首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 药学论文 > 中药学论文 > UPLC法同时测定养阴清肺丸中7种成分

UPLC法同时测定养阴清肺丸中7种成分

2023-09-20 154 上传者：管理员

摘要：目的建立UPLC法同时测定养阴清肺丸中哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm, 2.7μm);流动相乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长210、230、252、278、332 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 5),水蜜丸中其平均加样回收率95.67%～103.51%,RSD 1.17%～2.92%;大蜜丸中其平均加样回收率95.41%～104.24%,RSD 0.76%～2.62%。结论该方法简便、准确、有效，可用于养阴清肺丸的质量控制、整体评价。

关键词：
UPLC
中药学
中药学论文
养阴清肺丸
化学成分
加入收藏

养阴清肺丸由地黄、麦冬、玄参、川贝母、白芍、牡丹皮、甘草、薄荷8味药材组成，具有养阴润燥、清肺利咽的功效，临床上用于治疗阴虚肺燥、咽喉干痛、干咳少痰或痰中带血，现收载于2020年版《中国药典》一部，有大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸4种规格[1],但仅对丹皮酚进行控制，而且目前相关文献也仅涉及芍药苷[2,3,4]。中药复方制剂药味众多，组成复杂，仅以单一成分为指标无法实现全面客观评价其质量的目的[5,6,7],故本实验采用UPLC法同时测定养阴清肺丸中哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸的含量，以期为提高该制剂质量控制标准提供理论依据、技术支撑。

1、材料

Agilent 1290 Infinity快速高分离液相色谱仪(美国Agilent公司);ME204T/02型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);AS10200BT型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。哈巴苷(批号111729-201707,纯度96.8%)、芍药苷(批号110736-201943,纯度100%)、甘草苷(批号111610-201908,纯度95.0%)、毛蕊花糖苷(批号111530-201914,纯度95.2%)、哈巴俄苷(批号111730-201709,纯度95.9%)、丹皮酚(批号110708-201407,纯度99.9%)、甘草酸铵(批号110731-201720,纯度97.7%)对照品均购自中国食品药品检定研究院。养阴清肺丸共96批，由14个厂家生产，其中3个厂家生产水蜜丸，共46批；12个厂家生产大蜜丸，共46批；1个厂家生产小蜜丸，共3批；1个厂家生产水丸，共1批(由于1个厂家同时生产大蜜丸、水蜜丸，1个厂家同时生产大蜜丸、水丸，1个厂家同时生产大蜜丸、小蜜丸，故有交叉现象)。乙腈为色谱纯(美国Thermo Fisher Scientific公司);其余试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);水为纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。

2、方法与结果

2.1色谱条件、系统适用性考察

Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm, 2.7μm),以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱(0～3 min, 3%A;3～16 min, 3%～16%A;16～20 min, 16%A;20～26 min, 16%～25%A;26～31 min, 25%～30%A;31～33 min, 30%～37%A;33～38 min, 37%～42%A;38～40 min, 42%～45%A;40～45 min, 45%～100%A);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长210 nm(0～8 min,哈巴苷)、230 nm(8～18 min,芍药苷)、278 nm(18～21 min,甘草苷)、332 nm(21～27 min,毛蕊花糖苷)、278 nm(27～33 min,哈巴俄苷、丹皮酚)、252 nm(33～45 min,甘草酸铵);进样量4μL。

2.2对照品溶液制备

精密称取哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸铵对照品适量，70%甲醇制成每1 mL分别含435、883.75、255、135、146、1 036.67、711μg上述成分的贮备液，分别精密吸取适量，70%甲醇制成适宜质量浓度，即得(甘草酸含量=甘草酸铵含量/1.020 7)。

2.3供试品溶液制备

取本品(水蜜丸或水丸)适量，研成细粉，取约1.5 g,精密称定；另取重量差异项下的大蜜丸或装量差异项下的小蜜丸，剪碎，取约2.5 g,精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL,密塞，称定质量，超声(功率250 W,频率33 kHz)处理30 min,放冷，70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性样品溶液制备

按本品处方比例，分别制成缺白芍和牡丹皮、缺地黄和玄参、缺甘草、缺玄参、缺白芍的阴性样品，按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5专属性试验

取对照品、供试品、阴性样品溶液各4μL,在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，阴性样品在与对照品色谱峰相应位置处无吸收峰，表明其他成分对测定结果无影响，该方法专属性良好。

2.6线性关系考察

精密吸取“2.2”项下贮备液适量，甲醇逐级稀释成5个质量浓度，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行回归，并分别以信噪比S/N=3、S/N=10时的质量浓度为检出限、定量限，结果见表1,可知各成分在各自范围内线性关系良好。

图1各成分HPLC色谱图

表1各成分线性关系

2.7精密度试验

取对照品溶液适量，在“2.1”项色谱条件下进样测定6次，测得哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸峰面积RSD分别为1.48%、0.14%、0.27%、0.17%、0.26%、0.16%、0.15%,表明仪器精密度良好。

