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维药核桃青皮的生药学研究

2023-07-12 111 上传者：管理员

摘要：对核桃青皮的性状、显微特征进行了鉴别，采用薄层色谱(TLC)法对核桃青皮中齐墩果酸进行了定性鉴别；采用单因素实验优化了核桃青皮中齐墩果酸的提取工艺，并采用紫外可见分光光度法测定了核桃青皮中齐墩果酸的含量。结果表明，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(21∶0.15∶0.5,体积比)为展开剂时，核桃青皮中齐墩果酸的TLC图谱斑点清晰，分离度好；核桃青皮中齐墩果酸的最佳提取工艺为：超声提取、以甲醇为提取溶剂、超声时间40 min;齐墩果酸浓度在0.007 28～0.072 80 mg•mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系；5批新疆不同产地的核桃青皮中齐墩果酸平均含量为1.988 mg•g-1。该方法操作简便、结果准确，适用于核桃青皮的质量控制。

关键词：
提取工艺
核桃青皮
生药学
紫外可见分光光度法
薄层色谱法
齐墩果酸
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核桃青皮，又名“青龙衣”,是胡桃科(Juglandaceae)胡桃属(Juglans)植物核桃(Juglans regia L.)和核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)的未成熟外果皮。核桃青皮味辛、苦，性涩、平，微寒，有毒，具有清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效[1,2]。核桃在我国新疆、四川、云南、山东、河北等22个省(区、市)均有大量种植，产量十分丰富，位居世界第一。核桃加工过程中，大量核桃青皮处理不当极易造成环境污染及资源浪费。张浩等[3]将核桃壳超微粉与电炉渣超微粉进行复合，制备了具有良好降解甲醛性能的生态活性炭，实现了废弃物的高附加值利用。核桃青皮收载于《卫生部颁药品标准》(中药材第一册)中，但不甚详细，只有性状描述，没有定量指标。对核桃青皮进行回收和二次加工，并对其进行质量评价显得尤为重要[4,5]。近年来，对核桃青皮的研究主要集中在醌类化合物，但核桃青皮中的萜类成分也极具活性和研究价值[6,7,8]。在此，作者对核桃青皮中萜类成分齐墩果酸进行进一步研究，并通过对核桃青皮进行定性与定量研究，为科学评价和有效控制核桃青皮药材的质量提供理论依据。

1、实验

1.1药材

新疆5个产地(皮山县、墨玉县、叶城县、五家渠市、疏附县)的核桃青皮，由新疆银朵兰维药股份有限公司提供，经新疆医科大学姚蓝副教授鉴定为胡桃科植物核桃(Juglans regia L.)和核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)的未成熟外果皮。

1.2试剂与仪器

齐墩果酸对照品(批号202103-202128,纯度98%),中原植提标准品经销中心；无水乙醇、95%乙醇、三氯甲烷、甲醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸、浓硫酸、水合氯醛、甘油，均为分析纯；实验用水为纯净水。

硅胶G薄层板，安徽良臣硅源材料有限公司；XH10002型电子天平，永康香山衡器有限公司；KQ3200DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；HH-S4型数显恒温水浴锅，金坛医疗仪器厂；TH-Ⅱ型薄层加热器，上海科哲生化科技有限公司；WD-9403C型紫外仪，北京六一仪器厂；普析通用TU-1810型紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；Motic SK-200IP型数码显微镜；广泛pH试纸。

2、结果与讨论

2.1核桃青皮的性状鉴别

核桃青皮为皱缩的半球形或不规则块片状，边缘多向内卷曲，质脆，易折断，直径3～6 cm,厚0.6～1.0 cm;外表面呈黑棕色或黑黄绿色，表皮皱缩，密生黄色斑点，一端有一果柄痕；内表面呈黑褐色，粗糙，附纵向筋络状维管束(图1);气微，味微苦、涩，嚼之有沙粒感。

