀酮[7]，黄酮类成分是抗炎镇痛的主要活性成分之一[8]，山奈酚和槲皮素具有明显的抗氧化作用[9]，并且在抑制溶血和免疫调节方面也有较好的作用。且槲皮素具有较好的祛痰，止咳，平喘之功，山奈酚亦常用于支气管炎的治疗，与紫菀止咳平喘的作用紧密相关[10]。紫菀尚具抗病毒、抗肿瘤、抗菌及利尿等药理作用[11]。

本研究以亳州地产药材紫菀为研究对象，通过测定不同产地、不同部位比重及其药用成分紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量，结合不同加工方法对紫菀药材药用成分含量的影响，综合多因素进行分析，为紫菀药材质量的初步评价提供科学依据。

1、仪器与材料

1.1仪器

所用主要设备有高效液相色谱仪（Agilent1260，安捷伦），电子分析天平（BP211D，德国赛多利斯），可控硅恒温水浴锅（GKC210R6，上海锦屏仪器仪表有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9140A，上海三发科学仪器有限公司），打粉机（XFB，湖南中诚制药机械厂）。

1.2材料

紫菀酮、槲皮素、山奈酚的对照品均购于中国食品药品检定研究院，乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为娃娃哈纯净水。

实验药材来自亳州不同地区，有亳州市涡阳义门及河北安国十九里马寨村、谯东区怀楼村、谯东区铜关村、经安徽中医药大学方成武教授鉴定为紫菀（AstertataricusL.f），采挖时间为2018年3月10日。从亳州药材市场购买了5种紫菀药材，根据不同加工方式分为炕干整个无硫、晒干全须无硫、晒干整个无硫、晒干整个有硫、晒干全须有硫。

将亳州不同地区采挖的紫菀除去泥土，洗净，药用部位根及根茎分开，将根茎切成片状置40℃烘箱中烘干。把所有药材打粉，过4号筛。

2、方法

采用涡阳义门产紫菀为样品进行试验设计。

2.1色谱条件

采用ZORBAXSB-C18柱（5μm,250mm×4.6mm），流速：1.0mL/min；其中紫菀酮的检测波长为200nm，柱温为30℃，进样量为20μL，流动相为100%乙腈；槲皮素和山奈酚的检测波长为360nm，柱温设置为30℃，每次进样量为10μL，流动相选择乙腈（A）和0.1%磷酸水（B）进行梯度洗脱，0～10min,25%～40%A;10～15min,40%～45%A;15～20min,45%～100%A,30～40min,100%A。紫菀酮、槲皮素、山奈酚的化学结构式见图1～图3，液相色谱图见图4～图5:

图1紫菀酮

图2槲皮素

图3山奈酚

图4紫菀酮（1）成分的HPLC色谱图

图5槲皮素（1）和山奈酚（2）成分的HPLC色谱图

2.2标准溶液配置

2.2.1紫菀酮

精确称取紫菀酮约10mg，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，配制成浓度为1mg/mL的对照品溶液。

2.2.2槲皮素和山奈酚

分别精确称取槲皮素和山奈酚各约10mg，用甲醇分别定容于10mL的容量瓶中，再各自稀释10倍，然后分别吸取槲皮素1mL，山奈酚1.5mL，混合定容于10mL容量瓶，配制成槲皮素浓度为0.01mg/mL、山奈酚浓度为0.015mg/mL的混合溶液。

2.3供试品溶液的配置

将干燥后的药材打粉过4号筛，精确称取粉末各约1g置于锥形瓶中，标记称重量，加80%甲醇20mL，摇匀，称重，置于40℃水浴锅中温浸1h，超声提取20min，取出放冷，用80%甲醇补足减失重量，摇匀。静置，取其上清液过0.45μm的微孔滤膜，作为供试品溶液。

