人绒毛膜促性腺激素(HCG)作为胎盘合体滋养层细胞分泌的 一 种 糖 蛋 白 激 素,其分子结构复杂,相对分子质量为37.5×103,是由α和β亚基以非共价键结合而成的异二聚体｡其中HCGα亚基与促甲状腺激素(TSH)､促卵泡激素(FSH)､促黄体激素(LH)的α亚基高度同源,可导致交叉免疫反应;β亚基与其他激素不同,决 定 了 其 功 能 和 特 异 性[1-2]｡在 妊 娠 进 程的最早阶段,即受精卵形成的1周 内,β-HCG便 开 始释放,其水平在第2周左右显著攀升,妊娠期第2~3个月时达到峰值,随后逐渐下降,因其早期变化显著,是目前诊断早期妊娠最为敏感和可靠的指标[3-4]｡此外,β-HCG对于维持妊娠至关重要,它不仅 促 进 卵 巢黄体转变为妊 娠 黄 体,还 调 节 类 固 醇 激 素 的 合 成,从而保障受精卵着床,胚胎不受排斥[5]｡临床上通过检测患者的血清β-HCG值,来确认和监测妊娠状态,辅助诊断滋养细胞疾病,睾丸与卵巢生殖细胞肿瘤及评估唐氏综合征｡有研究 显 示,性激素水平受种 族､地 域､年 龄､性别等多种因素的影响[6],医学实验室开展检测项目通常是依据该项目说明书中推荐的生物学参考区间,笔者在与临床医生沟通及分析患者实验数据与实际情况时发现,说明 书 中 的 参 考 区 间 范 围 有 限,给 临 床 医生带来困扰,例如对围绝经期女性而 言,血 清β-HCG值升高是由怀孕引起,还是生理性升高有待商榷｡正确可靠的参考区间是临床医生给予患者精准诊治的前提和保障,实验室有必要为临床诊疗提供适宜本地区检 验 项 目 的 参 考 区 间｡GRONOWSKI[7]在2020年的研究 表 明,应当分别建立男性和女性的血清β-HCG参考区间,并且女性随着年龄的增长应当按年龄段建立参考 区 间,以 减 少 临 床 误 诊 风 险,为 此 有 必要开展此项研究｡参照我国行业标准 《临床实验室检验项目参考区间的制定》(WS/T402-2012)文 件,笔者初步建立本 实 验 室β-HCG的 参 考 区 间,并 探 讨 假阳性妊娠试验在非妊娠围绝经期和绝经后女性中的临床意义,为临床诊断提供参考依据｡

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2021年3月至2023年12月于本院体检中心 健 康 体 检 的854例非妊娠女性为研究对象｡年龄18~85岁,按年龄分为3组:18~<41岁组,41~55岁组,>55岁组｡根据我国行业标准 《临床实验 室 检 验 项 目 参 考 区 间 的 制 定》(WS/T402-2012)对健康个体的要求制订纳入及排除标准｡纳入标准:(1)≥18岁的非妊娠期女性,在上海杨浦地区居住1年以上;(2)无 恶 性 肿 瘤 及 放 化 疗 病 史;(3)无 自身免疫性疾病;(4)无甲状腺､下丘脑和垂体等内分泌疾病病史;(5)无 肝 肾 功 能 不 全 病 史;(6)无 卵 巢 综 合征､卵巢切除､滋 养 细 胞 疾 病 等 妇 科 病 史;(7)无 吸 烟史;(8)体重指数(BMI)<26kg/m2;(9)近3个月无激素治疗史,如口服避孕药,雌激素,孕激素｡排除标准:(1)妊娠和哺乳期女性;(2)BMI≥26kg/m2;(3)近3个月有激素治疗史:(4)脂血和溶血标本｡本研究取得本院医学科研伦理委员会的批准,符合伦理学标准｡

1.2仪器与 试 剂

东 曹AIA-2000全 自 动 免 疫 分 析仪与配套试剂(磁微粒酶免法)组成的检测β-HCG的检测系统经性能验证评价通过｡严格按照科室作业指导书进行仪器维护､保养和校准,每日进行高､低2个水平质控测定,检测项目质控在控,日间变异系数(CV)<5%｡该项目参加上海市临床检验中心组织的室间质量评价活动,回报结果均为满意,偏移可接受｡

1.3方法

空腹抽 取 外 周 静 脉 血4 mL于 无 抗 凝 剂真空采集管中,静置待完全凝集后,3000r/min离心10min｡采用日本东曹AIA-2000全自动免疫分析仪及配套的原装 试 剂 盒 检 测854例 非 妊 娠 女 性 的 血 清β-HCG水平｡