图1核桃青皮的照片

2.2核桃青皮的显微鉴别

取核桃青皮粉末(黑棕色),经水合氯醛透化和稀甘油装片后进行显微鉴别，结果如图2所示。

图2核桃青皮粉末的显微鉴别

由图2可知，核桃青皮粉末中石细胞孔腔明显，壁厚；多见螺纹导管；含有许多薄壁细胞；有少量黄色色块，推测为色素。

2.3核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别

2.3.1溶液的制备

2.3.1.1对照溶液的制备

取齐墩果酸对照品适量，用甲醇配制成0.5 mg·mL-1的齐墩果酸对照溶液。

2.3.1.2供试溶液的制备

精密称取核桃青皮粉末1.0 g,加入20 mL甲醇，混匀，40℃超声30 min后，4 000 r·min-1离心5 min,过滤，滤液蒸干，用甲醇定容至1 mL,即得供试溶液。

2.3.2薄层色谱鉴别

分别取供试溶液、齐墩果酸对照溶液适量，点样于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(21∶0.15∶0.5,体积比，下同)为展开剂，饱和，展开；取出晾干，喷以10%硫酸-乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，于日光下检测，结果如图3所示。

图3核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别

S.齐墩果酸对照溶液1～9.供试溶液

由图3可知，供试溶液与齐墩果酸对照溶液在相同位置上显示相同颜色的斑点，且斑点清晰，比移值适中。表明展开剂三氯甲烷-甲醇-甲酸(21∶0.15∶0.5)的延展性良好，可用于核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别。

2.4核桃青皮中齐墩果酸的提取工艺优化

2.4.1提取方式对齐墩果酸提取率的影响

精密称取3份核桃青皮粉末各1.0 g,分别置于250 mL锥形瓶中，按料液比1∶20(g∶mL,下同)加入甲醇，分别采用浸提、回流、超声等3种提取方式提取1 h,考察提取方式对齐墩果酸提取率的影响，结果如图4所示。

由图4可知，采用超声提取时，齐墩果酸提取率最高，提取效果最好。因此，选择超声法提取核桃青皮中齐墩果酸。

2.4.2提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响

精密称取3份核桃青皮粉末各1.0 g,分别置于250 mL锥形瓶中，按料液比1∶20分别加入75%乙醇、95%乙醇、甲醇，40℃超声提取20 min,考察提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响，结果如图5所示。

图4提取方式对齐墩果酸提取率的影响

图5提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响

由图5可知，以甲醇为提取溶剂时，齐墩果酸提取率最高，提取效果最好。因此，选择最佳提取溶剂为甲醇。

2.4.3超声时间对齐墩果酸提取率的影响

准确称量3份核桃青皮粉末各1.0 g,分别置于250 mL锥形瓶中，按料液比1∶20加入甲醇，40℃分别超声提取20 min、40 min、60 min,考察超声时间对齐墩果酸提取率的影响，结果如图6所示。

图6超声时间对齐墩果酸提取率的影响

由图6可知，随着超声时间的延长，齐墩果酸提取率逐渐升高；当超声时间超过40 min后，齐墩果酸提取率变化不大。因此，从节能环保的角度考虑，选择最佳超声时间为40 min。

2.5核桃青皮中齐墩果酸的含量测定

2.5.1溶液的制备

2.5.1.1对照溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品约45.5 mg,置于25 mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得1.82 mg·mL-1齐墩果酸对照溶液。

2.5.1.2供试溶液的制备

精密称取核桃青皮粉末1.0 g,加入20 mL甲醇，40℃超声40 min, 4 000 r·min-1离心5 min,取上清液，蒸干定容至10 mL;吸取上述溶液0.2 mL于具塞试管中，水浴挥干甲醇，加入新制的5%香草醛-冰醋酸溶液[9]0.4 mL、高氯酸1 mL,60℃水浴15 min,取出冷却至25℃,用冰醋酸定容至5 mL,摇匀，即得供试溶液。

2.5.2检测波长的确定

取0.2 mL 1.82 mg·mL-1齐墩果酸对照溶液于具塞试管中，水浴挥干甲醇，加入新制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1 mL,60℃水浴15 min,取出冷却至25℃,用冰醋酸定容至5 mL,摇匀，以相应试剂为空白，采用紫外可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2020版一部附录VA,下同)在200～800 nm范围内进行测定。发现，在538 nm处有最大吸收峰。因此，确定检测波长为538 nm。

