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炮制方法对黄芩中黄芩苷及黄芩素含量影响

2023-08-14 242 上传者：管理员

摘要：通过测定黄芩4种不同炮制品中有效成分黄芩苷、黄芩素含量，研究黄芩不同炮制方法对黄芩的影响。方法建立液相色谱检测法(HPLC-UV)检测黄芩炮制品：酒黄芩、醋黄芩、炒黄芩、蜜黄芩中黄芩苷、黄芩素含量。结果建立了同时测定黄芩药材中黄芩苷、黄芩素含量的液相检测方法；醋黄芩中黄芩素含量最高为1.42%,酒黄芩中黄芩苷含量较高，达到了11.51%。结论不同炮制方法对黄芩的黄芩苷和黄芩素含量有显著影响，酒黄芩和醋黄芩中黄芩苷和黄芩素含量较其他两种炮制方法制作的炮制品的含量高。

关键词：
止血安胎
炮制
黄芩
黄芩素
黄芩苷
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黄芩(拉丁学名：Scutellaria baicalensis Georgi)是多年生草本植物，唇形科黄芩属，以根入药[1]。黄芩为一味具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎功效的中药材，适用范围宽，如双黄连口服液、黄芩汤及蓝芩口服液等。查阅近年来有关黄芩的药理研究进展，发现黄芩中的黄酮类成分在利尿、降压、抗菌、消炎、抗病毒、保肝利胆、防过敏及镇静等方面的效果较好，为黄芩的临床应用奠定了坚实的药理依据[2,3,4]。

古代医家在黄芩的临床使用过程中采取了不同的炮制处理方式，较常见的有炒黄芩、姜黄芩、生黄芩片、蜜黄芩、酒黄芩及黄芩炭6种，其中生黄芩片、酒黄芩和炒黄芩应用最广泛，黄芩的不同炮制方式对该药材中有效成分含量也具有一定差异[5,6]。目前，中药黄芩的炮制工艺种样繁多[7,8,9]。本实验选取了目前市场上较常用的酒黄芩、醋黄芩、炒黄芩、蜜黄芩4种黄芩炮制品为考量目标，以黄芩素及黄芩苷的含量为评价指标，考察4种不同黄芩炮制品中两种活性成分含量的变化，现报道如下。

1、材料

1.1仪器

HPLC高效液相色谱仪(型号：LC-20AT,检测器：紫外检测器，生产厂家：Shimadzu);电子分析天平(型号：mL104,生产厂家：Mettler Toledo);电子分析天平(型号：XSR105DU/A,生产厂家：Mettler Toledo),炒锅(型号：CKN7630J 30 CM,生产厂家：浙江炊大王炊具有限公司);移液器[型号：YE187AL1168351,生产厂家：大龙星创实验仪器(北京)有限公司]。

1.2药材

黄芩药材(生产厂家：安徽亳药千草国药股份有限公司),批号200501,产地山西，按《中华人民共和国药典》2015年版第一部及第四部标准检验，结果符合规定。

1.3试药

黄芩素标准品(批号：111595-201306,纯度97.8%)、黄芩苷标准品(批号：110715-201318,纯度93.8%)均购于中国药品生物制品检定所；娃哈哈纯净水；乙腈为色谱纯；甲酸等其余试剂均为分析纯；米醋(总酸≥9.00 g/100 ml,产地：江苏镇江，生产厂家：江苏恒顺醋业股份有限公司);蜂蜜(批号：200601,产地：湖北荆州，生产厂家：南京老山药业股份有限公司);花雕酒(酒精度：≥12%vol,产地：浙江绍兴，生产厂家：浙江古越龙山绍兴股份有限公司)。

2、方法与结果

2.1样品制备

2.1.1酒制黄芩：

取批号为200501的黄芩药材100 g和黄酒20 ml,混合拌匀，敷保鲜膜闷润30 min后，置于炒锅内，用文火(控制锅温在270℃左右)炒制30 min,取出，放凉备用。

2.1.2炒黄芩：

取批号为200501的黄芩药材100 g,加入炒锅中，用文火(控制锅温在270℃左右)炒至黄芩表面棕黄色后立刻停止，取出，放凉备用。

2.1.3醋制黄芩：

取批号为200501的黄芩药材100 g和米醋20 ml,混合拌匀，闷润30 min放入至炒锅中，用文火(控制锅温在200℃)炒制30 min,取出摊放，并筛去碎屑。

