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iNOS在老年NSCLC患者中表达及其与患者临床和预后

2023-11-09 110 上传者：管理员

摘要：目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择行手术切除的老年NSCLC患者100例，取患者癌组织及其癌旁正常组织。收集患者临床病理特征，包括性别、吸烟史、肿瘤大小、病理类型、组织学分化、TNM分期和淋巴结转移。比较癌组织与癌旁正常组织iNOS阳性表达情况；比较不同病理特征iNOS阳性表达情况；生存曲线分析NSCLC患者iNOS表达与预后关系；采用多因素Logistic回归分析影响预后独立危险因素。结果癌组织iNOS阳性表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。不同性别、吸烟史、肿瘤大小、组织学分化iNOS阳性表达比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ～Ⅳ期iNOS阳性表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05);淋巴结转移iNOS阳性表达显著高于无淋巴结转移(P<0.05)。NSCLC患者iNOS阳性表达总生存期(OS)时间显著短于iNOS阴性表达(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析显示，Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移和iNOS阳性表达为影响预后独立危险因素。结论老年NSCLC患者iNOS高表达，且与患者临床分期、淋巴结转移和预后有关，且iNOS高表达为影响预后独立危险因素。

关键词：
临床
淋巴结转移
肺癌
诱导型一氧化氮合酶
非小细胞肺癌
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肺癌是常见的恶性肿瘤，随着环境污染、生活方式改变及老龄化加剧，其患病率在我国呈上升趋势，严重影响人们身心健康[1,2]。据统计表明，非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌总数80%以上，在全球范围内具有较高的发病率和病死率，不仅影响患者生存质量，且威胁患者生命健康[3]。NSCLC作为最常见的肺癌组织学类型，具有肿瘤生长速度快的特点，且肿瘤细胞容易从原发部位扩散及转移至远隔器官，从而造成患者预后不佳[4,5]。大部分NSCLC由于症状较为隐匿，导致患者确诊时病情已处于中晚期[6]。故而，寻找新的分子标志对NSCLC高危人群进行有效识别，深入了解NSCLC的生物学机制，对NSCLC患者的治疗及预后改善具有重要意义。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)可催化合成一氧化氮，在多种恶性肿瘤中异常表达，且与其预后密切相关。目前，关于iNOS在NSCLC患者中表达研究甚少，缺乏可靠的临床参考价值。本研究旨在探讨iNOS在老年NSCLC患者中表达及其与临床病理特征和预后的关系。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选择杭州市第三人民医院于2018年1月至2019年1月行手术切除的老年NSCLC患者100例，取患者癌组织及其癌旁正常组织；年龄65～83岁，平均(74.32±6.28)岁。纳入标准：(1)依据《中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肺癌诊疗指南(2018版)》[7]标准；(2)经术后病理学证实为NSCLC;(3)具备完整的临床和随访资料。排除标准：(1)伴其他部位恶性肿瘤者；(2)伴重要脏器衰竭，如严重呼吸道疾病、肾病、肝病或无法控制的糖尿病、高血压等慢性疾病者；(3)术前接受过放化疗者；(4)精神疾病者。

1.2 免疫组化法测定iNOS蛋白表达

采用免疫组织化学法测定iNOS蛋白表达。鼠抗人iNOS多克隆抗体(英国Abcam公司),SP免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司),二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。具体方法：标本均经中性甲醛固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片4 μm。经60 ℃烤片切片30 min, 二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，采用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，抗原采用柠檬酸钠缓冲液煮沸修复，放于室温环境下自然冷却。再以5%山羊血清室温封闭30 min, 滴加iNOS蛋白一抗，4 ℃孵育过夜。再滴加辣根过氧化物酶标记的二抗，放置于37 ℃孵育20 min。采用DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察。

1.3 结果判定

每张切片随机选取200倍不重叠视野5个，计数阳性细胞数和细胞总数，统计阳性细胞比例。iNOS蛋白定位于细胞核，主要呈浅黄色至棕黄色颗粒状。按照阳性细胞比例和染色强度评分乘积综合评价。阳性细胞比例：0分为无阳性细胞；1分为阳性细胞≤10%;2分为阳性细胞11%～30%;3分为阳性细胞31%～50%;4分为阳性细胞>50%。染色强度：0分为阳性细胞无着色；1分为阳性细胞浅黄色；2分为阳性细胞棕黄色；3分为阳性细胞棕褐色。以总分≤3分表示(-),4～6分表示(+),7～9分表示(++),≥10分表示(+++)。