1.4判断离群值

参照《临床实验室检验项目参考区间》(WS/T402-2012)的制定:对 每 组 数 据 由 小 到 大排序,将疑似离群值的检测结果和其相邻值的差值(D)和数据全距(R)相除,若D/R≥1/3则考虑为离群值,将其所对 应 的 检 测 数 据 剔 除;若 有2个 以 上 疑似离群 值,可将最小的疑似离群值作如上处理,若都≥1/3,则需要将所有点都剔去;若都<1/3,则保留所有数据(R为数据中最大值与最小值之差)｡

1.5统计学处理

利用SPSS25.0软 件 进 行 数 据 统计和分析｡采用K-S检验进行数据正态性分析,呈正态分布的计量资料以x±s表示,按±1.96s计算参考区间;采用Spearman相关分析β-HCG水平与年龄的相关性;对于非正态分布的计量资料以中位数及百分位数表示｡以百分位数法按单侧95%计算参考区间｡两组比较采用非参数Mann WhitneyU检验,多组比较采用非参数KruskalWallisH检验,以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结 果

2.1研究对象的一般资料

选取854例非妊娠女性,通过踢出离群值及纳入排除标准最终选取有效数据800例作为研究对象,其中18~<41岁组334例,41~55岁组338例,>55岁组128例｡所有数据经K-S检验提示为非正态分布,后续所有数据统计均采用中位数及百 分 位 数 表 述,采用百分位数法确立参考区间,P95为单侧参考值上限｡

2.2血清β-HCG水平与年龄的相关性趋势

以年龄为X轴,β-HCG中位水平为Y轴做散点图,进行3次回归拟合分析年龄对β-HCG中位水平影响的显著性(拟合优度0.799,P<0.05),结果显示血清β-HCG水平随年龄增长呈现升高趋势,见图1｡利用Spearman相关分析计算β-HCG中位水平与年龄的相关系数为0.859(P<0.05)｡

图1 β-HCG中位水平与年龄关系

2.3不同年龄段血清β-HCG水平及参考区间

在本研究 中,经 非 参 数Kruskal Wallis H检 验 得 出β-HCG水平在不 同 年 龄 组 间 差 异 有 统 计 学 意 义(P<0.05),血清β-HCG平均水平随年龄增长呈升高趋势;采用百分位数法,按单侧95%建立了非妊娠女性血清β-HCG的参 考 区 间:18~<41岁0.00~3.03 mIU/mL,41~55岁0.00~4.61mIU/mL,>55岁0.00~6.80mIU/mL｡见表1｡

2.4不同来源的血清β-HCG参考区间比较

结果显示,不同来源的血清β-HCG参考区间有一定的差异,见表2｡

表1 不同年龄段血清β-HCG的水平及  参考区间

表2 不同来源的血清β-HCG参考区间的比较

2.5参考区间验证

根据我国行业标准《临床实验室检验项目参考区间的制定》(WS/T402-2012)中推荐的小样本验证方法,选取2023年12月体检中3个年龄段内表观健康成年非妊娠女性各20例,检 测 其 血清β-HCG值,将20例测定值与需要验证的参考区间比较,若落在参考限外的测定值不超过2例,则 该 参考区间验证通过可直接使用;若3个或3个以上测定值超出,则需要 重 新 筛 选20例,重 复 上 述 操 作;同 样若不超过2个测定值超出该参考区间,则 可 以 使 用;若仍然有3个或3个以上测定值超出,则该参考区间不适用,需重新建立｡本研究建立的参考区间验证通过,见表3｡

表3 参考区间的验证

3、讨 论

临床医生参考检验数据对疾病做出诊断和治疗,因此提供可靠准确的生物学参考区间至关重要｡我国发布的行业标准中尚未公布血清β-HCG的参考区间,多数实验 室 采 用 试 剂 说 明 书 中 推 荐 的 参 考 区 间,而试剂说明书中的参考区间多基于国外人群和人种研究,由于激素 具 有 人 群､地 域､年 龄､风 俗 习 惯 等 差异,故其参考区间不适合直接应用于本地区人群,这是本研究开 展 的 前 提 和 意 义｡本 研 究 参 照 行 业 标 准《临床实验室检验项目参考区间的制定》(WS/T402-2012)对所有数 据 进 行 离 群 值 剔 除,并 查 阅 病 史 结 合影像学资料,最 终 纳 入800例 可 行 数 据,在 对 数 据 的分析计算后得出参考区间,并通过验证｡在对所有数 据 整 理 分 析 中 发 现 围 绝 经 期 和 绝 经后女性血清β-HCG值 普 遍 高 于 绝 经 前 未 孕 女 性,且两组间比较差异有统计学意 义(P<0.05),这 与 本 研究所得参考区间18~<41岁0.00~3.03mIU/mL ,41~55岁0.00~4.61mIU/mL,>55岁0.00~6.80mIU/mL,具 有 一 致 性 趋 势,且3个 年 龄 段 内 的β-HCG平均水平分别为0.81mIU/mL､1.09mIU/mL､2.52 mIU/mL,这也证实了不同年龄段内的血清β-HCG水平确实 不 同,临床实验室应该分年龄段建立不同的参考 区 间｡本研究所得的参考区间在3个 年龄段内具有差异性,这可能是由于绝经后女性卵巢功能下降,雌激素和孕酮的负反馈抑制作用减 弱,导 致体内β-HCG和FSH水平升高｡

