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健康人群外周血淋巴细胞微核率影响因素分析

2024-05-20 198 上传者：管理员

摘要：目的了解我国健康人群外周血淋巴细胞微核率及其影响因素，为控制微核率、促进健康提供依据。方法 2022年10月选取无职业性放射性物质和基因毒性物质接触史的成年人为研究对象。收集性别、年龄、文化程度、生活方式、饮食习惯、疾病史、用药史、职业史、工作压力等资料；采用胞质分裂阻断微核法检测外周血淋巴细胞微核率；相对数描述定性资料，Z检验比较两组间的微核率。采用Poisson回归模型分析其影响因素。结果共调查93人，男性30人，占32.26%。年龄≥40岁的24人，占25.81%,BMI≥24kg/m2的21人，占22.58%。微核率平均值为8.51‰±6.00‰,95.92%的人微核率低于20.00‰。女性[回归系数(beta coefficient,β)=0.454,95%CI:0.257～0.650],年龄≥40岁(β=0.274,95%CI:0.117～0.431)、工作压力较大者(β=0.349,95%CI:0.200～0.499)微核率较高；本科及以上学历(β=-0.252,95%CI:-0.434～-0.071)和奶类食用次数>1次/周者(β=-0.172,95%CI:-0.320～-0.024)微核率较低。结论本研究人群中外周血淋巴细胞微核率降低，受年龄、性别、文化程度、奶类食用频率和工作压力等因素的影响。

关键词：
DNA
健康人群
微核率
染色体片段
淋巴细胞
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微核是细胞质中被核膜包裹的圆形或椭圆形的类核物质，是由于基因组DNA受到损伤导致整条染色体或染色体片段在有丝分裂后期不能进入子细胞而形成[1,2],反映了细胞染色体的不稳定性，与肿瘤[3,4]和多种代谢性疾病[5]的发生、发展和预后相关。微核的形成除了受到环境有害因素如致癌物、放射性物质等的影响外，还与机体本身的特征如年龄、性别和生活方式等因素有关[6]。本研究以无基因毒物接触史的健康人群为研究对象、分析其年龄、性别、文化程度、生活习惯、饮食特征和工作压力等对外周血淋巴细胞微核率的影响，可为预防染色体损伤，减少肿瘤等慢性非传染性疾病的发生提供科学依据。

1、对象与方法

1.1对象

2022年10月选择武汉市某服务机构的工作人员93人为调查对象，排除标准：肿瘤、痛风等重大慢性疾病患者；职业过程中接触放射性物质或基因毒性物质者。本研究通过武汉市职业病防治院伦理委员会审批(伦理号：2022-WZF06),调查对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1一般资料收集

由经过培训的调查员一对一指导受检者填写调查问卷。问卷的内容包括人口学基本资料(性别、年龄、民族和文化程度等)、职业史、疾病史、生活习惯(吸烟、饮酒等)、饮食习惯、自觉工作压力和工作强度。吸烟指至少吸1支/d且持续半年(含)以上，饮酒指至少饮酒1次/周，且至少持续半年(含)以上。饮食习惯包括每周食用奶类、豆类、肉类、咖啡、碳酸饮料以及钙和维生素补充剂的次数。自觉工作压力和工作强度分为较小、适宜、较大和很大4个等级。问卷填写后由专人核查其完整性和逻辑性，对不合格的内容及时联系受检者核实和完善。采用经校准的身高体质量仪(欧姆龙)测量身高和体质量，体质量指数(BMI)=体质量(kg)/身高(m)2。

