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醇类免洗手消毒液毒理学安全性研究

2021-11-10 218 上传者：管理员

摘要：目的评估2种醇类免洗手消毒液的安全性。方法选择市售常见醇类免洗手消毒液A和B,参照《消毒技术规范》进行急性经口毒性试验、一次完整皮肤刺激试验、皮肤变态反应试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和亚急性经口毒性试验。结果免洗手消毒液A小鼠急性经口毒性半数致死量(LD50)为5815mg/kg体重,大鼠急性经口LD50为5803mg/kg体重;免洗手消毒液B大鼠、小鼠急性经口毒性LD50均大于5000mg/kg体重。一次完整皮肤刺激试验最高皮肤刺激反应积分均值均为0.3,皮肤刺激强度分级均属无刺激性,均未见皮肤变态反应。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果均为阴性。免洗手消毒液A亚急性经口毒性试验除中、高剂量组雌性大鼠血清谷草转氨酶高于阴性对照组（P<0.05）,其他各项指标均未观察到明显毒性反应。免洗手消毒液B亚急性经口毒性试验各项指标均未见明显毒性反应。结论2种免洗手消毒液在本实验剂量范围内使用均相对安全。

关键词：
安全性
手消毒液
杀菌效果
毒理学
病原微生物传播
醇类
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醇类免洗手消毒液可快速灭活手部潜在有害微生物，且安全有效[1]。保持手部卫生对阻断环境中病原微生物传播，降低相关疾病的发病率具有重要作用[2]。免洗手消毒液虽然具有良好的杀菌效果[3]，但是使用后会在皮肤表面大量残留，可能对健康造成影响[4]。有研究在一些消毒液中检出高浓度甲醇[5]，甲醇中毒以中枢神经系统损害、眼部损害和代谢性酸中毒为主要特征。本研究采用急性经口毒性试验、一次完整皮肤刺激试验、皮肤变态反应试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和亚急性经口毒性试验评估市面上2种常见醇类免洗手消毒液的安全性。现报道如下。

1、材料与方法

1.1 实验样品

选择市售醇类免洗手消毒液A和B;A为微黄色透明液体，有效成分为异丙醇，含量为70.7%，由北京某有限公司提供；B为无色透明液体，有效成分为乙醇和三氯羟基二苯醚，含量分别为56.4%和0.24%，由杭州施康消毒用品有限公司提供。以蒸馏水为溶媒将A和B原样配制成实验剂量供试。

1.2 实验动物

实验用ICR小鼠和SD大鼠均由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号为SCXK（沪）2017-0005。健康成年、皮肤完好的新西兰兔和白色DHP豚鼠，由新昌县大市聚镇欣健兔场提供，实验动物生产许可证号为SCXK（浙）2015-0004。实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，动物饲料执行标准GB14924.1—2001《实验动物配合饲料通用质量标准》。环境条件：屏障环境，温度20～24℃，相对湿度40%～70%。实验动物实验前在动物房环境适应4d后进行试验。实验动物使用许可证号为SYXK（浙）2018-0018。

1.3 实验方法

参照《消毒技术规范》[6]分别进行急性经口毒性试验、一次完整皮肤刺激试验、皮肤变态反应试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和亚急性经口毒性试验，并评价结果。

1.3.1 急性经口毒性试验

大鼠、小鼠分别进行试验，染毒前禁食过夜，不限制饮水。免洗手消毒液A采用概率单位-对数图解法试验，取50只动物，雌雄各半，随机分为3000、5000、6000、8000和10000mg/kg体重5个剂量组。免洗手消毒液B采用一次最大限度试验，取20只动物，雌雄各半，剂量为5000mg/kg体重。采用一次经口灌胃方式，按10mL/kg体重给予染毒量，染毒后继续禁食3h。灌胃后观察动物的中毒表现和死亡情况14d，计算半数致死量（medianlethaldose,LD50），确定急性毒性分级[6]，并对死亡动物和观察期满处死的动物进行尸体解剖，发现异常的组织或脏器则进一步作组织病理学检查。

1.3.2 一次完整皮肤刺激试验

2种免洗手消毒液试验方法相同。将免洗手消毒液0.5mL直接涂于新西兰兔一侧面积为2.5cm×2.5cm的去毛完整皮肤上，用一层无刺激油纸覆盖，再用无刺激胶布固定。敷贴4h后，用温水去除残留物。另一侧去毛皮肤作为空白对照。除去残留物后1h、24h和48h分别观察皮肤局部反应，进行皮肤刺激反应评分和刺激强度分级[6]。