1.4 随访情况

随访至2023年1月31日，通过查阅医院病案记录、电话、微信及门诊等方式进行随访，记录患者总生存期(OS)。

1.5 统计学处理

采用SPSS25.0软件进行t、χ2检验，绘制生存曲线并行多因素Logistic回归分析。

2、结果

2.1 癌组织与癌旁组织iNOS阳性表达比较

癌组织iNOS阳性表达[65例(65.00%)]显著高于癌旁组织[17例(17.00%);χ2=47.623,P<0.05]。

2.2 不同病理特征iNOS阳性表达比较

不同性别、吸烟史、肿瘤直径、组织学分化iNOS阳性表达差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ～Ⅳ期iNOS阳性表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴结转移iNOS阳性表达显著高于无淋巴结转移(P<0.05),见表1。

2.3 NSCLC患者iNOS表达与预后关系

随访至2023年1月31日，随访时间19～60个月。NSCLC患者iNOS阳性表达OS时间(30个月)显著短于iNOS阴性表达(39个月，P<0.05),见图1。

2.4 多因素Logistic回归分析影响预后独立危险因素

Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移和iNOS阳性表达为影响预后独立危险因素(P<0.05),见表2。

表1 不同病理特征NSCLC患者iNOS阳性表达比较[n(%)]

图1 NSCLC患者iNOS表达与预后关系

表2 多因素Logistic回归分析影响NSCLC患者预后独立危险因素

3、讨论

目前，关于NSCLC具体发病机制尚未完全阐明，而NSCLC的侵袭性转移是导致患者最主要死亡原因，且是当今NSCLC治疗的重要与难点[7,8,9]。现阶段，针对NSCLC尚无特效的治疗手段，且患者5年生存率较低[10,11,12]。因此，早期诊断和治疗NSCLC患者是提高生存率的关键[13,14]。

近年来研究发现，肺内的巨噬细胞存在两种类型，其中M1型巨噬细胞呈iNOS阳性，而argenase 1呈阴性；其能够被脂多糖、肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ激活，从而产生炎性介质白细胞介素-12、一氧化氮和iNOS,其中一氧化氮能够与过氧化物结合，从而形成一种细胞毒性过氧亚硝酸盐[15]。iNOS在正常生理条件下几乎不表达，而在病理状态下及在诱导因素如脂多糖、白细胞介素等细胞因子诱导下，使iNOS诱导合成一氧化氮相比于正常生理条件下的一氧化氮浓度高1 000倍左右，且认为iNOS诱导生成的一氧化氮可能在肿瘤发生、发展中具有重要促进作用。近年来，研究显示iNOS在多种肿瘤中异常表达，且认为iNOS对多种恶性肿瘤的血管生成、侵袭及生长具有一定影响[16,17]。王光辉等[18]研究表明，收集148例不同乳腺病理组织及正常乳腺组织20例，其中iNOS在乳腺正常组织中无阳性表达；而在浸润性乳腺癌组织中阳性率为78.8%,在原位癌组织中阳性率为52.5%,在乳腺不典型增生组织中阳性率为25.0%,且存在显著差异；5年无病生存率，原位癌中iNOS染色阳性低于阴性，可见在乳腺癌早期阶段iNOS即表达出现升高，其可作为乳腺癌早期诊断及评估预后的一种潜在指标。王莉等[19]研究表明，iNOS在宫颈癌组织中呈过表达，且与淋巴结转移密切相关，认为可作为宫颈癌生物学行为及预后评估的指标。赵娜等[20]研究表明，收集行手术切除的卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢组织96例患者临床资料，恶性肿瘤患者中iNOS阳性表达率高于交界性肿瘤患者、良性肿瘤患者及正常卵巢组织患者，且恶性肿瘤患者中不同临床分期和病理分级间iNOS蛋白表达具有显著差异，且分期越高iNOS蛋白阳性率越高，可见卵巢上皮性肿瘤患者中iNOS蛋白呈高表达，认为其可成为基因治疗的靶点，对卵巢上皮性肿瘤患者发生、发展及预后具有预测作用。

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