1.2.2微核检测

采用胞质分裂阻断微核法检测外周血淋巴细胞微核率。将0.5ml肝素钠抗凝的静脉血加入到细胞培养基中(广州达晖生物有限公司，批号：L10S220305),置于37℃恒温培养箱中培养44h,加入终浓度为6μg/ml的细胞松弛素B,混匀后继续培养至72h,采用自动细胞收获仪ChromprepⅡ(CP-11-64,上海乐辰)收获细胞。滴片，采用吉姆萨染色液(上海乐辰，批号：AB230608)染色。在全自动荧光扫描分析系统(Imager.Z2,德国蔡司)中以10倍物镜扫描整张玻片后，从每张玻片中随机选取1 000个双核细胞图片进行微核计数，将发现的每一个微核细胞在40倍显微镜下经过双人确认。双核细胞的胞膜边界清晰，能与临近细胞区分开，细胞内的两个主核的核膜独立，大小和染色基本接近。微核是圆形或类圆形且核膜完整的小核，直径为主核直径的1/16～1/3,染色清楚不折光，与主核无核物质连接。微核率是指每1 000个双核淋巴细胞中含有的微核数。

1.3统计分析

采用Excel 2016软件整理数据，采用SPSS 25.0软件进行统计分析。定性资料采用相对数描述。微核率的影响因素分析采用Poisson回归分析模型，两组间的比较采用Z检验，

和x2为两组微核率的均值，n1和n2分别为两组的样本数量。以P<0.05为差异有统计学意义。检验水准α=0.05。

2、结果

2.1基本情况

本研究共纳入93人，男性30人，占32.26%;女性63人，占67.74%。年龄≥40岁的24人(25.81%);BMI≥24kg/m2的21人(22.58%);本科及以上学历的79人(84.95%),吸烟的7人(7.53%),均不饮酒。见表1。

2.2微核率在不同特征人群中的分布情况

研究对象微核率的平均值为8.51‰±6.00‰,95.92%的人微核率低于20.00‰,1人高于30.00‰。微核率在不同性别、年龄、BMI、文化程度、饮食习惯(奶类、肉类)和工作压力差异有统计学意义(Z=7.036、4.994、3.478、2.955、3.072、2.726、4.330,P<0.05)。见表1。

表1不同特征人群微核发生率(n=93)

2.3微核率影响因素的Poisson回归分析

以微核率为因变量，以表1中差异有统计学意义(P<0.05)的因素为自变量，进行Poisson回归分析。结果显示，女性(β=0.454)、年龄≥40岁(β=0.274)、工作压力较大者(β=0.349)微核率升高。本科及以上学历(β=-0.252)和奶类食用次数>1次/周者(β=-0.172)微核率降低。见表2。

表2微核率的多因素Poisson回归分析

3、讨论

本研究分析了健康人群中微核率并探究其影响因素，发现年龄增大、女性、文化程度较低、奶类食用频率较低和工作压力增大与微核率升高相关。

本研究健康人群微核率平均值为8.51‰,研究对象的93人中，95.92%的微核率分布范围为0‰～20‰,1人高于相关标准[2]规定的正常参考范围(0‰～30‰),与Pajic等在健康塞尔维亚人中的研究结果一致[7],远高于Uzen等在健康土耳其人中检测的微核水平[8]。研究结果的不一致可能与研究对象的特征、地域差异以及实验室检验方法尤其是阅片方法有关。微核是放射作业人员职业健康检查的必检项目[9],常规培养微核法和胞质分裂阻断微核法是微核检测的主要方法，后者获得的双核细胞中微核更容易识别，对DNA损伤的反映更敏感，结果更可靠[10]。本研究采用胞质分裂阻断微核法通过自动细胞收获仪收获细胞，并采用自动分析系统扫描玻片。高度的自动化和机械化实验流程既保障了结果的稳定性，也提高了工作效率，减少了实验人员因疲劳对检测结果的影响[11,12]。此外，所有微核细胞均在显微镜下经双人确认，确保了研究结果的准确性。

