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如意金黄散外敷对新西兰兔穿刺血管内皮功能的影响

2025-06-26 57 上传者：管理员

摘要：目的探讨如意金黄散外敷对新西兰兔穿刺血管内皮功能的影响。方法选取新西兰大耳兔30只为实验对象，随机分为A、B、C组各10只。A组双耳耳廓后动脉前支造模后生理盐水纱布湿敷，B组双耳耳廓后动脉前支造模后如意金黄散湿敷，C组不造模，不给药，做空白对照，3 w后收集标本，比较各组双耳耳廓后动脉前支留置针穿刺受损血管内皮细胞增殖标志物Ki-67表达、一氧化氮(NO)水平、内皮素(ET)-1水平、血管内皮细胞黏附分子(VCAM)-1表达。结果 B组血管内皮细胞Ki-67阳性表达显著高于A组(P<0.05)。A组NO水平显著低于C组(P<0.05),而B组NO水平显著高于A组(P<0.05)。A组ET-1水平显著高于C组(P<0.05),而B组ET-1水平显著低于A组(P<0.05)。A组VCAM-1表达显著高于C组(P<0.05),而B组VCAM-1表达显著低于A组(P<0.05)。结论如意黄金散外敷可通过多种机制显著改善新西兰兔穿刺受损血管的内皮功能，促进受损血管内皮功能的恢复。

关键词：
CKD
ESRD
如意金黄散
血管内皮功能
血管内皮细胞增殖
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血液透析是慢性肾脏病(CKD)终末期患者的主要治疗方式｡随着CKD发病率的逐年上升,需要依赖血液透析生存的终末期肾病(ESRD)患者数量不断增加〔1〕｡在血液透析过程中,血管通路是连接患者血液循环与透析设备的关键环节,其功能的稳定性和可靠性直接关系到透析治疗的效果和安全性〔2〕｡自体动静脉内瘘(AVF)因其使用寿命长､并发症少､感染风险低等优点,已成为血液透析患者的首选血管通路〔3〕｡但是,AVF的建立和维护仍有一定的挑战,如手术操作复杂､术后成熟时间长､部分患者可能出现瘘管狭窄或血栓形成等并发症,这些都可能影响AVF的长期功能〔4〕｡在AVF的日常维护中,反复的穿刺操作是不可避免的｡然而,穿刺对血管内皮造成的机械损伤是AVF功能障碍的重要原因之一〔5〕｡血管内皮细胞是血管内膜的重要组成部分,其功能的完整性对于维持血管的正常生理功能至关重要｡穿刺损伤会导致血管内皮细胞的损伤,进而引发一系列病理变化,包括血管内膜增生､血栓形成和炎症反应〔6〕｡这些病理变化不仅会降低AVF的血流量,还可能导致血管狭窄甚至闭塞,严重影响透析治疗的顺利进行〔7〕｡因此,维护血管内皮功能的完整性对于预防AVF功能障碍及其相关并发症具有极其重要的意义｡

近年来,传统中医药在血管通路维护中的应用逐渐受到关注｡如意金黄散是一种传统中药外敷剂,其配方源自明代著名外科医学家陈实功所著的《外科正宗》｡该药剂由多种中药材组成,包括大黄､黄柏､姜黄､苍术､天花粉､白芷等,具有清热除湿､消肿止痛､散结化瘀的功效〔8〕｡在中医临床实践中,如意金黄散被广泛应用于治疗静脉炎､软组织损伤､糖尿病足部溃疡等多种疾病,其通过改善局部血液循环､减少炎症反应和促进组织修复,发挥显著的治疗效果〔9~11〕｡前期研究〔12〕也表明,如意金黄散外敷能够改善局部血液循环,减少血栓形成,对血管功能具有一定的保护作用｡

基于以上背景,本研究旨在通过新西兰兔模型,探讨如意金黄散外敷对穿刺受损血管内皮功能的影响｡通过评估一氧化氮(NO)､内皮素(ET)⁃1水平及血管内皮细胞黏附分子(VCAM)⁃1表达等指标,深入分析如意金黄散对血管内皮功能的潜在调节作用,为临床应用提供科学依据｡本研究不仅有助于进一步揭示如意金黄散在血管保护中的作用机制,还可能为改善血液透析患者的血管通路维护提供新的策略和方法｡

