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葛根芩连汤对肥胖大鼠肠道通透性的影响

2025-06-11 58 上传者：管理员

摘要：目的：探讨葛根芩连汤（Gegen Qinlian Decoction,GQD）干预营养性肥胖大鼠后对肠道通透性的影响。方法：采用实验室建立的高脂饲料诱导SD大鼠成肥胖型大鼠，然后给予GQD提取液进行干预，检测表型指标（体重、体长、Lee's指数和血液生化指标等），并进行回肠和结肠组织切片的实验，评价GQD对肥胖大鼠肠道通透性的影响。结果：GQD降低了大鼠体重、总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇，升高了高密度脂蛋白胆固醇（P<0.05）。回肠和结肠HE染色结果显示，相对于模型组，GQD干预后，可不同程度地减轻肠道炎症，其中GQD高剂量组效果明显，比辛伐他汀对肠道的修复效果好。结论：GQD具有改善营养性肥胖大鼠体重和血脂的作用，其可能的机制与改善肠道通透性有关。

关键词：
GQD
SD大鼠
肠道通透性患者
葛根芩连汤
血脂
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临床上常见肠道通透性患者[1],如肥胖､糖尿病和肿瘤等慢性病患者都有肠道通透性增加的临床表现,肠道通透性增加使得病程漫长,迁延难愈,常反复发作[2]｡患者需要反复就医,明显加重了患者和国家的医疗负担[3]｡因此,探明肠道通透性增加的发病机制和筛选适宜的药物进行治疗显得极为重要[4]｡葛根芩连汤(GegenQinlianDecoction,GQD)被现代医家认为是改善肠道通透性的经典良方[5]｡因此,探讨GQD对肥胖大鼠肠道通透性影响具有一定现实意义｡本文采用实验室前期建立的肥胖大鼠模型,以GQD进行干预,探讨影响GQD对肥胖大鼠肠道通透性的影响｡

1、材料与方法

1.1仪器

高速冷冻离心机(美国ThermoFisher公司);BT225型电子分析天平(德国Sartorius公司);ModularP800型全自动生化分析仪(瑞士Roche公司);TP1020全自动脱水机(德国Leica公司);EG1150包埋机(德国Leica公司);RM2265切片机(德国Leica公司);DS-Fi2正置显微镜(日本Nikon公司)｡

1.2药品与试剂

葛根､黄连､黄芩和炙甘草均购自江西江中中药饮片有限公司,具体批号和质检结果见团队前期研究[5];4%多聚甲醛(Bioshop,批号21348860);二甲苯(天津恒兴,批号20221128);石蜡(Leica,批号39601095);无水乙醇(西陇科学,批号2101049);苏木素染色液(南昌雨露,批号211206);伊红染色(南昌雨露,批号220209);中性树胶(国药集团,批号20201127);血脂试剂盒见文献[5]｡

1.3药材的制备

GQD由葛根､黄芩､黄连､炙甘草按8∶3∶3∶2的比例(质量比)组成的中药复方｡按照比例取相应药材适量,混匀,加8倍药材体积量水,浸泡约30min(以浸透为准)｡用武火开始加热(最大功率220V),沸腾后,改用文火(小功率)计时,40min后,用纱布趁热过滤药液,在剩余的药渣中继续加6倍量的水,按照上次煎煮工艺继续煎煮,合并2次水煎液｡合并所有药液进行旋转蒸发浓缩至终浓度为1g/mL原生药材溶液｡所得浓缩药液用550mL矿泉水瓶分装,贴好标签,放于-20℃冰箱里保存待用｡

1.4造模与给药

6~8周龄SD雄性大鼠36只,体质量(160±20)g,由江西中医药大学实验动物科技中心提供[SCXK(赣)2018-0003],动物饲养于该中心屏障系统实验室[实验动物使用许可证号:SYXK(赣)2017-0004],适应性喂养1周后,随机分组为空白组6只､造模组30只,空白组给予含10%脂量的普通饲料喂养,造模组给予含60%脂量的高脂饲料喂养｡造模13周后,将造模组随机分为模型组､辛伐他汀组(阳性对照药,10mg/kg,相当于临床人用量的15倍)和GQD高､中､低剂量组(14.85､4.95､1.65g/kg,以生药量计)[5],每组6只｡各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天给药1次,连续给药16周｡在给药同时,各药物组大鼠继续给予高脂饮食,空白组大鼠继续给予普通饲料饮食｡

1.5表型测定

每周称量体重(BW)和体长(BL)一次,Lee's指数=[体重(g)]1/3×1000/体长(cm)[6-7]｡血液样本每4周左右采样1次,并按照相应血脂检测试剂盒上的操作流程进行检测｡回肠､结肠病理组织HE染色包括从固定液中取材､冲洗､脱水､透明､浸蜡包埋､切片､展片､捞片､烘片､脱蜡､脱二甲苯､HE染色､脱水､透明和中性树胶封片等具体步骤｡

1.6统计学方法

数据统计性描述和分析采用R语言(https://www.r-project.org),以均值±标准差(xs±)表示,各组间差异采用单因素方差分析(ANVOA),并进行Q检验,以P<0.05表示差异有统计学意义｡

2、结果

2.1BW､BL及血脂变化

造模13周后,与空白组比较,模型组SD大鼠腹部圆而肥胖,BW､BL和Lee's指数均明显增加,总胆固醇(TC)､甘油三酯(TG)､低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平也显著上升(P<0.01),而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著下降(P<0.01)｡见表1｡

表1造模13周后各组大鼠体征和血脂变化(n=6)