2.1.4蜜制黄芩：

(1)辅料制备：取生蜂蜜40 g,炼制蜂蜜20 g,绍兴花雕酒10 g,纯化水20 g,将除炼蜜外所有辅料混合均匀备用。(2)浸润：将上述混合均匀的辅料和100 g批号为200501的黄芩至闷润容器中，搅拌均匀，浸润；闷润至混合辅料全部被吸收。(3)炙炒：将闷润好的黄芩放入炒锅中，以文火炒至手按觉硬度为宜，约八分干时，将炼蜜倒至黄芩上拌炒，炒至黄芩表面呈蜜样光泽，触之不粘手，以握之成团，撒手即散为度，取出摊放，放凉备用。

2.2色谱条件

色谱柱：YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相：甲醇-0.2%磷酸水=47∶53;检测波长280 nm;流速1.0 ml/min;柱温30℃;进样量10μl。

2.3溶液的制备

2.3.1标准品溶液制备：

精密称定黄芩苷10.180 2 mg、黄芩素标准品3.051 2 mg,加入50 ml量瓶中，用70%乙醇充分溶解后定容，获得含有黄芩苷203.6μg/ml和黄芩素61.02μg/ml的混合标准品溶液，备用。

2.3.2供试品溶液制备：

精密称定按照炮制方法炮制后的黄芩炮制品50 g,打粉，全部通过3号筛(50目),精密称定黄芩炮制品粉末0.03 g,置于100 ml圆底烧瓶中，在精密汲取70%乙醇40 ml,在70℃水域锅内回流3 h后，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用70%乙醇少量多次洗涤容器和残渣，洗液一同滤入量瓶中，定容，摇匀，过0.45μm针孔有机滤膜，得黄芩炮制品供试品溶液，备用。

2.4系统适用性试验

取“2.3.1”项下黄芩素和黄芩苷混合标准品溶液，按“2.2”项下色谱条件，进样，黄芩苷和黄芩素色谱峰分离良好，色谱图见图1。

图1高效液相色谱图

2.5线性关系考察

精密吸取“2.3.1”项下制备黄芩苷、黄芩素混合标准品溶液50、100、200、400、800、1 000μl分别置于1 ml的量瓶中，加70%乙醇定容，配制成浓度为3.051μg/ml的黄芩素和10.18μg/ml的黄芩苷、6.102μg/ml的黄芩素和20.36μg/ml的黄芩苷、12.204μg/ml的黄芩素和40.72μg/ml的黄芩苷、24.408μg/ml的黄芩素和81.44μg/ml的黄芩苷、48.816μg/ml的黄芩素和162.88μg/ml的黄芩苷、61.02μg/ml的黄芩素和203.60μg/ml的黄芩苷混合标准品溶液。取上述不同浓度混合标准品溶液，按照“2.2”项下色谱分析条件检测，以黄芩苷和黄芩素标准品的浓度(X)为横坐标，以相应测得的黄芩苷和黄芩素的峰面积(Y)为纵坐标，计算回归方程。得黄芩素的回归方程为Y=8 585.9X+1 933,r2=0.999 6;黄芩苷的回归方程为Y=9 542.8X+24 564,r2=0.999 7。结果表明黄芩素线性范围为3.051～61.02μg/ml、黄芩苷线性范围为10.18～203.60μg/ml。

2.6精密度考察

取“2.3.2”项制备的黄芩炮制品供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件，平行进样6次，记录黄芩苷和黄芩素峰面积。计算黄芩苷和黄芩素的峰面积的RSD值，结果为黄芩素峰面积RSD为2.06%;黄芩苷峰面积RSD为1.67%,表明分析仪器的精密度良好。

2.7稳定性考察

精密称定按照炮制方法炮制后的黄芩炮制品50 g,打粉，全部通过3号筛(50目),精密称定0.03 g黄芩炮制品粉末，按“2.3.2”项下方法制作黄芩的供试品溶液，按“2.2”项下色谱分析条件分别于0、3、6、9、12、24 h进样，记录黄芩苷和黄芩素峰面积。计算黄芩苷和黄芩素的峰面积的RSD值，结果为黄芩素峰面积的RSD为1.61%,黄芩苷峰面积的RSD为1.43%,表明黄芩炮制品供试溶液在24 h内稳定性较好。