年龄和性别是基因组不稳定性的影响因素[13]。随着人类年龄的增长，接触外来有毒有害物质的机会增多，基因组的不稳定性和致癌性将不断积累[14],而其修复能力则不断下降，同时机体衰老过程中的氧化损伤也导致了微核率升高[8,15]。女性拥有2条X染色体而男性仅1条，相比于其他染色体，X染色体更易产生微核[16]。本研究年龄≥40岁的个体微核率高于年龄<40岁者，女性微核率高于男性，与以往研究结果一致。研究年龄和性别对一般人群微核率的影响，可为建立不同年龄和不同性别人群的参考值范围提供理论基础。

文化程度对微核的影响研究较少，本研究发现本科及以上学历者的微核率低于专科学历者。其潜在机制尚不清楚，可能与学历相关的因素比如经济收入、工作环境、营养状况以及健康素养等多种因素相关，本研究涉及的研究对象学历均在大专及以上，对更低学历者的微核率还有待于进一步研究。

食物中的微量营养素可在DNA合成和修复中作为辅助因子，参与染色体的分离等多种生物学过程。维生素D和维生素C能降低淋巴细胞中氧化性DNA损伤水平[17,18]。研究发现补充抗氧化剂可降低微核水平，但大多数研究使用单一或混合补充剂(β胡萝卜素，维生素A、E等),很少有以食物为干预措施的研究[19]。本研究发现每周摄入奶类>1次/周者微核率降低，可能与奶类中钙和维生素等的摄入有关。研究饮食习惯对微核率的影响，将有助于确定最优的饮食模式预防DNA损伤和促进DNA损伤后的修复。

工作压力与微核的关系研究较少，本研究显示，工作压力较大者，微核率升高。工作压力是指在感知到工作负担过重或工作责任过大而超过其应对能力时，个体出现的心理和生理反应状态。长期持续的压力会使机体应激激素水平持续处于高峰状态，加剧氧化应激反应，引起自由基的堆积和氧化损伤的积累，加速细胞的衰老，使DNA损伤增加，修复能力降低[20]。因此，及时有效的缓减压力，对减轻DNA损伤、减缓衰老进程、预防疾病的发生有重要意义。

综上，本研究显示年龄、性别、文化程度、奶类食用频率和工作压力与健康人群微核率相关。由于研究对象仅为某一服务机构的工作人员，其对整个健康人群的代表性不够充分，且样本量较小，将其研究结论外推到整个健康人群时需谨慎。因此，本研究的结果需要在大样本多中心研究中进一步验证，但本研究为预防微核的产生提供了一定线索。

利益冲突无

参考文献:

[2]中华人民共和国国家卫生健康委员会.放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞微核检测方法和受照剂量估算标准:GBZ/T 328—2023[S].北京:中国标准出版社,2023.

[3]王保民,胡耿,胡丽华,等.微核组学可视化分析与人工智能检测策略的研究进展[J].中华预防医学杂志,2022,56(3):391-396.

[9]中华人民共和国国家卫生健康委员会.放射工作人员健康要求及监护规范:GBZ 98—2020[S].北京:中国标准出版社,2020.

[11]吴小琴,李烨,刘刚.微核检测Metafer4软件扫描与显微镜人工阅片对比分析[J].工业卫生与职业病,2022,48(1):68-70.

[12]钱小莲,方慧莲.全自动染色体收获仪在淋巴细胞微核试验中的价值[J].中国辐射卫生,2021,30(5):560-563.

[13]赵骅,陆雪,蔡恬静,等.年龄和性别对正常人外周血淋巴细胞核质桥自发率的影响[J].癌变·畸变·突变,2021,33(1):48-52.

[16]孟倩倩,张睿凤,张忠新,等.医疗放射工作人员淋巴细胞微核水平影响因素分析[J].中国辐射卫生,2022,31(3):273-278.

基金资助:国家自然科学基金(81703203);武汉市卫生健基金资助项目(WG21Q01);武汉科技大学､职业危害识别与控制湖北省重点实验室(OHIC2022Z10);

文章来源:凃娜,罗永斌,王帆,等.健康人群外周血淋巴细胞微核率影响因素分析[J].医学动物防制,2024,40(07):638-641.