国外有报道,非妊娠期出现 血 清β-HCG结 果 阳 性[8],后 有 研 究 证 实 非 妊娠期血清β-HCG水平升高可能与垂体有关[9-10]｡目前,临床实验室中的检测手段不能区分不同的β-HCG分子及不同的生物活性形式｡因此,以化学发光技术为基础､依赖抗原-抗体反应的现有检测手段无法区分真正的目标β-HCG分子[11],这可能也是绝经后女性血清β-HCG低水平升高的原因之一｡本研究得出的参考区间(18~<41岁0.00~3.03mIU/mL ;41~55岁0.00~4.61 mIU/mL,>55岁0.00~6.80mIU/mL)与试剂说明书(日本东曹)中提供的参考区间0.0~0.5mIU/mL上限差异较大,可能与试剂生产国 家 人 群､气 候､饮食文化习惯差异等有关,且 说 明 书 中 的 参 考 区 间 是 基 于 全 年 龄 段 人 群 研究,未划分年龄段｡在《全国临床检验操作规程》中非妊娠女性参考区间为绝经前0.0~5.3mIU/mL,绝经后0.0~8.3 mIU/mL,与本研究所得的参考区间不同,本研究中按年龄段建立不同的参考区间是优势之处,不同的检测方法其灵敏度､特异度､抗干扰能力等不同,这 可 能 是 导 致 差 异 的 原 因 之 一｡TACKER[12]在2019年通过对8507例所有年龄段健康非妊娠女性的血清β-HCG结果进行分析所得参考区间为<40岁0~5mIU/mL,40~<50岁0~7mIU/mL,≥50岁0~13mIU/mL,本研究结果与上述参考区间下限相同,上限均小 于 上 述 研 究 结 果,可 能 与 本 研 究 中 的总研究 例 数 过 少 有 关｡SNYDER等[13]在2005年 对720例健康非妊娠女性的血清β-HCG水平研究发现,18~<41岁女性血清β-HCG水平为2.0~4.6mIU/mL;41~55岁 女 性 血 清β-HCG水 平 为2.0~7.7mIU/mL ;55岁以上女性血 清β-HCG水 平 为2.0~13.1 mIU/mL｡

本 研 究 所 得 参 考 区 间 与SNYDER等[13]相比,年龄段划分一致,总体趋势一致,但上限和下限均小于SNYDER等[13]的结果,这可能是由于国外人种､地域､检 测 仪 器 方 法 不 同 导 致 的 差 异｡综 上表明不同实验 室 间β-HCG的 参 考 区 间 不 同,建 议 患者固定实验室检测,有利于长期观察和比较｡本研究以年龄为X轴,β-HCG中位水平为Y轴做散点图,进行3次回归拟合分析年龄对β-HCG中 位 水 平 的 影响,显示非妊 娠 女 性 血 清β-HCG水 平 随 年 龄 增 长 呈现升 高 趋 势,故应该分年龄段制订更合理的参考区间｡而PATEL等[14]研究表明,血清FSH和β-HCG水平在55岁后不再继续增加,因此,β-HCG的年龄特异性参考区间不需要超过55岁,对于年龄≥55岁的女性,建议β-HCG的临界值为14.0mIU/mL｡本研究未增加足够 的 样 本 量,也 未 将 男 性 血 清β-HCG纳入其中,所得参 考 区 间 仅 为 女 性,未 完 全 满 足 临 床 需求,也未进一步探讨性别､年 龄 与β-HCG的 关 系,尚需更大人群样本量进行验证｡综上所述,本研究通过对800例成人非妊娠女性血清β-HCG结果 研 究 分 析,初步建立了本地区成人非妊娠女性 血 清β-HCG的 参 考 区 间,为 临 床 诊 疗 提供了有效帮助｡

参考文献:

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基金资助:上海市杨浦区重点学科项目(22YPZB03);上海市杨浦区科学技术委员会杨浦区卫生健康委员会科研项目(YPM202309);

文章来源:马小燕,庄文芳,褚闽.上海地区成年非妊娠女性血清β-HCG参考区间的建立[J].国际检验医学杂志,2025,46(05):595-598.