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苍术-厚朴药对与其单味药中有效成分比较分析

2022-02-10 287 上传者：管理员

摘要：目的探讨药对苍术-厚朴的配伍对苍术素、厚朴酚、和厚朴酚溶出率的影响。方法采用水煎煮法、乙醇回流提取法分别提取药对苍术-厚朴及其单味药中的有效成分,然后采用高效液相色谱法对苍术素、厚朴酚、和厚朴酚的含量进行分析。结果苍术-厚朴药对水提液,苍术-厚朴药对醇提液中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚含量明显高于单味药材,其中苍术-厚朴药对醇提液中含量最高,分别为1.8486、1.0876、0.4840mg•g-1。结论苍术-厚朴药对在体外配伍后更能促进有效成分的溶出。

关键词：
厚朴酚
和厚朴酚
苍术-厚朴药对
苍术素
高效液相色谱法
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药对配伍是介于中药学和方剂学之间的一门学科，即中医临床上常用的相对固定的2味中药材配伍组合，具有一定的规律性，两药药性在某种程度上相同或制约[1]，如相须药对、相反药对、相使药对、相畏药对等[2]。苍术为菊科植物茅苍术Atractylodeslancea(Thunb.)DC或北苍术Aatractylodeschinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎，辛、苦、温，具有燥湿健脾，祛风散寒，明目的作用[3]。厚朴为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.Var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮，苦、辛、温，具有燥湿化痰、下气除满的作用[2]。苍术燥湿为主，厚朴行气为辅，协同相助，可升脾气，降胃气，化湿浊，健脾胃[4]。用于治疗湿困脾阳，首重如裹，胸膈痞闷，脘腹胀满等。据统计，苍术-厚朴药对配伍的中药方剂有190余首之多，最具代表性的方剂为平胃散，以此药对作君臣之用，为临床常用配伍药对。

研究药对配伍规律可作为研究复方配伍规律的重要切入点之一，从而揭示其配伍规律及科学内涵，深入挖掘和提高中药复方的配伍理论，为复方的配伍机制研究提供线索和依据[5]。苍术素为苍术的主要有效成分之一，厚朴酚与和厚朴酚为厚朴中的有效成分，《中华人民共和国药典》2020版一部分别以其作为苍术和厚朴的质量控制指标[6]。目前，对苍术、厚朴单味药的研究报道较多，而对两药配伍研究的报道较少。为探讨药对配伍使用时对苍术素、厚朴酚、和厚朴酚的溶出率是否有影响，我们进行了相关实验，为苍术-厚朴药对的进一步深入研究奠定基础。

1、仪器与试药

1.1 仪器

Agilent-1260型高效液相色谱仪（安捷伦有限公司）；JA5003B型电子分析天平（上海精科有限公司）；METTLERMS105DJ型十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 试药

苍术素对照品（111924-201102）、厚朴酚对照品（110729-200412）、和厚朴酚对照品（110730-201011），均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；苍术、厚朴药材均购自安徽贺林中药饮片有限公司，经辽宁中医药大学药学院李峰教授检定菊科植物北苍术（Atractylodeschinensis(DC.)Koidz）的干燥根茎和木兰科植物凹叶厚朴（MagnoliaofficinalisRehd.etWils.war.bliobaRehd.etWils.）的干燥枝皮。

2、方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AgilentSB-C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：甲醇-水（70∶30）进行等度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：294nm；柱温：25℃。在上述色谱条件下，理论塔板数以苍术素计不低于30000，分离度>1.5[7]。

2.2 对照品溶液制备

分别精密称取苍术素、厚朴酚、和厚朴酚适量，以甲醇配成各单一成分的溶液，即得苍术素0.4548mg·mL-1、厚朴酚0.2125mg·mL-1、和厚朴酚0.1820mg·mL-1的对照品储备液。

2.3 供试品溶液制备

2.3.1 苍术醇提液

取苍术饮片5g，粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇50mL回流提取30min，滤过，置量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，得到苍术醇提取液。

2.3.2 厚朴醇提液

取厚朴饮片5g，粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇50mL回流提取30min，滤过，置量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，得到厚朴醇提取液。

2.3.3 苍术水提液

取苍术饮片5g，粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加水50mL煎煮30min，滤过，置量瓶中，加水稀释至刻度，得到苍术水提取液。

2.3.4 厚朴水提液

取厚朴饮片5g，粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加水50mL煎煮30min，滤过，置量瓶中，加水稀释至刻度，得到厚朴水提取液。

2.3.5 苍术-厚朴药对醇提液

取厚朴、苍术各5g粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇50mL回流提取30min，滤过，置量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，得到苍术-厚朴药对醇提液[8]。

2.3.6 苍术-厚朴药对水提液

取厚朴、苍术各5g粉碎，过4号筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加水50mL煎煮30min，滤过，置量瓶中，加水稀释至刻度，得到苍术-厚朴药对水提液[9]。

2.4 苍术素、厚朴酚、和厚朴酚混合对照品溶液的制备

精密吸取“2.2”项下的苍术素、厚朴酚、和厚朴酚的对照品储备液2、3、1.5mL。置同一10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 线性范围考察