2.5.3方法学考察

2.5.3.1线性关系

分别精密吸取1.82 mg·mL-1齐墩果酸对照溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度；吸取上述溶液0.2 mL于具塞试管中，后续按2.5.2方法测定538 nm处吸光度，以浓度(c, mg·mL-1)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，拟合得线性回归方程：A=10.524c+0.0355,R2=0.9993。表明齐墩果酸浓度在0.007 28～0.072 80 mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5.3.2精密度

取齐墩果酸对照溶液1份，连续测定6次，测得吸光度平均值为0.332,RSD值为0.10%。表明该方法精密度良好。

2.5.3.3重复性

取核桃青皮粉末，按2.5.1.2方法平行制备供试溶液6份，测得齐墩果酸平均含量为1.978 mg·g-1,RSD值为0.732%。表明该方法重复性良好。

2.5.3.4稳定性

取供试溶液1份，分别放置0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、75 min测定吸光度，测得RSD值为2.01%。表明供试溶液在75 min内稳定性良好。

2.5.3.5加标回收率

精密称取5份核桃青皮粉末各0.5 g,分别加入齐墩果酸对照溶液，按料液比1∶20加入甲醇，再按2.5.1.2方法平行制备供试溶液，测定吸光度并计算齐墩果酸含量。结果表明，齐墩果酸平均加标回收率为99.5%(n=5),RSD值为1.26%,加标回收率符合要求。

2.5.4样品测定

精密称取新疆5个产地的核桃青皮粉末各1.0 g,按2.5.1.2方法平行制备供试溶液5份，测定吸光度并计算齐墩果酸含量，结果见表1。

表1不同产地的核桃青皮中齐墩果酸的含量

3、结论

核桃青皮的鉴别结果表明，干品可以外表皮皱缩，呈黑棕色或黑黄绿色，密生黄色斑点，内表面呈黑褐色，附纵向筋络状维管束，味微苦、涩，嚼之有沙粒感作为性状鉴别特征；粉末可以石细胞、螺纹导管、薄壁细胞、黄色色块作为显微鉴别特征；以三氯甲烷-甲醇-甲酸(21∶0.15∶0.5)为展开剂时，核桃青皮中齐墩果酸的TLC图谱斑点清晰，分离度好。核桃青皮中齐墩果酸的最佳提取工艺为：超声提取、以甲醇为提取溶剂、超声时间40 min;齐墩果酸浓度在0.007 28～0.072 80 mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系；新疆5个产地的核桃青皮中齐墩果酸平均含量为1.988 mg·g-1。该方法操作简便、结果准确，适用于核桃青皮的质量控制。

参考文献:

[1]张迅杰,赫军,柳芳,等.青龙衣的化学成分和质量控制研究进展[J].山东中医药大学学报,2016,40(5):477-483.

[2]江苏新医学院.中药大词典(下册)[M].上海:上海科学技术出版社,1986:1544.

[3]张浩,张磊,龙红明.电炉渣超微粉改性生物质废弃物制备生态活性炭的光谱学分析[J].光谱学与光谱分析,

[4]李子文,李宗朋,买书魁,等.最小二乘支持向量机的核桃露饮品中脂肪成分的定量分析[J].光谱学与光谱分析,

[5]何勇,郑启帅,张初,等.基于中红外光谱和化学计量学算法鉴别核桃产地及品种[J].光谱学与光谱分析,

[6]周媛媛,刘雨新,孟颖,等.青龙衣中的醍类成分研究[J].中医药学报,

[7]周媛媛,蒋艳秋,孟颖,等.青龙衣活性部位的化学成分研究[J.中成药,2015,37(2):32-335.7HOU Y Y,JIANG Y Q,MENG Y.et

基金资助:新疆维吾尔自治区“十四五”重点学科-中医学项目[(2022)112];新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2021D01C265);新疆特色植物资源与产业化研究项目(JSHT20150702);

文章来源:付晓,晏千茜,田树革.维药核桃青皮的生药学研究[J].化学与生物工程,2023,40(07):40-44.