2.8重复性考察

精密称定按照炮制方法炮制后的黄芩炮制品50 g,打粉，全部通过3号筛(50目),精密称定黄芩炮制品粉末0.03 g,平行称定6份，按“2.3.2”项下方法制作黄芩炮制供品溶液，按“2.2”项下色谱分析条件进样，记录黄芩苷和黄芩素峰面积，根据“2.5”线性回归方程，计算黄芩苷和黄芩素的含量，结果表明黄芩素含量的RSD为1.84%;黄芩苷含量RSD为1.42%,表明该方法测定黄芩炮制品中黄芩苷和黄芩素的重复性良好。

2.9加样回收考察

精密称定按照炮制方法炮制后的黄芩炮制品50 g,打粉，全部通过3号筛(50目),精密称定黄芩炮制品粉末0.015 g,平行6份，置于100 ml烧瓶中，分别加入含有黄芩苷0.1 869 mg/ml和含有黄芩素0.0 183 mg/ml混合标准品溶液10 ml,再加70%乙醇30 ml,按照“2.3.2”项下在70℃水域锅内回流3 h后相同操作得样品供试溶液，按“2.2”项下色谱分析条件进样，按照外标法计算黄芩素及黄芩苷含量，结果见表1。

表1黄芩素和黄芩苷加样回收考察

2.10含量测定

按“2.1”样品制备方法炮制出来的不同黄芩炮制品，按“2.3.2”项下方法制备不同黄芩炮制品的供试溶液，以黄芩素标准品和黄芩苷标准品为标准品溶液，按“2.2”项下色谱分析条件进样，按照“2.5”线性回归方程，计算黄芩素及黄芩苷含量，见表2。

3、讨论

黄芩是唇形科黄芩属植物黄芩的干燥根，在中医临床用于治疗肺热咳嗽、高热神昏、肝火头痛、目赤肿痛、湿热黄疸、泻痢及胎热不安等证。现代药理研究表明，黄芩具有抗菌、消炎、降压、利尿、降血脂及抗变态反应等作用，其与黄芩药材中含有的多种黄酮类衍生物相关，如黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素等。本实验结果表明，4种黄芩炮制品中黄芩素含量依次为醋制黄芩>酒制黄芩>炒制黄芩>蜜制黄芩；黄芩苷含量依次为酒制黄芩>醋制黄芩>炒制黄芩>蜜制黄芩。实验结果表明，不同的炮制方法对黄芩中黄芩素和黄芩苷这两种黄酮类有效成分的含量影响较大。

本实验研究的4种黄芩炮制品中黄芩素含量范围为0.98%～1.42%,黄芩苷含量范围为8.58%～11.51%;其中，醋制黄芩中的黄芩素含量最高为1.42%;酒制黄芩中黄芩苷含量均较高，为11.51%,从上述表2的结果也可看出醋制黄芩和酒制黄芩中的黄芩素和黄芩苷含量均较其他两种炮制方法的结果高。

目前市场在售的黄芩药材以酒黄芩饮片为主，因为黄芩味苦性寒，酒制后可缓解苦寒之性，此类饮片临床使用量也相当大。然而不同的炮制方法对黄芩药效成分影响[10]的研究较少，多局限于不同产地炮制品的比较和药理作用研究分析[11,12],缺乏系统的对黄芩炮制工艺的研究性基础。我国古代中医对药材的炮制过程研究大多局限于口、耳相传，留下的文字记载极少而且特别精简，亦会有错漏之处，使我们对黄芩等大宗中药材的炮制了解过于单一，缺乏深入的探讨分析。

本研究为实验室炮制数据的整理分析，由于药材数量相对少，实验结果还可另行以中试实验设备放大数量后进一步研究，比较黄芩原药材加工成醋制黄芩和酒制黄芩的优势所在。

利益冲突:所有作者声明无利益冲突。

表2含量测定结果

参考文献:

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[2]邵鸿基,中药炮制与用法在临床应用对治疗效果的影响[J].中医临床研究,2019,11(27):137-138.

[3]徐玉田,黄苓的化学成分及现代药理作用研究进展[J],光明中医,2010,25 (3):544-545.DO1:10.3969/

[4]吉晓丽,黄苓的化学成分与药理作用研究进展[J].中医临床研究,2017,9(9):128-129.

[5]郝欣不同炮制方式对中药质量的影响研究[J],中西医结合心血管病电子杂志,2016.4(12):47-48

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[7]黄琪,张村,吴德玲,等,酒黄苓炮制研究进展[J],中国实验方剂学杂志,2013.19(10):364-369

[8]王晓丽,李晓明,不同炮制方法对黄中黄举昔的影响[N].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(17):2768-2769,