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测定参蒲益智缓释胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量

2023-10-25 165 上传者：管理员

摘要：目的采用HPLC对参蒲益智缓释胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rd进行含量测定。方法采用C18色谱柱进行，梯度洗脱，流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，检测波长为203nm，流速为1.0 m L·min-1，柱温为30℃。结果人参皂苷Rg1、Re、Rd分别在2.00～20.00μg·m L-1、3.00～30.00μg·m L-1、5.00～50.00μg·m L-1浓度范围内线性关系良好。结论该方法简单、稳定，可用作参蒲益智缓释胶囊中3种人参皂苷的含量测定。

关键词：
人参皂苷
参蒲益智缓释胶囊
含量测定
认知障碍
高效液相
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人参中含有多种化学成分，包括皂苷类、多糖类、黄酮类等成分，其中主要活性成分且研究最多的是人参皂苷类成分[1]。人参具有安精神，定魂魄，止惊悸，开心益智[2]之功效，现代研究表明，人参皂苷类成分对中枢神经、心脑血管和免疫系统均有显著的保护作用[3,4,5]。本实验室选用人参配伍石菖蒲制备了参蒲益智缓释胶囊，用于改善认知能力，尤其对血管性认知障碍（VCI)[6]的预防及治疗效果尤佳。

本文应用高效液相色谱（HPLC）对参蒲益智缓释胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rd的含量进行测定，为参蒲益智缓释胶囊的质量控制研究奠定基础。

1、实验部分

1.1 仪器、试剂与药品

人参皂苷Rg1标准品（B21057源叶生物）；人参皂苷Re标准品（B21055源叶生物）；人参皂苷Rd标准品（B21054源叶生物）；参蒲益智缓释胶囊（实验室自制）；甲醇、乙腈，色谱纯，DIKMA公司；H3PO4（色谱纯科密欧化学试剂有限公司）。

BT25S型电子分析天平（德国Sartorius公司）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（永泰超声仪器有限公司）；A2010型岛津液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.2 3种人参皂苷分析方法的建立

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil GOLD (C18柱，250×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈（A)-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～30min,19%B;30～35min,19%～24%B;35～66min,24%～40%B）；检测波长203nm；流速1.0mL·min-1；柱温30℃；进样量20μL。

1.2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rd对照品2.00、3.00、5.00mg，先用适量的0.1mol·L-1HCl溶液使其充分溶解，再用0.1mol·L-1HCl溶液将其定容至10mL容量瓶内，摇匀，分别配制成人参皂苷Rg1200.00μg·mL-1、人参皂苷Re300.00μg·mL-1、人参皂苷Rd 500.00μg·mL-1的标准品储备液。分别精密吸取1mL上述人参皂苷Rg1、Re、Rd标准储备液，用0.1mol·L-1 HCl溶液定容至10mL容量瓶内，摇匀，作为混合对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备

精密称取5粒缓释胶囊内容物，每粒胶囊约0.50g，混匀，取适量颗粒并精密称定1.50g（约含400mg人参总皂苷），加入适量0.1mol·L-1HCl溶液使其溶解，再用0.1mol·L-1 HCl溶液定容于100mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。

1.2.4 空白溶液的制备

按照比例称取辅料，用0.1mol·L-1HCl溶液溶解后，定容至10mL容量瓶内，摇匀，作为空白溶液。

2、结果与讨论

2.1 专属性考察

使用0.22μm滤膜过滤空白溶液、对照品溶液和供试品溶液。按照“1.2.1”的色谱条件进行分析，结果见图1。

图1 人参总皂苷高效液相色谱图

由图1可见，人参皂苷Rg1、Re、Rd的保留时间分别约为36.6、37.1、63.3 min，且对照品、供试品的峰形较好，辅料峰未产生干扰，证明此方法的专属性好。

2.2 线性关系考察

取“1.2.2”项下对照品储备液，分别精密吸取人参皂苷Rg1、Re、Rd对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于10mL容量瓶中，分别得到2.00、4.00、8.00、12.00、16.00、20.00μg·mL-1的人参皂苷Rg1对照品溶液，3.00、6.00、12.00、18.00、24.00、30.00μg·mL-1的人参皂苷Re对照品溶液和5.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00μg·mL-1的人参皂苷Rd对照品溶液，用0.22μm滤膜过滤，取续滤液按照“1.2.1”的色谱方法进样分析，记录峰面积。分别以人参皂苷Rg1、Re、Rd浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别得到人参皂苷Rg1标准曲线方程为Y=487777X-261994(R2=0.9998）、人参皂苷Re标准曲线方程为Y=274628X-146458(R2=0.9995）、人参皂苷Rd标准曲线方程为Y=248940X-66784 (R2=0.9995）。标准曲线分别见图2、3、4。

