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结直肠癌组织中DDX5表达水平及其与患者预后的相关性

2021-03-05 627 上传者：管理员

摘要：目的:探讨RNA解螺旋酶DDX5(p68)在结直肠癌(colorectalcancer,CRC)组织中的表达水平及其与结直肠癌患者预后的相关性。方法:选取2015年03月至2016年11月陆军军医大学第二附属医院收治的接受外科手术初治的213例结直肠癌患者,收集其临床资料、肿瘤组织石蜡标本;采用免疫组化方法检测肿瘤组织中DDX5蛋白表达情况;随访3年,分析DDX5蛋白表达水平与结直肠癌患者预后的关系。结果:截止2019年11月30日,共有202例患者完成随访;死亡23例,复发44例,共计67例,预后不良率为33.17%;预后不良组在肿瘤分化程度上低于预后良好组,淋巴结转移情况、肿瘤浸润型比例、临床分期上高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组肿瘤组织中DDX5蛋白表达水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);以DDX5表达水平中位数为截点,DDX5高表达组3年无进展生存率为58.88%,低于DDX5低表达组的78.30%,DDX5高表达组疾病进展风险显著高于DDX5低表达组(P=0.002);多因素Logistic分析显示,肿瘤低分化(OR=14.097)、淋巴结N1-2转移(OR=118.602)、高临床分期(OR=1525.596)、浸润型生长(OR=2.533)及DDX5高表达(OR=8.958)是影响结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论:结直肠癌组织中DDX5蛋白高表达可导致患者预后不良,可能是评估结直肠癌预后的一项生物标志物。

关键词：
DDX5蛋白
恶性肿瘤
相关性
结直肠癌
预后
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结直肠癌(CRC)是消化系统常见恶性肿瘤,其发病率(每100000人中有376.3人)和死亡率(每100000人中有191.0人)均在中国位居前列[1]。随着外科手术、放射疗法、化学疗法和靶向疗法的进步,结直肠癌的治疗取得了重大进展。近年来,已经提出了几种预后标志物,例如SERPINA4、c-MYC和β-catenin作为结直肠癌的免疫组化标志物,而已建立的诊断和预后评估的血清生物标志物包括碳水化合物抗原19-9(carbohydrateantigen19-9,CA19-9)、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)等,在结直肠癌患者术后监测中具有重要价值[2,3]。但上述指标在评估预后方面效果较差,临床上仍然需要一种有效的生物标志物,以对手术切除后处于高风险或低风险的患者进行分类。DEADboxp68RNA解旋酶(DDX5)被认为是DEADboxRNA解旋酶家族的原型成员。最近的研究表明[4,5],DDX5在多种类型的癌症中异常表达,包括结肠癌、乳腺癌、肺癌、皮肤鳞状细胞癌,这表明DDX5在癌症的发展和进程中起着重要的作用。但关于DDX5在结直肠癌中的预后价值,目前信息仍有限。为此笔者团队进行了一项随访研究,报告如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

纳入标准:①经结肠镜取活检病理确诊为结直肠癌;②未合并急性肠梗阻,可接受限期外科手术治疗;③术后病理证实为结肠腺癌,临床分期为Ⅰ-Ⅲ期;④均行根治性肿瘤切除术,围手术期未发生严重的并发症;⑤临床资料完整,能够坚持随访并配合术后化疗;⑥患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准:①合并其他部位肿瘤者;②存在严重的心肝肺肾功能障碍,预计生存期不足6个月者;③远处转移者。共纳入2015年03月至2016年11月我院收治的接受外科手术初治的213例结直肠癌患者,其中男115例,女98例;年龄48～71岁,平均年龄(59.92±7.66)岁。结肠癌154例,直肠癌59例。结肠癌患者均行结肠癌根治术;直肠癌中有11例因肿瘤距肛缘较近行Miles手术,其余48例均行Dixon术式。

1.2资料收集

收集患者性别、年龄、病程、肿瘤大体类型(隆起型、浸润型、溃疡型)、分化程度(高分化、中分化、低分化)、淋巴结转移情况(N0、N1、N2)、临床分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、术后CEA、CA19-9水平、肿瘤部位(左半结肠、横结肠、右半结肠、乙状结肠、直肠)、手术方式、是否行术前新辅助化疗、术后化疗方案等。

1.3免疫组化染色DDX5定量分析

按照试剂盒说明操作,将肿瘤组织冲洗干净后,梯度酒精脱水,二甲苯透明,以甲醛固定、石蜡包埋制作切片;切割成厚5μm的切片。切片完成后脱蜡至水,3%双氧水室温孵育10min,PBS液冲洗5min,连续冲洗3次;滴加适当比例的稀释液,37℃下孵育2h,再次经PBS液冲洗5min,连续3次;25℃孵育2h,4℃过夜,PBS洗2min,共3次;滴加针对DDX5的兔单克隆抗体,室温下20min,PBS洗2min,共3次;滴加SABC复合物,室温20℃,PBS洗5min,共4次。DAB染色10min左右,经蒸馏水多次洗涤,苏木素复染,脱水,透明,中性树胶封片,而后在显微镜下观察。使用LeicaQWinPlusv3软件对免疫组织化学染色结果进行定量分析,每组选3张切片,每张切片在肿瘤组织区域随机选取6个高倍视野(×200),使用Image-ProPlusv6.0软件(MediaCyberneticsInc,美国马里兰州贝塞斯达)测量每个图像的积分光密度(IOD),DDX5的表达水平由IOD表示。