1.3.3 皮肤变态反应试验

2种免洗手消毒液试验方法相同。64只白色DHP豚鼠，雌雄各半，随机分为阴性对照组、阳性对照组、免洗手消毒液A组和免洗手消毒液B组。实验组诱导接触：先将免洗手消毒液原液0.5mL直接涂在豚鼠左侧面积为2cm×2cm的去毛区皮肤上，用一层无刺激油纸覆盖，再用无刺激胶布固定。阳性对照组用0.5mL0.2%的2,4-二硝基氯苯的丙酮麻油溶液（V丙酮∶V麻油=1∶1）涂抹。染毒均持续6h。第7天和第14天相同方法重复1次。诱导阶段阴性对照组不作处理。实验组激发接触：末次诱导后的第14天，将消毒液原液0.5mL直接涂于右侧去毛区皮肤上，用一层无刺激油纸覆盖，再用无刺激胶布固定。阳性对照组用0.5mL0.1%的2,4-二硝基氯苯的丙酮麻油溶液（V丙酮∶V麻油=1∶1）涂抹。染毒均持续6h。激发阶段阴性对照组处理同实验组。每次去除覆盖物后均用温水洗去残留物，按不同组别、不同性别分笼群养。去除覆盖物后24h和48h观察皮肤反应并评分[6]，计算致敏率。致敏率（%）=（评分≥1分的动物数/动物总数）×100%。

1.3.4 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

取80只小鼠，雌雄各半，随机分为8组。根据小鼠急性经口毒性试验结果，免洗手消毒液A设291、1163和2908mg/kg体重3个剂量组，免洗手消毒液B设500、2000和5000mg/kg体重3个剂量组。阳性对照组给予环磷酰胺（60mg/kg体重），阴性对照组给予蒸馏水。间隔24h二次给受试物，第二次给受试物后6h处死动物，取胸骨骨髓制片，甲醇固定，吉姆萨染色。观察镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞（polychromaticerythrocyte,PCE），计算微核（micronucleus,MN）千分率（MN‰），观察PCE与成熟红细胞（normochromaticerythrocyte,NCE）比值（计数200个PCE）。

1.3.5 亚急性经口毒性试验

2种消毒液试验方法相同。SD大鼠48只，随机分4组，每组12只，雌雄各半，2只一笼饲养，自由进食、饮水。设高、中、低3个剂量组，分别为1.00、0.20和0.04g/kg体重；阴性对照组给予蒸馏水。各实验组按1.0mL/100g体重经口灌胃，每天灌胃1次，每周称体重，并按体重调整受试物的量。试验期为28d，末次染毒后禁食过夜，颈动脉取血，采用AccuteTBA-40FR全自动生化分析仪测定血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血糖（GLU）、尿素氮（BUN）、三酰甘油（TG）、肌酐（CR）和总胆固醇（TC）。对每只大鼠进行脏器大体观察，取肝、肾和脾称重，并计算脏体比，取肝、肾、肾上腺、脾、胃、肠、睾丸（卵巢）、脑、心和肺进行石蜡切片，苏木精-伊红染色，光镜检查。

1.4 统计分析

采用SPSS19.0软件统计分析。定量资料服从正态分布采用均数±标准差描述，组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。微核率比较采用广义线性模型，模型总体检验采用似然比检验，系数检验采用Wald检验。检验水准α=0.05。

2、结果

2.1 急性毒性经口试验结果

大鼠和小鼠染毒后的反应相似。免洗手消毒液A染毒后，各剂量组动物约1min后出现震颤、四肢发抖等反应，5～10min后部分动物出现昏睡，其中有部分动物逐渐恢复正常，部分动物死亡，动物大体解剖均未见明显异常。小鼠急性经口LD50为5815mg/kg体重（95%CI:5357～6296mg/kg体重），大鼠急性经口LD50为5803mg/kg体重（95%CI:5367～6259mg/kg体重），属于实际无毒类。免洗手消毒液B染毒后，未见动物出现不良反应和死亡，大体解剖未见明显病理改变。这2种免洗手消毒液对大鼠、小鼠急性经口毒性LD50均大于5000mg/kg体重，属于实际无毒类。

2.2 一次完整皮肤刺激试验结果

免洗手消毒液A在1h、24h和48h皮肤刺激反应积分均值分别为0.3、0.3和0，皮肤刺激强度分级属无刺激性。免洗手消毒液B在1h、24h和48h皮肤刺激反应积分均值分别为0、0.3和0，皮肤刺激强度分级属无刺激性。