2.4线性关系考察

分别精确吸取紫菀酮对照溶液为1、5、10、15、20μL，进样测定，以进样量作为横坐标、以峰面积作为纵坐标，求出紫菀酮的线性回归方程。分别精确吸取槲皮素和山萘酚的混合对照溶液1、2、5、10、15、20μL，进样测定，以进样量作为横坐标、以峰面积作为纵坐标，分别求出槲皮素和山萘酚的线性回归方程。

2.5精密度试验

取紫菀药材样品，精密称定1.0g，按照要求制备成供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样5次，每次进样量为10μL，测定峰面积的RSD。

2.6重现性试验

取紫菀药材样品，精密称取1.0g共5份，制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行5次平行试验，每次进样10μL，测定峰面积RSD。

2.7稳定性试验

取紫菀药材样品，精密称取1.0g，按照2.3的操作要求制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、24h吸取供试品溶液，进样量为10μL，进样后并测定紫菀酮、槲皮素、山奈酚的峰面积RSD。

2.8回收率试验

精确称取紫菀样品粉末共10份，每份精密称定约0.5g，其中的5份样品加入紫菀酮浓度为1mg/mL的对照品溶液1.2mL，另外5份样品中加入1mg/mL的槲皮素对照溶液0.09mL和1mg/mL的山奈酚对照品溶液0.08mL，计算它们的平均回收率，紫菀酮的平均回收率为98.80%,RSD为0.97%；槲皮素的平均回收率为98.18%,RSD为1.08%；山奈酚的平均回收率为98.94%,RSD为1.14%(n=5）。

2.9方法学考察

2.9.1线性关系

分别把紫菀酮的对照溶液、槲皮素和山奈酚的混合对照溶液的进样量作为横坐标，把峰面积作为纵坐标，紫菀酮的线性回归方程为Y=915.76X+101.08，表明紫菀酮在1～20μg含量范围内它的线性关系比较良好，见图6。槲皮素的线性回归方程为Y=10496X+1543.8，说明槲皮素在0.01～0.2μg含量范围内线性关系良好，见图7；山奈酚的线性回归方程为Y=16339X+4579.6，表明山奈酚在0.15～0.3μg含量范围线性关系良好，见图8。

图6紫菀酮的直线回归方程

图7槲皮素的直线回归方程图

图8山奈酚的直线回归方程图

2.9.2精密度

测得紫菀酮的峰面积RSD值为0.17%，槲皮素的峰面积RSD值为0.08%；山奈酚的峰面积RSD值为0.11%，表明该方法的精密度良好。

2.9.3重现性

测得紫菀酮的峰面积RSD值为1.42%；槲皮素的峰面积RSD值为1.24%；山奈酚的峰面积RSD值为1.07%，表明该方法的重现性较好。

2.9.4稳定性

试验测得紫菀酮的峰面积RSD值为0.21%，槲皮素的峰面积RSD值为0.12%，山奈酚的峰面积RSD值为0.08%，表示该样品溶液在24h内稳定。

2.9.5回收率

试验测得紫菀酮回收率为101.7%(RSD=0.68%），槲皮素的回收率为98.10%(RSD=0.44%），山奈酚的回收率为99.32%(RSD=0.96%）。

3、结果与分析

3.1紫菀不同产地的形态特征与不同药用部位重量

十九里马寨无套种：根茎呈不规则块状，顶端有茎、叶残基，根茎处有母根残留，有新发出的嫩芽；根茎处生出许多细根，其根长约为5～18cm。表面紫红色或灰红色，有纵皱纹，质较柔韧。谯城区铜关：根茎处生出许多细根，根长5～15cm。谯城区怀楼：根茎处有母根残留，有新发出的嫩芽。根茎簇生细根，长5～13cm。十九里马寨套种：根茎处有细根生出，长5～10cm。涡阳义门：根茎处生出少数根，其根较粗，长3～8cm。紫菀不同产地的形态特征如图9所示。

