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试析基于五种生殖激素含量变化进行蓝狐发情期及妊娠期血清研究

2020-06-08 200 上传者：管理员

摘要：为探究发情期及妊娠期雌性蓝狐生殖激素的变化规律，选取11只繁殖期雌性蓝狐，采用放射免疫法（RIA）测定血清中雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、促卵泡素（FSH）、孕酮（P）以及催乳素（PRL）的含量。结果表明，促卵泡素和促黄体生成素在发情期及妊娠期血清中浓度一直处于较稳定水平，并呈波动式分泌，最大值分别为（2.18±0.69)U/L和（8.82±1.83)U/L，同种激素不同检测日期数据两两比较差异不显著（P>0.05）；雌二醇在发情期和妊娠期血清中浓度亦处于较稳定水平，最大值出现在发情第1天，为（27.73±23.19)ng/L，数据两两比较差异亦不显著（P>0.05）；孕酮在发情期维持较高水平，最大值在发情第3天，为（2.41±1.35）µg/L，之后在妊娠期持续下降，分娩当天达到最低点，为（0.13±0.14）µg/L，数据两两比较差异显著（P<0.05）；催乳素在发情期先下降，最低值为（0.15±0.04)U/L，第3天开始升高，并在妊娠期保持较高水平，到分娩时维持最高（0.21±0.05)U/L，数据两两比较差异不显著（P>0.05）。初步探索了5种激素含量在发情和妊娠期间的动态变化，为养殖蓝狐的生殖生理提供参考数据。

关键词：
促卵泡素
促黄体生成素
催乳素
发情期
妊娠期
孕酮
生理学
蓝狐
雌二醇
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蓝狐是季节性单次发情、自发性排卵动物，养殖蓝狐的发情期多集中在3至4月份，妊娠期平均为52d（布隆斯泰特等2010）。影响蓝狐发情的主要因素是光照，通过机体内分泌激素水平的变化进行调节（魏海军2000）。激素的测定为动物性器官活动、监测、发情、妊娠和健康等方面研究做出了巨大贡献，已成为动物生殖生理监测中不可或缺的手段之一。本研究检测蓝狐发情和妊娠期血清中有关激素浓度的变化，旨在了解其内分泌调控机制。

1、材料与方法

1.1实验材料

于2018年3至5月在哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司选取体况良好、发情正常的雌性蓝狐11只，标记为1～11号，常规饲养。通过外阴观测、阴道角化细胞检测、阴道电阻检测综合判定法，即外阴肿胀开始消退、阴道涂片可见大量角化细胞、阴道电阻值升高后回落，确定为发情最佳时期（布隆斯泰特等2010）。

1.2实验方法

采用静脉不抗凝采血法，对11只实验狐分别在发情并输精的第1、2、3、23和38天及分娩当天（无抗凝剂采血管）采血，每次采血5ml，采集的血液立即以离心机（型号为KL04A，购自湖南凯达科学仪器有限公司）3000r/min离心20min，后取上层血清置于﹣20℃冰箱中待测。血清送北京北方生物技术研究所采用放射性免疫法分别检测雌二醇（estradiol,E2）、促黄体生成素、促卵泡素、孕酮、催乳素含量。

1.3数据处理

采用SPSS22.0和Excel统计雌二醇、促黄体生成素、促卵泡素、孕酮、催乳素在血清中的平均水平，并对结果进行单因子方差分析。

2、结果

2.1检测结果

11只雌性蓝狐血清中雌二醇、促黄体生成素、促卵泡素、孕酮、催乳素含量变化情况及显著水平见表1。

促卵泡素和促黄体生成素在妊娠期一直处于波动式分泌。促卵泡素在发情并输精的第1天达到最大值，不同采样时间的数据两两比较差异均不显著（P>0.05）；促黄体生成素在第38天出现最大值，数据两两比较差异也均不显著（P>0.05）。说明发情期和妊娠期促卵泡素和促黄体生成素处于较恒定水平。

表1蓝狐血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡素、孕酮、催乳素变化情况及显著水平（平均值标准差）

雌二醇在发情的前3天保持较高水平，最大值出现在第1天，然后开始下降，数据两两比较差异不显著（P>0.05）。说明雌二醇在发情期和妊娠期处于恒定水平。

孕酮在前3天处于上升趋势，并在第3天达到最大值，之后逐渐降低，第23天后下降迅速，第52天时达到最低点。其中，第3天与第23天相比差异不显著（P>0.05），但与第38天相比差异显著（P<0.05）。数据两两比较差异显著（P<0.05）。说明蓝狐在发情期和妊娠前期孕酮值维持较高水平，妊娠后期显著下降，并在分娩当天达到最低。

催乳素先下降后升高，在第2天达到了最低点，随后开始上升，在第52天达到最高水平，催乳素数据两两比较差异不显著（P>0.05）。说明催乳素在发情期和妊娠期一直保持较高水平，虽有波动但差异不显著。