2.3 皮肤变态反应试验结果

阳性对照组豚鼠皮肤24h和48h致敏率均分别为87.50%和68.75%，阴性对照组、免洗手消毒液A组和免洗手消毒液B组豚鼠皮肤24h和48h均未见明显红斑及水肿，致敏率均为0。

2.4 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

雌性和雄性小鼠8组MN‰差异均有统计学意义（χ2=319.660、415.346，均P<0.001),PCE/NCE均>0.1。进一步比较显示，雌性和雄性小鼠阳性对照组MN‰均高于阴性对照组（P<0.05）；其他组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.5 亚急性经口毒性试验结果

雄性和雌性大鼠7组初始体重、终末空腹体重、肝体比、肾体比和脾体比差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。雌性大鼠7组血清AST差异有统计学意义（P<0.05）；进一步比较显示，免洗手消毒液A中、高剂量组血清AST高于阴性对照组（P<0.05）。各组血清TP、ALB、GLB、ALT、GLU、BUN、TG、CR和TC差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3。大体解剖均未发现明显异常。镜下检查发现2种免洗手消毒液高剂量组和阴性对照组大鼠的肝、肾、肾上腺、脾、胃、肠、睾丸（卵巢）、脑、心和肺组织病理观察结果基本一致，均未出现明显的组织病理改变。

3、讨论

研究结果显示，免洗手消毒液A和B属于实际无毒类，在本次试验剂量范围内使用相对安全，不会发生急性中毒，对皮肤无刺激性和致敏作用。但是在急性经口毒性试验中，给予免洗手消毒液A的大鼠和小鼠出现了震颤、四肢发抖等中毒症状，部分出现昏睡，甚至死亡，提示免洗手消毒液A的使用安全性是相对的，在大剂量使用的条件下有急性中毒可能性，可能是由消毒剂中高浓度的异丙醇引起的，排除甲醇中毒的可能性。

免洗手消毒液A和B小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果均为阴性，表明2种免洗手消毒液在本次试验剂量范围内无遗传毒性。雌性大鼠免洗手消毒液A中、高剂量组AST水平明显高于阴性对照组，提示接触高剂量的消毒剂A可能不安全。低剂量组免洗手消毒液A各项指标均未观察到明显毒性反应，提示其无可见不良作用水平（noobservedadverseeffectlevel,NOAEL）为0.04g/kg体重。免洗手消毒液B大鼠亚急性经口毒性试验各剂量组指标均未见明显毒性反应，最高剂量为1.00g/kg体重，即NOAEL为1.00g/kg体重。本实验条件下，免洗手消毒液A除了亚急性经口毒性试验中、高剂量组雌性大鼠血清谷草转氨酶异常升高外，未见其他明显异常和毒性反应；未见免洗手消毒液B对实验动物有明显异常和毒性反应。

免洗手消毒液B是一种复方免洗手消毒液[7]，对细菌繁殖体和真菌具有良好的杀灭作用，本实验提示该免洗手消毒液相对安全。熊俊超等[8]研究发现复方免洗手消毒液（有效成分为氯六亚甲基双胍、二氯苯氧氯酚和乙醇等）杀菌快速持久，无毒，无刺激性，安全性较好。有研究证明醇与醇、醇与一些常见消毒剂等均有较好的协同作用[9]，且较高浓度醇对人体可能存在潜在危害，因此选择含较低浓度醇的复方手消毒液用于手部皮肤消毒，不仅消毒效果更好，也更加安全。

参考文献:

[1]王钰莹,赵丽平,曹明楠,等.世界卫生组织推荐的免洗手消毒液的配制[J].临床药物治疗杂志,2020,18(2):87-89.

[3]高操,刘永刚,孙大伟,等.醇类免洗手消毒液和无醇类免洗手消毒液对多药耐药菌的杀菌效果比较[J].中华医院感染学杂志,2017,27(5).984-987.

[6]中华人民共和国卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范[S].北京:中华人民共和国卫生部,2002:126-136.

[7]朱一凡,潘协商,许激,等.复方免洗手消毒液的消毒性能及毒性观察[J].中国卫生检验杂志,2011,21(4):885-887.

[8]熊俊超,陈占,朱广东.抗菌复方免洗手消毒液的研制及其效果和安全性评价[J].精细与专用化学品,2017,25(9):46-52.

[9]银燕,张津为.醇类消毒剂及其制剂的发展[J].中国消毒学杂志,2013,30(11):1062-1065.

文章来源：严峻,蔡德雷,夏勇,傅剑云,张世鑫,孟真,郑云燕.醇类免洗手消毒液毒理学安全性研究[J].预防医学,2021,33(11):1182-1186.