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补肾健骨凝胶的制备工艺研究

2022-01-26 185 上传者：管理员

摘要：目的:优选补肾健骨凝胶的制备工艺。方法:采用正交试验法,以干膏得量、补骨脂素、异补骨脂素含量为评价指标,优选最佳提取工艺;以外观形态、凝胶初黏度、pH值、指标成分累积渗透量为指标,分别将空白基质、中和剂及促渗剂进行筛选。结果:最佳提取工艺为按处方比例,称取除龙血竭外的补骨脂等5味药材,提取3次,第1次加8倍量80%乙醇,第2、3次分别加8倍量水,每次提取1h。卡波姆、三乙醇胺、月桂氮卓酮的用量分别为制成量的1%、2%、2%。结论:制得的凝胶质地光滑细腻、药物分散良好。

关键词：
中和剂
促渗剂
制备工艺
空白凝胶基质
补肾健骨凝胶
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膝骨关节炎是中老年人群常见的膝关节退行性疾病，主要表现为膝关节疼痛、关节畸形，导致患者活动障碍，生活质量严重下降。补肾健骨方是我院临床经验方，具有补益肝肾、强筋健骨、祛风散寒除湿、活血通络止痛等功效，临床常煎煮取汁配合按摩局部用药，治疗肝肾不足、筋脉瘀阻型膝骨关节炎患者，疗效较佳[1]。本实验拟将其制成水性凝胶剂，该剂型既保持原方相容性好、吸收起效快、生物利用度高的特点，同时又具有稳定性好、方便使用的优点。

1、实验材料

1.1 仪器

Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司);Mettler-ToledoXS205DU电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司);DHG-9070A型立式鼓风干燥箱(上海捷呈实验仪器有限公司);HH-6数显恒温水浴锅(常州亿通分析仪器制造有限公司);RYJ-12B药物透皮扩散实验仪(上海黄海药检仪器有限公司)。

1.2 试剂与试药

补骨脂素(批号：110739-201617)、异补骨脂素(批号：110738-201313)对照品，均购于中国药品生物制品检定所；杜仲、龙血竭、补骨脂等饮片均购自广东省岭南药业有限公司，经广东省中医药工程技术研究院王洛临主任中药师鉴定，均符合《中国药典》2020年版一部药材项下有关规定；甲醇为色谱纯试剂，水为蒸馏水，其他所用试剂均为分析纯。

1.3 动物

NIH小鼠[由美国国立卫生研究院(NIH)培育而成],雌雄各半，约5周龄，购于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002。

2、实验方法及结果

2.1 提取工艺研究

拟定提取3次，采用正交试验法，以补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素含量和干膏得量为考察指标，对影响提取效果的提取溶媒种类(A)、提取时间(B)、溶媒倍量(C)进行优选，筛选最佳提取工艺，因素水平设计见表1。

2.1.1 样品制备

按处方比例，称取除龙血竭外的药材饮片9份，每份214g,按L9(34)正交试验表安排进行提取，滤过，滤液浓缩并定容至500ml,测定浓缩液中干膏得量和补骨脂素、异补骨脂素含量。

2.1.2 结果

由正交试验结果可以看出，影响提取效果的因素顺序为：溶媒种类>溶媒倍量>提取时间，由此得出的最佳工艺组合为A3B3C2。由方差分析可知，因素A对试验结果有显著性影响(P<0.05),因素B、C对试验结果无显著影响。因此，提取工艺条件定为：按处方比例，称取除龙血竭外的杜仲等5味药材，提取3次，第1次加8倍量80%乙醇，第2、3次分别加8倍量水，每次提取1h,即A3B1C1。(见表2、3)

2.1.3 最佳提取工艺条件验证

按处方比例，称取药材3份，按照优化工艺提取，测定补骨脂素、异补骨脂素含量和固形物质量，结果表明：验证试验结果与正交试验优选结果基本吻合，说明正交试验优选出的工艺稳定、重现性良好。(见表4)