2.2激素水平与繁殖结果

检测的11只雌性蓝狐9只正常产仔，1只流产（2号），1只未怀孕（10号）。流产的2号狐激素水平变化与其他正常产仔雌性蓝狐一致，推测其流产原因与激素水平无关（图1）。未怀孕的10号蓝狐孕酮含量从发情第3天开始下降，与其他正常产仔雌狐不同，可能是导致其未能正常受孕的主要因素（图2）。

图12号雌性蓝狐激素变化

3、讨论

检测垂体分泌的促卵泡素和促黄体生成素可以观察卵巢功能的调节，观察促黄体生成素的峰值有助于排卵诊断，孕酮的测定可以了解动物黄体功能，雌二醇可以进一步了解卵泡与黄体功能，而催乳素对黄体的生成和稳定亦有重要作用，因此，本实验测定雌二醇、促黄体生成素、促卵泡素、孕酮、催乳素主要是对雌性蓝狐的内分泌进行全面了解，为养殖蓝狐生殖生理特征提供参考依据（周虚2015）。

图210号雌性蓝狐激素变化

3.1蓝狐孕酮的分泌特点

蓝狐是季节性单次发情，自发排卵动物。为了解蓝狐发情前期、发情期、妊娠期及分娩之后血清生殖激素浓度的变化规律，有学者对蓝狐外周血清生殖激素浓度进行了测定，发现在蓝狐体内孕酮的趋势与犬类很相似（Christieetal.1971);Moller(1973,1974）监测了雌性蓝狐交配前后血清中孕酮的变化规律，在发情期和妊娠前期孕酮含量维持较高水平，妊娠后期显著下降，并在分娩当天达到最低，本实验也证明了这一点。Valberg等（1992）研究表明，假孕蓝狐黄体期和怀孕蓝狐妊娠期的孕酮分泌在交配后8～12d内没有差异，但之后会发生显著性变化，这与10号未怀孕雌狐孕酮的变化趋势相同。李琦（2017）采用酶联免疫法测定了蓝狐粪便中孕酮浓度，发情期与妊娠期雌狐孕酮含量的标准差很大，这也与本实验所得数据间两两比较差异显著（P<0.05）相一致。

3.2促卵泡素和促黄体生成素波动分泌

戚汉君等（1995）检测了雌性川金丝猴的促卵泡素和促黄体生成素，怀孕早期促卵泡素和促黄体生成素浓度较高。Seal等（1979）对健康雌狼（Canislupus）血浆孕酮、促黄体生成素、雌二醇进行研究，揭示雌狼在发情期促黄体生成素脉冲式分泌。侯衍猛等（2006）对莱芜黑山羊（Caprahircus）促卵泡素和促黄体生成素的检测结果也显示，呈波动式分泌。这些都与本实验结果相吻合。本实验只针对发情期和妊娠期蓝狐的相关激素水平进行了检测，其他时期的激素水平还有待于下一步研究。

3.3雌二醇和孕酮的变化特点

有研究利用粪样对繁殖期麋鹿的雌二醇和孕酮等进行了检测，结果表明，其雌二醇水平，在发情期并无显著上升，仅在分娩前升高（李春旺等2000）。陈伟贞（2016）检测繁殖期雌性川金丝猴体内的雌二醇达到峰值时孕激素含量维持在较低水平。与本实验结果蓝狐在发情期和妊娠期雌二醇处于恒定水平、雌二醇和孕酮达到最大值后同时下降不甚相同，可能是物种之间的差异造成，因为蓝狐是季节性单次发情动物，缺乏上一个周期的黄体。

蓝狐作为季节性单次发情动物，与一年内具有多个发情周期的动物相比其生殖激素的分泌有所不同。不同生物学时期动物体内某种激素水平能够反映其相应的生理状态，因此通过相应的激素检测可以为了解动物的繁殖机理提供依据。

参考文献：

[1]布隆斯泰特,芬尼,哈里霍尔:刘志平译.2010.养殖狐指南.哈尔滨:东北林业大学出版社.

[2]陈伟贞.2016.川金丝猴雌二醇和孕酮检测方法评估及其在繁殖周期水平研究.武汉:华中农业大学硕士学位论文.

[3]侯衍猛,曹洪防,徐云华,等.2006.莱芜黑山羊发情周期中FSH､LH､E2和P的分泌规律.中国兽医学报,26(3):340-343.

[4]李春旺,蒋志刚,房继明,等.2000.麋鹿繁殖行为和粪样激素水平变化的关系.兽类学报,20(2):88-100.

[5]李琦.2017.不同饲养时期蓝狐粪便性激素水平变化的研究.哈尔滨:东北林业大学硕士学位论文.

[6]魏海军.2000.影响母狐繁殖力的因素.特种经济动植物,3(1):4-5.

[7]周虚.2015.动物繁殖学.北京:科学出版社.

赵耀,刘志平,韩欢胜.蓝狐发情期及妊娠期血清五种生殖激素含量变化[J].动物学杂志,2020,55(01):96-100.

基金:国家重点研发计划经济动物高效安全养殖技术应用与示范项目(No.2018YFDO502201-10).