2.8重复性试验

取水蜜丸(批号17035288)、大蜜丸(批号18010541)适量，按“2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得水蜜丸中哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸含量RSD分别为1.10%、1.51%、0.65%、0.77%、0.49%、0.98%、0.51%,大蜜丸中其含量RSD分别为1.60%、1.69%、0.94%、0.51%、0.30%、0.75%、0.12%,表明该方法重复性良好。

2.9稳定性试验

取“2.8”项下水蜜丸、大蜜丸供试品溶液各1份，于0、2、8、10、12、24 h在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得水蜜丸中哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸峰面积RSD分别为1.05%、0.59%、0.97%、1.01%、1.14%、0.48%、0.55%,大蜜丸中其峰面积RSD分别为1.41%、0.86%、0.99%、1.03%、1.47%、0.83%、0.64%,表明溶液在24 h内稳定性良好。

2.10加样回收率试验

2.10.1水蜜丸

取粉碎后的本品(批号17035288)约0.75 g,精密称定，精密加入对照品溶液(未稀释)适量，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸平均加样回收率分别为103.05%、103.51%、100.61%、97.81%、101.06%、95.67%、101.40%,RSD分别为1.94%、2.14%、2.92%、1.45%、1.17%、1.83%、1.46%。

2.10.2大蜜丸

取剪碎的本品(批号18010541)约1.25 g,精密称定，精密加入对照品溶液(未稀释)适量，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸平均加样回收率分别为103.46%、104.24%、100.17%、95.97%、102.65%、95.41%、101.31%,RSD分别为0.83%、1.97%、2.62%、0.76%、2.43%、2.33%、2.35%。

2.11样品含量测定

取46批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表2。

表2各成分含量测定结果(mg/g)

3、讨论

本实验发现，哈巴苷、哈巴俄苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、丹皮酚、甘草苷最大吸收波长分别为210、282、230、332、274、278、252 nm,由于要使每种成分都处在最佳检测波长下，故采用分段变换波长法。另外，丹皮酚、哈巴俄苷色谱峰保留时间、最大吸收波长相近，故在278 nm处对两者进行检测。

前期报道，哈巴苷、哈巴俄苷归属于玄参，芍药苷归属于白芍、牡丹皮[8],丹皮酚归属于牡丹皮，毛蕊花糖苷归属于地黄[9]、玄参[10],甘草苷、甘草酸归属于甘草。本实验发现，投料质量较差的药味主要涉及玄参、地黄，1家企业全部3批大蜜丸均未检测出哈巴苷、哈巴俄苷，其中1批未检出毛蕊花糖苷，1批含量较低，仅1批含量处于中上游水平，提示该厂家应关注上述2种药材的投料风险；1家企业全部3批样品均未检出哈巴苷，并且哈巴俄苷含量均较低，而毛蕊花糖苷含量均处于正常水平，研究表明，不同产地玄参中哈巴苷、哈巴俄苷含量差异较大，大多数是前者高于后者，也有少数恰好相反[11,12,13],提示该厂家需关注该药材投料风险。

甘草中黄酮类(如甘草苷等)、三萜类(如甘草酸等)化合物含量较高，为该药材主要药效成分[14]。研究表明，甘草中甘草苷、甘草酸含量与基原[15,16]、产地[17]、生长年限[18]相关，而本实验中不同企业或同一企业不同批次样品中两者含量差异较大，与上述文献报道一致。另外，1家企业5批水蜜丸中甘草苷含量均处于较低水平，12批样品中甘草酸含量亦然，提示该厂家在后续生产中应关注该药材质量风险。

4、结论

本实验采用HPLC法同时测定养阴清肺丸中哈巴苷、芍药苷、甘草苷、毛蕊花糖苷、哈巴俄苷、丹皮酚、甘草酸的含量，该方法简便快速，专属性强，可有效实现对白芍、地黄、玄参、甘草、牡丹皮投料情况的考察，从而为该制剂质量控制提供理论依据、技术支撑。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020年版一部[$].北京:中国医药科技出版社,2020:1384.

[2]许倩云,王玉华.HPLC法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量[J].内蒙古医科大学学报,2015,37(4):314-317.

[3]戚宝蝉,康强,李子,等.HPLC法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量[J].中国药房,2012,23(32):3053-3055.

[4]范桂强,柳俊萍,颉维民,等.高效液相色谱法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量[J.河北中医,2012,34(7):1063-1065.

[5]王珩,钟清泽,殷敏,等.高效液相色谱法同时测定桂枝茯苓丸中5个成分含量[J].中药材,2022,45(4):927-930.

[6]龙凯花,刘峰,张红,等.一测多评法同时测定冠心舒通胶囊中10个成分的含量[J].药学学报,2022,57(6):1880-1886.

[7]焦健,张英延,任维鑫,等.HPLC法同时测定双虎清肝颗粒中9种成分的含量([UJ].沈阳药科大学学报,2022,39(4).421-429.

文章来源:袁航,尹丽华,陈安珍等.UPLC法同时测定养阴清肺丸中7种成分[J].中成药,2023,45(09):2838-2842.