图2 HPLC法测定人参皂苷Rg1标准曲线

图3 HPLC法测定人参皂苷Re标准曲线

图4 HPLC法测定人参皂苷Rd标准曲线

由图2～4可知，人参皂苷Rg1、Re、Rd分别在2.00～20.00、3.00～30.00、5.00～50.00μg·m L-1浓度范围内线性关系良好。

2.3 精密度考察

2.3.1 日内精密度

分别配制浓度为2.00、8.00、16.00μg·mL-1的人参皂苷Rg1对照品溶液，3.00、12.00、24.00μg·mL-1的人参皂苷Re对照品溶液，5.00、20.00、40.00μg·mL-1的人参皂苷Rd对照品溶液，平行配制6份，按照“1.2.1”的色谱条件进样，记录峰面积，计算人参皂苷Rg1、Re和Rd日内精密度，结果均小于2%，符合方法学考察。

2.3.2 日间精密度

分别配制浓度为2.00、8.00、16.00μg·mL-1的人参皂苷Rg1对照品溶液，3.00、12.00、24.00μg·mL-1的人参皂苷Re对照品溶液，5.00、20.00、40.00μg·mL-1人参皂苷Rd对照品溶液，平行配制6份，按照“1.2.1”的色谱条件进样，连续3d，记录峰面积，计算人参皂苷Rg1、Re和Rd日间精密度，结果均小于2%，符合方法学考察。

2.4 稳定性实验

按照“1.2.3”项下的供试品溶液配制方法平行配制6份溶液，按照“1.2.1”的色谱条件分别在0、2、4、6、8、12和24h进样，记录峰面积，计算人参皂苷Rg1、Re和Rd的RSD值，结果分别为0.45%、0.19%、0.20%，均小于2%。结果表明，人参皂苷Rg1、Re和Rd在24 h内稳定性良好。

2.5 加样回收率

取样品6份，每份约0.75g（约含人参皂苷Rg1、Re、Rd分别为0.5、0.25、1.0mg），精密称定，置于10mL容量瓶中，加0.1mol·L-1 HCl溶液超声溶解并稀释至刻度，精密吸取1mL置于5mL容量瓶中，分别依次加入人参皂苷Rg14.00μg·mL-1、人参皂苷Re6.00μg·mL-1和人参皂苷Rd 10.00μg·mL-1对照品溶液1mL，加0.1mol·L-1 HCl溶液超声稀释至刻度，摇匀，照“1.2.1”的色谱条件进样，记录峰面积，按式（1）计算加样回收率。

结果表明，平均回收率在80%～120%之间，且RSD值小于2%，符合方法学考察要求。

2.6 含量测定

按照“1.2.3”项下方法制备3批供试品溶液，按照“1.2.1”项下条件进样分析，通过峰面积值计算每粒缓释胶囊中3种人参皂苷的含量，结果显示，人参皂苷Rg1含量分别为0.51、0.57、0.54mg·粒-1，其平均含量为0.54mg·粒-1；人参皂苷Re含量分别为1.35、1.31、1.34mg·粒-1，其平均含量为1.33mg·粒-1；人参皂苷Rd含量分别为2.15、2.17、2.11mg·粒-1，其平均含量为2.14mg·粒-1。

3、结论

本文采用HPLC法建立了参蒲益智缓释胶囊中3种人参皂苷含量的测定方法，并进行了相应的方法学考察。结果表明，人参皂苷Rg1、Re和Rd在其浓度范围内线性关系良好，方法学考察结果也均符合要求，准确度高，重现性好。本实验为参蒲益智缓释胶囊的后续研究提供了参考。

参考文献:

[1]宋齐.人参化学成分和药理作用研究进展[J].人参研究, 2017,29(2):47-54.

[2]沈连生.神农本草经中药彩色图谱[M].北京:中国中医药出版社, 1996.

[3]贡盈歌.人参总皂苷对阿尔茨海默病干预作用的代谢组学和色氨酸代谢通路研究[D].沈阳药科大学, 2015.

[5]陈德云,李发靖,陈鹏,等.人参皂苷抗氧化应激损伤作用及其作用机制的研究进展[J].中国药理学与毒理学杂志, 2019, 33(10):830-831.

[6]董强,郭起浩,罗本燕,等.卒中后认知障碍管理专家共识[J].中国卒中杂志, 2017, 12(6):519-531.

基金资助:黑龙江省自然科学基金联合引导项目(合同编号:LH2022H087);黑龙江省博士后资助项目(LBH-Z20096) 黑龙江中医药大学科研基金(2019XY03);

文章来源:谢海龙,孟怡彤,董晏含等.HPLC法测定参蒲益智缓释胶囊中人参皂苷Rg1､Re､Rd含量[J].化学工程师,2023,37(10):25-27+20.