2.2 成型工艺研究

2.2.1 浓缩液制备

按处方比例称取药材，照上述提取工艺，合并提取液，减压浓缩至适量，加纯化水调整为1g浓缩液相当于0.5g药材[2,3,4,5,6,7,8,9]。

2.2.2 龙血竭药材处理

取龙血竭细粉2份，分别加入甘油、丙二醇适量，搅拌使充分溶散[10],结果表明龙血竭在丙二醇中的溶解度明显高于甘油，与甘油类似，15%～30%浓度的丙二醇用于半固体制剂同时具有保湿和防腐的作用，因此，选择丙二醇作为龙血竭药材的分散溶剂。

取龙血竭细粉5份，分别加入2、3、4、5、6倍量丙二醇，搅拌10min,观察溶散情况，结果表明，当加入4倍及以上丙二醇后，溶散效果理想，因此，确定丙二醇用量为3%。

2.2.3 空白凝胶基质及用量的选择

凝胶剂常用的基质分为水溶性和油溶性，考虑到药材所含成分在水和乙醇中均可溶解，以及油溶性基质易污染衣物等因素，本品选择水溶性基质作为凝胶基质。方法：取浓缩液4份，加水至100ml,分别加入1%的卡波姆、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、海藻酸钠、明胶，常温放置24h,使基质充分溶胀，溶胀后的基质用15%氢氧化钠溶液调节pH值至6.5～7.5,搅拌使其呈均匀、稠厚的液体，继续放置24h,取适量涂抹在BBV-T型初黏性测试仪上，面积2cm×2cm,将测试板倾斜55°放置5min,观察凝胶流动情况，重复3次，取平均值。结果表明，卡波姆用量为制成量的1%时凝胶初黏度较高，且卡波姆在乙醇、水和丙二醇溶胀性良好，调节pH后能形成细腻光洁的均匀凝胶，因此确定卡波姆作为本品的基质，用量为1%。(见表5)

2.2.4 中和剂及其用量的选择

卡波姆为白色松散、微酸性粉末(pH值2.5～3.0,1%水分散体),其水凝胶在pH值<3或>12时黏度即降低，pH值在6～11之间最为黏稠。常用的中和剂有氢氧化钠、三乙醇胺等。中和后的卡波姆水凝胶在强电解质存在的情况下会出现黏度降低的问题，而三乙醇胺不属于强电解质，并具有乳化和增溶作用，因此选择三乙醇胺作为本品的中和剂。

取充分溶胀的2%卡波姆溶液5份，每份500g,加入处方量的浓缩液、龙血竭(溶散于丙二醇中),搅拌均匀，再分别加入三乙醇胺10、20、30、40、50g,加纯化水至1000g,混匀，放置0、24、48h,用pH计测试凝胶pH值及初黏度。结果表明，当三乙醇胺用量为2%～4%时，pH基本控制在6.5～7.5之间，初黏度较合适，因此确定三乙醇胺用量为2%。(见表6)

2.2.5 促渗剂用量考察

外用制剂常用透皮促进剂为月桂氮卓酮，用量为0.5%～2.0%。

2.2.5.1 样品的制备

取充分溶胀的2%卡波姆溶液3份，每份500g,加入处方量的浓缩液、龙血竭(溶散于丙二醇中)、三乙醇胺20g,混匀，再分别加入0、10、20g月桂氮卓酮，加水至1000g,搅拌均匀即得。

2.2.5.2 离体小鼠皮肤的制备和处理

取健康的NIH小鼠，用电动剃毛刀小心剃除腹部体毛，以8%Na2S溶液涂布腹部皮肤，1min后以清水洗净，饲养12h后，断颈处死，剥离腹部皮肤，平铺于干净的玻璃板上(角质层面向玻璃),小心剔除皮下组织和脂肪，再用0.9%氯化钠注射液反复冲洗干净，并置于0.9%氯化钠注射液中，密封，于低温冰箱中保存。每次实验前自然恢复至室温，检查鼠皮的完整性，不能有破损。