图9紫菀不同产地的形态特征

由图9可以看出：紫菀不同产地根的长度由长到短的顺序为：十九里马寨无套种、谯城区铜关、谯城区怀楼、十九里马寨套种、涡阳义门；其中十九里马寨无套种的根最长，最长可达18cm，涡阳义门的根最短。

将不同产地采挖的紫菀，除去泥沙，洗净，把不同药用部位根及根茎分开，在40℃烘箱中烘干，精密称重，结果见表1。

表1紫菀不同产地、不同药用部位的重量

3.2不同产地、不同部位药用成分的含量差异

将紫菀不同产地、不同药用部位的样品按照2.3项对供试品溶液进行配制，采用高效液相色谱法测定其中紫菀酮、山奈酚、槲皮素的含量，测定结果如表2所示。

表2紫菀不同产地、不同药用部位3种化学成分含量/%

由表2显示：紫菀根中的紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量均比根茎中三者的含量高。不同产地的紫菀中紫菀酮含量大多数超过了药典规定的0.15%，只有谯城区铜关和怀楼的根茎中含量低于药典规定；紫菀中紫菀酮含量最高的为1号样品涡阳义门的根，槲皮素含量最高的为4号样品谯城区铜关的根；山奈酚含量最高的为4号样品谯城区铜关的根；在以上产地中3号样品十九里马寨无套种的根茎中三者的含量均较低。

不同产地根与根茎中紫菀酮的含量比在1.17～2.90之间，槲皮素的含量比在4.65～19.57之间，山奈酚的含量比在4.91～66.29之间，其中谯城区铜关的根与根茎中紫菀酮的含量比差异最大；十九里桃树套种的根与根茎中紫菀酮的含量差异最小，涡阳义门根与根茎中槲皮素与山奈酚的含量差异均最大。

3.3不同加工方法样品的含量差异

亳州药材市场收集的不同加工方法的样品含量测定结果见表3。

表3不同加工方法紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量/%

不同加工方法的紫菀酮含量大多超过了药典规定，只有晒干整个有硫的紫菀酮含量低于药典标准，其中含量最高的为晒干全须无硫。炕干无硫整个与晒干无硫整个紫菀酮的含量比为1∶1.097；槲皮素、山奈酚的含量无明显的差异；晒干无硫整个与晒干无硫全须紫菀酮的含量比为1∶1.133，说明全须根中紫菀酮的含量比整个的含量高。山奈酚含量与槲皮素含量无明显的差异；晒干整个无硫与晒干整个有硫相比，紫菀酮含量比为5.13∶1，槲皮素的含量比为1∶1.27，山奈酚的含量比为1∶1.58，有硫的紫菀酮的含量比无硫的含量低，而槲皮素、山奈酚的含量高。晒干无硫全须与晒干有硫全须相比较，紫菀酮含量比为1.21∶1，经硫磺熏后紫菀酮的含量会降低，槲皮素的含量升高。

4、讨论

中药紫菀为须根类药材，根及根茎入药，类似药材有细辛、威灵仙、徐长卿、白薇、龙胆等，但这些药材的药用部位以根为主，根茎可以忽略。本研究发现：来自主产区亳州的紫菀根与根茎比重相当，但根中紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量均比根茎中高。在市场调查发现：紫菀药材商品规格中，有的全部为须根；有的为根和根茎混合，但根与根茎的比重不明确，且价格低于全须根的价格，因此根与根茎的比重将对紫菀药材质量产生影响。

本次试验采用高效液相色谱法检测紫菀药材中紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量，可以更好的反应药材的质量。由紫菀酮的化学结构可知其脂溶性较强，在甲醇中溶解度大，又能在溶解过程中除去部分极性低的杂质，使紫菀酮色谱峰分离度高[12]，因此选择甲醇来提取紫菀酮。槲皮素在植物中以槲皮素苷的形式存在，且槲皮素一般难溶于水，但易溶于醚类、醇类物质[13]，因此本试验选用甲醇来提取。紫菀酮的结构特殊[14]，无紫外吸收，药典中用薄层扫描法来检测含量，但步骤繁多，误差较大，但采用高效液相色谱法末端吸收检测，效果比较理想[15]。