1、材料与方法

1.1实验动物准备选取30只健康成年新西兰兔,普通级,购自潍坊圣诺实验动物养殖有限公司〔许可证号:scxk(鲁)20230001〕｡新西兰兔雌雄各半,体质量2.0~2.5kg,周龄8~10w｡饲养环境温度控制在22~24℃,湿度维持在40%~60%,配备良好的通风设施,并定期空气消毒,以确保饲养环境的清洁与卫生｡新西兰兔均喂养标准颗粒饲料,自由饮水｡饲养期间,定期观察新西兰兔的健康状况,确保无感染或其他疾病发生｡新西兰兔耳动脉均无畸形或损伤,皮下无瘀点､瘀斑,符合实验要求｡

1.2实验用药､试剂和仪器实验中使用的如意金黄散(主要成分包括姜黄､大黄､黄柏､苍术､厚朴､陈皮､甘草､生天南星､白芷和天花粉)由河南省中医院药学部提供｡蜂蜜采购自西安天正药用辅料有限公司｡实验动物脱毛膏采用白云山净肤脱毛膏｡消毒剂选用安尔碘,由山东利尔康医疗科技股份有限公司生产｡无菌棉签来自新乡市康民卫材开发有限公司｡一次性使用无针连接式留置针由山东安得医疗股份有限公司提供｡3M透明敷料购自明尼苏达矿业制造上海国际贸易有限公司｡生理盐水由信合援生制药有限公司供应｡无菌纱布由河南亚都实业有限公司生产｡组织固定液使用10%中性甲醛固定液｡苏木素⁃伊红(HE)染色液采用珠海贝索生物技术有限公司BaSO生产的高清恒定染色液｡全功能酶标仪为AgilentBioTek型号(SynergyNEO)｡全自动染色机为Tissue⁃TekPrismaPlus型号(DRS⁃Prisma⁃P⁃JCS)｡免疫组化一抗分别选用鼠抗人血管内皮细胞增殖标志物(Ki⁃67)抗体及鼠抗人VCAM⁃1抗体,二氨基联苯胺(DAB)染色试剂盒由基因科技上海股份有限公司提供｡ET⁃1､NO酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供｡免疫组化检测使用GAS95型号机器｡

1.3实验分组及留置针操作将30只新西兰兔适应性喂养7d后随机分为A､B､C组各10只｡采用兔子固定箱固定新西兰兔以限制其活动,去除A组､B组新西兰兔双耳耳背处兔毛,使用安尔碘消毒后,将针以15~30°的角度刺入耳廓后动脉前支,拔除针芯同时将导管全部送至血管,空针留置,使用3M透明敷料固定,标明穿刺时间,观察4h后拔除留置针,按压1~2min,以免渗血和皮下血肿形成｡采用绳梯法穿刺,每周穿刺3次,每次穿刺点间隔1cm,穿刺操作持续3w,实验兔每耳穿刺9针,每只兔双耳共穿刺18针｡

1.4给药每周2､4､6日为非穿刺日,对A､B组新西兰兔耳进行外敷药干预｡在给药前,新西兰兔耳毛均已剔除｡A组将无菌纱布浸满生理盐水后敷于新西兰兔双耳耳廓后动脉前支穿刺区域,使用3M透明敷料固定,持续敷药6h;B组实验动物,将调好的如意金黄散(辅料为蜂蜜)均匀涂于医用辅料上并敷于新西兰兔双耳耳廓后动脉前支穿刺区域,使用3M透明敷料固定,持续敷药6h｡外敷给药操作持续3w,A､B组每只新西兰兔耳部共敷药12次｡C组新西兰兔不进行穿刺和给药,作为空白对照组｡

1.5标本收集与处理在实验结束后,通过耳缘静脉留置针穿刺,采用空气栓塞法处死A､B､C三组新西兰兔｡取各组新西兰兔耳廓后动脉前支血管行组织学检查,A､B组新西兰兔取穿刺区域1.5cm血管,C组新西兰兔取耳廓后动脉前支血管1.5cm｡取下的血管组织置于10%中性甲醛固定液中固定,用于后续组织学检查｡

1.6检测指标(1)采用免疫组化法检测Ki⁃67表达;(2)采用ELISA检测血清中NO及ET⁃1水平;(4)采用免疫组化法检测VCAM⁃1表达｡

1.7统计学处理采用SPSS24.0软件进行独立样本t检验､校正后的t检验｡

2、结果

2.1如意金黄散对血管内皮细胞增殖的影响免疫组化结果显示,A组､B组Ki⁃67表达均显著高于C组(P<0.05)｡B组血管内皮细胞Ki⁃67阳性表达显著高于A组(P<0.05),表明如意金黄散可促进血管内皮细胞增殖｡见图1､表1｡