2.2.5.3 体外渗透实验方法

采用RYJ-12B型药物透皮扩散试验仪，释药面积为2.8cm2,接收室体积为6.5ml。取经预处理的动物皮肤6块，大小基本相同(稍大于接收池上盖的外直径),固定在接收池上盖与接收池之间，角质层朝上，使液面恰能与皮肤内层面接触，再取凝胶样品各约2g,均匀涂抹在皮肤上，排除气泡，用注射器从取样管口加入接收液(0.9%氯化钠注射液)至与管口相平。保持恒速搅拌(200r/min)和恒温[(37±1)℃],分别于1、2、3、4、7、10、12、24h取样1ml,同时补加恒温等量接收液，取各接收液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别测定补骨脂素、异补骨脂素含量，并计算累积渗透量。结果表明，随着月桂氮卓酮用量的增加，补骨脂素、异补骨脂素累积渗透量逐渐增加；当月桂氮卓酮用量为2%时，补骨脂素、异补骨脂素的累积渗透量最大，故确定月桂氮卓酮的用量为2%。(见图1)

3、讨论

文献研究显示，本处方药味所含木脂素、黄酮或皂苷苷元、生物碱、低分子萜类等成分可溶于乙醇，所含黄酮苷、皂苷、多糖、蛋白质等成分可溶于水[11,12,13,14,15,16],兼顾生产安全性等因素，所以设计了第1、2、3次为水；第1次为50%乙醇，第2、3次为水；第1次为80%乙醇，第2、3次为水，共3种提取溶媒。

凝胶膏剂具有使用方便、载药量大、靶向性强的优点，非常适用于膝骨关节炎类局部给药的疾病。本实验系统开展了空白基质、中和剂、促渗剂的筛选，卡波姆是一种性能良好的流变调节剂，加入药物浓缩液后，使用三乙醇胺中和，制得的凝胶样品光滑细腻，光泽度好，药物分散均匀；龙血竭药材细粉先使用丙二醇分散，丙二醇具有保湿、防腐的双重功效，既可以提高凝胶涂抹时的皮肤体验，又可以防止微生物生长；促渗剂月桂氮卓酮的使用可以帮助脂溶性成分通过皮肤类脂双分子层，极大地提高了透皮率。后续将进行3批中试试验，并完成质量标准、稳定性的研究，为将该制剂开发为医院制剂及中药新药奠定基础。

参考文献:

[1]陈能.补肾活血方对膝骨关节炎疼痛及致痛因子表达的影响[D].广州:广州中医药大学,2017.

[2]张建军,李洁环,黄雪君,等.参芩凝胶提取工艺的优化[J].中成药,2020,42(3):736-740.

[3]王颖,刘志东,曹晴,等.地榆四黄散的提取工艺优化及凝胶剂的制备[J].天津中医药,2012,29(1):80-82.

[4]潘洁,张洪.复方人参凝胶剂的制备及质量控制[J].中医药导报,2015,21(10):53-56.

[5]刘丹.复方血竭凝胶制备工艺及质量分析研究[D].武汉:湖北中医学院,2009.

[6]吴东盼.寒痹舒凝胶膏剂的制备工艺与质量标准[D].北京:北京中医药大学,2015.

[7]吴雅莉.阴炎净凝胶的制备工艺及质控标准研究[D].长沙:中南大学,2010.

[8]宣伟东,袁志仙,成熙.正交试验法优选生姜抗晕凝胶膏剂的制备工艺[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(7):53-55.

[9]章烨露,王琼,于竞新,等.止痛微乳凝胶膏的制备及体外评价[J].北京中医药大学学报,2015,38(4):253-259.

[10]谭周飞.不同粉碎粒度对血竭中血竭素含量测定的影响[J].中国药事,2013,27(12):1298-1300.

[11]柴丽娟,樊娜,王虹,等.补骨脂单体成分对体外培养成骨细胞和破骨细胞分化的影响[U].天津中医药,2015,32(5);299-303.