分别精密吸取混合对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5μL，在上述色谱条件下分别进行进样测定，以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，苍术素Y=1.6981×103X+196,r=0.9993，表明进样量在0.0683～0.4775μg线性关系良好。厚朴酚Y=2.0904×102X+36.7140,r=0.9991，表明进样量在0.2274～1.5918μg线性关系良好。和厚朴酚Y=7.4129×102X-3.2857,r=0.9991，表明进样量在0.1594～1.1156μg线性关系良好。

2.6 精密度考察

精密吸取苍术-厚朴和提液样品的供试品溶液，连续进样5次，测得苍术素、厚朴酚、和厚朴酚的RSD值分别为1.3%、1.6%、1.0%。结果表明，仪器精密度良好。

2.7 稳定性考察

精密吸取苍术-厚朴和提液样品的供试品溶液，分别在0、2、4、8、12h进样10μL，测得苍术素、厚朴酚、和厚朴酚峰面积的RSD分别为1.2%,1.3%,1.2%，结果表明供试品溶液中上述3个成分在12h内稳定性良好，符合规定。

2.8 重复性考察

精密吸取苍术-厚朴和提液样品的供试品溶液5份，每份苍术、厚朴各约5g，精密称定，按“2.3.5”项下方法平行制备5份供试品溶液，分别进样10μL进行测定。结果苍术素、厚朴酚、和厚朴酚含量平均值分别为0.5650、0.6409、0.27648mg·g-1,RSD分别为1.1%、1.5%、1.4%。

2.9 加样回收率考察

取已知含量（苍术素1.8486mg·g-1，厚朴酚1.0876mg·g-1，和厚朴酚0.4840mg·g-1）的苍术-厚朴醇提液样品，取5份，每份苍术、厚朴各约2.5g，精密称定，分别置圆底烧瓶中，精密加入苍术素4.9970mg，厚朴酚2.6091mg，和厚朴酚1.2054mg按“2.3.5”项下的方法操作，在上述色谱条件下进行测定后计算回收率，苍术素回收率（98.8±2.4）%、厚朴酚回收率（98.6±1.9）%、和厚朴酚回收率（98.4±1.2）%。本方法回收率良好。

2.10 样品的含量测定

取苍术、厚朴药材，精密称定，按“2.3”项下的操作方法操作，在上述色谱条件下进样测定并计算样品中指标性成分的含量。见表1。

3、讨论

3.1 苍术-厚朴配伍历史沿革

宋代《太平惠民和剂局方》中，平胃散分别以苍术、厚朴为君药和臣药，取其化湿浊，健脾胃，调气机之功效，以求降胃气之故[10]。苍术性燥主升，善除湿运脾；厚朴性燥主降，善温中化湿，下气除满。苍术-厚朴药对配伍，临床用于湿困脾阳，胸膈痞塞，脘腹胀满，呕吐恶心，不思饮食，口淡无味，苔白厚腻[11]。

3.2 色谱条件检测波长分析

根据《中华人民共和国药典》2020版第一部记载，苍术的最佳检测波长为340nm，厚朴的最佳检测波长为294nm。在340nm和294nm处分别对样品进行分离，发现在340nm处厚朴酚与和厚朴酚没有吸收峰，于是选择294nm为检测波长[12]。

3.3 提取溶媒分析

苍术-厚朴药对水提液，苍术-厚朴药对醇提液中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚含量明显高于单味药材中该3种成分的含量，其中苍术-厚朴药对醇提液中3种成分含量最高，分别为1.8486、1.0876、0.4840mg·g-1。在一定程度上证明了，苍术、厚朴在体外配伍后能促进有效成分的溶出。但二药配伍比例的变化以及乙醇的浓度、提取时间对几种有效成分的溶出率是否有影响，还需在今后的试验中进一步深入讨论研究。

3.4 水提取液和醇提取液含量差异的分析

水提取作为中药传统煎药方法，但苍术-厚朴药对水提液中3个有效成分的含量均低于苍术-厚朴药对醇提液，尤其对于厚朴酚更为明显。经过分析可能是由于本文中测定的3种有效成分均为脂溶性，所以在乙醇中提取率高于在水中提取率。

3.5 提取方法分析

从结果中可以看出，苍术、厚朴在体外配伍后更能促进有效成分的溶出。但是水提取为我国中药传统煎药方法[13]，虽然经过测定在其中3种有效成分的含量并没有醇提取混合液中高，但它进入体内后所产生的药理作用是否强于醇提取混合液进入体内后所产生的药理作用，这是一个很值得进一步探讨的问题。

本实验通过高效液相色谱法对苍术-厚朴药对水提液，苍术-厚朴药对醇提液及其单味药材中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚含量进行比较分析，发现醇提取混合液和水提取混合液中检测出，3种有效成分的含量均高于单味药材，其中苍术-厚朴药对醇提液中含量最高，药对配伍可促进有效成分溶出，为药对的中药复方配制和临床应用研究提供依据。

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