2.2如意金黄散对血管内膜的炎症反应的调节作用免疫组化结果显示,A组､B组VCAM⁃1表达显著高于C组(P<0.05),而B组VCAM⁃1表达显著低于A组(P<0.05),表明如意金黄散可减少受损血管内皮细胞的VCAM⁃1表达｡见图1､表1｡

2.3如意金黄散对血管内皮功能的调节作用A组NO水平显著低于C组,ET⁃1水平显著高于C组(P<0.05),而B组NO水平显著高于A组,ET⁃1水平显著低于C组(P<0.05),表明如意金黄散可显著提高受损血管内皮细胞的NO水平,同时降低ET⁃1水平｡见表1｡

图1如意金黄散对穿刺点处耳廓后动脉前支Ki⁃67､VCAM⁃1表达的影响(免疫组化染色)

表1各组Ki⁃67､NO､ET⁃1､VCAM⁃1表达比较(x±s,n=10)

3、讨论

Ki⁃67是一种细胞增殖标志物,其表达水平的升高反映了细胞周期的活跃程度〔13〕｡如意金黄散的这一作用可能与其成分中的多种中药材有关,如姜黄素(姜黄的主要成分)已被证实具有抗炎和促进细胞增殖的作用,能够通过激活细胞内的信号通路〔如磷脂酰肌醇3⁃激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路〕,促进细胞周期的进展,从而加速受损组织的修复过程〔14〕｡此外,大黄和黄柏等成分也具有抗炎和抗氧化作用,可能通过减轻细胞损伤,为内皮细胞的增殖创造有利的微环境〔15〕｡VCAM⁃1是炎症反应的重要标志物之一,其表达的增加与血管内皮功能障碍密切相关〔16〕｡炎症因子如肿瘤坏死因子(TNF)⁃α和白细胞介素(IL)⁃1β等能够诱导VCAM⁃1表达｡此外,VCAM⁃1的减少还可能通过减少白细胞与血管内皮细胞的黏附,减轻炎症细胞的浸润,从而进一步降低炎症反应对血管内皮细胞的损伤〔17〕｡NO和ET⁃1是调节血管舒张和收缩的重要因子｡NO是一种强效的血管舒张因子,其水平的升高有助于改善血管内皮的舒张功能,减轻血管内膜的损伤｡相反,ET⁃1是一种强效的血管收缩因子,其水平的降低能够减少血管的过度收缩,进一步改善血管内皮功能〔18,19〕｡

如意金黄散通过激活细胞增殖相关信号通路,加速受损内皮的修复,从而促进内皮细胞增殖;通过提高NO水平,降低ET⁃1水平,改善血管内皮的舒张功能,从而调节血管舒张因子NO和收缩因子ET⁃1的平衡;通过抑制炎症因子的产生和VCAM⁃1的表达,减轻炎症细胞的浸润,降低炎症对血管内皮细胞的损伤,从而减少炎症反应等多种机制显著改善新西兰兔穿刺受损血管的内皮功能,这些作用机制相互协同,共同促进了受损血管内皮功能的恢复,为如意金黄散在血液透析患者动静脉内瘘护理中的应用提供了新的理论支持｡这些结果也表明,如意金黄散可能作为一种有效的外敷药物,用于减少穿刺损伤对血管内皮的负面影响,降低血栓形成和血管狭窄的风险｡在临床实践中,如意金黄散的外敷应用有望成为一种简单､经济且有效的血管通路维护手段｡并且可以作为一种辅助治疗手段,与现有的血管通路维护方法相结合,以提高治疗效果｡

如意金黄散作为一种传统中药外敷剂,其在本研究中的表现进一步证实了中医药在现代医学中的重要价值｡本研究结果表明,如意金黄散不仅能改善血管内皮功能,还能通过调节血管舒张因子和收缩因子的平衡,发挥保护血管的作用｡这一发现为中医药在血管疾病中的应用提供了新的思路和方法,其抗炎和促修复作用也为中医药在伤口愈合和组织修复领域的应用提供了理论支持｡

本研究仍存在一些局限性｡首先,仅在新西兰兔模型中进行,其结果是否能够完全适用于人类患者仍需进一步验证｡其次,如意金黄散的具体作用机制尚未完全明确,未来研究可以通过分子生物学和细胞信号通路的研究,进一步揭示其作用机制｡此外,未来的研究还可以探索如意金黄散与其他治疗方法的联合应用,以进一步提高其临床应用价值｡

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