给药16周后,与模型组比较,GQD低､中､高剂量组BW､BL､Lee's指数均显著降低(P<0.05),但与空白组比较,仍然是显著升高(P<0.05),辛伐他汀组表现了类似的效果,但与模型组比较,Lee's指数没有差异(P>0.05)｡血脂方面,与模型组比较,GQD低､中剂量组､辛伐他汀组TG水平显著降低(P<0.05),但是与空白组比较,仍然是显著升高(P<0.05);GQD中､高剂量组TC､LDL-C水平均显著降低(P<0.05),与空白组比较,显著下降(P<0.05);GQD低剂量组､辛伐他汀组HDL-C水平均显著升高(P<0.05),但与空白组比较,仍然是显著降低(P<0.05)｡见表2｡

表2给药16周后各组大鼠体征和血脂变化(n=6)

2.2各组大鼠回肠组织HE染色结果

从图1､图2可知,空白组回肠黏膜上皮组织完整,结构清晰,杯状细胞及腺体排列整齐,未观察到炎性细胞浸润;模型组大鼠回肠组织有明显水肿,黏膜上皮细胞排列紊乱,大量炎性细胞浸润;给药组各组大鼠回肠黏膜结构清晰､完整,上皮细胞排列整齐,固有层腺体排列较规则,可见程度不等的炎性细胞浸润;与空白组相比,模型组有较明显炎性细胞浸润,并偶伴有间质轻微水肿｡与模型组相比,辛伐他汀组､GQD低剂量组､中剂量组､高剂量组均有不同程度减轻,GQD干预后可不同程度减轻肠道炎症,其中GQD高剂量组效果明显｡

图1各组大鼠回肠组织HE染色结果(×10)

图2各组大鼠回肠组织HE染色结果(×40)

2.3各组大鼠结肠组织HE染色结果

对大鼠的结肠组织切片进行HE染色,观察可见空白组大鼠结肠黏膜和肌层结构完整清晰,腺体排列规律,未观察到中性粒细胞浸润､溃疡､糜烂等现象;模型组大鼠结肠黏膜不完整,腺体排列紊乱,黏膜上皮细胞损伤破裂,排列紊乱,可见炎性细胞浸润;与模型组相比,辛伐他汀组黏膜上皮组织､腺体及上皮细胞等结构组织的完整性有所恢复,但仍然存在病理损伤,腺体排列较模型组整齐,依旧可见炎性细胞浸润;GQD高､中､低剂量组结肠黏膜缺损､结构破坏以及炎症浸润现象都有所减轻｡GQD低剂量组肠腺体变长且丰富,并且排列更加有序,结肠受损情况得到一定程度的恢复,GQD高､中剂量组相较于低剂量组其肠绒毛高度有所增加,表明其上皮细胞数量有所增加,肠腺体更加丰富,排列更加整齐,肠道各组织及细胞受损情况进一步减轻,其中,GQD高剂量组修复效果最为明显｡相较于辛伐他汀组,GQD高剂量组对于结肠各组织及细胞受损情况的恢复效果更加显著,黏膜更加完整,腺体层次更加清晰,有更明显向空白组回归趋势｡见图3､图4｡

图3各组大鼠结肠组织HE染色结果(×10)

图4各组大鼠结肠组织HE染色结果(×40)

3、讨论

虽然GQD在糖脂代谢作用方面已被广泛研究[8-9],与肠道菌群的关系也进行了相关研究[10],但目前将GQD与脂代谢､肠道通透性结合开展的分析研究仍较为匮乏｡本研究以实验室前期建立的营养性肥胖大鼠为对象[11],用GQD进行干预来初步探讨其调控血脂对肠道通透性的作用｡结果显示,GQD可降低BW､TC､TG和LDL-C水平,升高HDL-C水平(P<0.05),GQD中､高剂量组对TC､LDL-C作用尤其突出,降低到了比空白组还低的水平,表明长期给予GQD,对TG和TC的作用不一样,可能是因为TG和TC自身的合成和分解不一样,涉及的具体机制也不一样,导致同样浓度GQD所起的效果不一样｡

由于肠道是机体主要的消化和吸收场所[12],为此,对肠道组织的变化特点进行了分析,结果显示GQD干预后可不同程度减轻肠道炎症,其中GQD高剂量组效果明显｡回肠和结肠组织及细胞受损情况的恢复效果更加显著,黏膜更加完整,腺体层次更加清晰,有更明显向空白组回归趋势,这为GQD调节血脂,尤其是对TC､TG的机制研究给出了新的思路,下一步可从肠道上皮细胞入手,深入探讨所涉及的具体基因和相关通路｡

参考文献:

[5]姜璎娜,曾治君,傅灵艳,等.基于肠道菌群研究葛根芩连汤降脂并预防血糖升高的作用机制[J].中国药房,2020,31(15):1823-1829.

[9]盛译萱.高脂饮食诱导血脂异常大鼠的代谢机制及葛根芩连汤干预的作用机制[D].南昌:江西中医药大学,2019.

[10]姜璎娜.葛根芩连汤干预糖尿病前期大鼠肠道菌群产物短链脂肪酸的研究[D].南昌:江西中医药大学,2020.

[11]曾治君,凌美婷,朱鑫辉,等.黄芩对营养性肥胖大鼠血糖血脂的作用及其机理研究[J].江西中医药大学学报,2022,34(3):91-94.

基金资助:国家自然科学基金项目(82460857,81760787);江西省中医药中青年骨干人才项目(赣中医药科教字[2021]2号);江西省卫健委科技计划项目(202211399);

文章来源:王劭华,陈梦婕,刘艺敏,等.葛根芩连汤对肥胖大鼠肠道通透性的影响[J].江西中医药大学学报,2025,37(03):89-92.