1.4随访

患者从出院开始即进行随访,不良预后包括死亡和疾病复发/进展。复发包括局部复发和远处转移,局部复发包括局部淋巴结复发、吻合口复发等;远处转移包括血行转移和种植转移等。复发诊断主要依靠影像学、内镜检查及病理活检。末次随访截止时间为2019年11月30日。

1.5统计学方法

采用SPSS20.0软件进行数据分析,计量资料采用均数±标准差表示,组间比较采用t检验;计数资料采用例(百分比)表示,组间比较采用卡方检验;等级资料采用秩和检验;不同DDX5表达水平的无进展生存风险采用Kaplan-Meier生存曲线;影响结直肠癌患者预后的危险因素采用Logistic回归方程;P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1不同预后结果患者临床特征比较

随访期间有11例患者因各种原因退出随访,共202例完成了随访。截止末次随访时,死亡23例,复发44例。202例患者分为预后不良组和预后良好组,分析临床资料显示,预后不良组患者在肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、临床分期、肿瘤大体类型及DDX5表达水平上与预后良好组比较具有统计学差异(P<0.05),见表1。

2.2不同DDX5表达水平患者的预后对比

以DDX5表达水平中位数为截点,DDX5高表达组3年无进展生存率为58.88%,低于DDX5低表达组的78.30%,DDX5高表达组疾病进展风险显著高于DDX5低表达组(Log-rankχ2=9.297,P=0.002),见图1。

图1不同DDX5表达水平患者的无进展生存风险图

表1不同预后结果患者临床特征比较

2.3影响结直肠癌患者预后不良的危险因素分析

将表1中存在差异的相关指标进行赋值后,带入Logistic回归方程后显示,肿瘤低分化(OR=14.097)、淋巴结N1-2转移(OR=118.602)、高临床分期(OR=1525.596)、浸润型生长(OR=2.533)及DDX5高表达(OR=8.958)是影响结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),见表2。

3、讨论

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,在我国结直肠癌是城市人群发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤,每年以约4.2%的速度增长。控制发病率和降低病死率、改善预后是治疗的重点。

影响结直肠癌预后的因素众多,目前临床上主要以病理TNM分期作为预后预测的主要指标[6]。但是采用这种分期评估预后较为笼统,临床上迫切需要找到一种可靠的生物学指标来预测结直肠癌的发展、转移及复发风险。随着分子生物学研究的深入,有研究指出[7],RNA解螺旋酶DDX5(又称RNA解螺旋酶p68)参与了肿瘤细胞的多种生物学活动,如细胞增殖、凋亡、胚胎发育等。且关于癌基因的研究表明[8],DDX5对于PR、抑癌基因p53、肌源性调节蛋白MyoD等转录因子具有共同激活作用。已经证实DDX5在乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤组织中表达异常,参与了细胞增殖、迁移、细胞骨架重塑等多种生物学行为的调控,成为上述肿瘤诊断及预后评估的新标志[9]。

笔者在3年的随访研究中发现,本组结直肠癌患者术后复发率为21.78%,死亡率为11.39%,且以DDX5表达水平中位数为截点,DDX5高表达患者3年疾病进展风险高于DDX5低表达患者,与国内外报道的数据相符合[10]。对比分析不同预后的相关因素得出,肿瘤低分化、淋巴结N1-2转移、高临床分期、浸润型生长及DDX5高表达是导致结直肠癌患者预后不良的危险因素,进一步说明了DDX5与结直肠癌发生发展的关系。关于肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、浸润深度及肿瘤分期,由于已成公认,在此不做赘述。关于肿瘤大体类型方面,随访观察发现[11],隆起型瘤体生长缓慢,转移较晚,预后较好,5年生存率可达69.4%;其次为溃疡型;浸润型预后最差,5年生存率仅为48.5%。国外有学者也报道了膨胀性生长者5年生存率为67%,高于浸润型生长者40%[12]。关于DDX5蛋白的研究方面,本研究指出了预后较差的患者肿瘤组织中DDX5表达水平高于预后较好的患者。早期一项对24例结直肠癌组织和10例正常组织样本的研究发现[13],DDX5在结直肠癌组织中的表达水平显著高于正常组织。研究表明[14],DDX5的表达水平和原癌基因AKT表达强度呈正相关。原癌基因AKT的过度表达是结直肠癌肿瘤形成的早期事件,该基因调控数个下游靶基因,对于结直肠癌细胞的生长、增殖及存活起着重要作用。DDX5可增强AKT启动子的活性,通过调节AKT/FOX03a信号通路来调节肿瘤细胞增殖及存活。

由于业内对于DDX5的研究尚缺乏足够的报道,所以本研究的结论尚需要业内同行来进一步补充论证。此外,受到样本量和随访时间的限制,存在许多偏差影响了试验结果。另外,基础研究表明[15],DDX5磷酸化能够促进药物介导的结直肠癌细胞凋亡。通过体外激酶试验等技术研究发现[16],奥沙利铂能够激活p38MAP激酶,后者能够将DDX5磷酸化,而磷酸化的DDX5又反作用于奥沙利铂,提高其抗癌效果。这提示DDX5在作为预测预后的标志物之外还有可能作为结直肠癌的治疗靶点。

表2影响结直肠癌患者预后不良的Logistic回归分析

综上所述,肿瘤组织中DDX5蛋白高表达,结直肠癌的侵袭性高且患者预后不良,可能是评估结直肠癌预后的一项生物学标志物。

参考文献：

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