研究显示：紫菀主产区的药材紫菀酮含量均高于药典标准。不同产地中紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量不同，其中涡阳义门根中的紫菀酮含量最高，但其根短且数量少；紫菀酮含量最低的为十九里马寨无套种的根，其根最长，长者可达18cm，根茎簇生许多细根，根系发达。传统观点认为紫菀“根长，色紫红，柔韧者为佳”[16]，因此在评价紫菀药材质量时要从外观性状与药用成分含量两个方面来综合考虑。十九里马寨无套种与谯城区铜关的紫菀酮含量均超过了药典所规定的0.15%，且根较长。调查发现，十九里马寨无套种与谯城区铜关的土壤均为沙土，此类土壤为根类药材的垂直发育提供了良好的生态环境。因此我们可以认为十九里马寨无套种与谯城区铜关的紫菀质量佳。虽然涡阳义门根中紫菀酮的含量高，但其根短且数量少，另调查发现：涡阳义门的土壤为粘土，此类土壤不利于根的垂直生长。

通过对晒干与炕干的紫菀中紫菀酮、槲皮素、山奈酚三者的含量比较发现，炕干与晒干的紫菀，紫菀酮、槲皮素、山奈酚的含量变化不明显；经硫磺熏蒸后紫菀酮含量有所降低，槲皮素的含量有所升高。商家为了使紫菀颜色鲜艳部分使用硫磺熏蒸，紫菀酮是发挥药效的主要活性成分，因此建议紫菀不要使用硫磺熏。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:322.

[2]陈仁山.药物出产辩[M].广州:广东中医药专门学校,1931:33,42-43,45.

[3]卢艳花,王铮涛,徐珞珊,等.紫菀中的多酚类化合物[J].中草药,2002(1):17.

[6]高金海,王红武,宋国强,等.NMR研究紫菀中两个酚性化合物的结构及立体化学[J].波谱学杂志,1994(4):391-398.

[7]卢艳花,戴岳,王峥涛,等.紫菀祛痰镇咳作用及有效部位和有效成分[J].中草药,1999(5):360-362.

[8]彭文静,辛蕊华,任丽花,等.紫菀化学成分及药理作用研究进展[J].动物医学进展,2015(3):102-107.

[10]王甫成,夏成凯,栗进才,等.HPLC同时测定紫菀中5种黄酮类成分[J].中成药,2012(2):306-309.

[11]侯海燕,陈立,董俊兴.紫菀化学成分及药理活性研究进展[J].中国药学杂志,2006(3):161-163.

[12]高文远,张蓉,贾伟,等.HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量[J].中草药,2003(10):92-93.

[13]夏运岳,金卫坤,陈幼亭,吴爱勤.HPLC法测定紫菀中槲皮素的含量[J].中草药,1997(4):207-208.

[14]肖培根.新编中药志:第1卷[M].北京:化学工业出版社,2002:988.

[15]吴弢,王国艳,侴桂新,等.HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量[J].中国中药杂志,2003(8):49-51.

[16]国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草:第7卷[M].上海:上海科学技术出版社,1998:703-704.

王蓉,赵美英,郭伟娜,程磊,方成武.药用部位和加工方法对紫菀药用成分含量的影响[J].文山学院学报,2020,33(03):12-17.

基金:安徽省教育厅自然科学基金“基于冰冻切片-激光显微切割-液质联用技术揭示紫菀根中主要药用成分的积累规律”(KJ2018A0879);安徽省教育厅自然科学基金“基于外观性状-显微结构-HPLCZ指纹图谱紫菀药材质量评价研究”(KJ2019A1177).