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HPLC-PDA法同时测定糖止丸中6种成分

2023-08-19 118 上传者：管理员

摘要：建立HPLC-PDA法同时测定糖止丸中绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry ShieLd-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相甲醇-水(含0.15%磷酸),梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长230、325 nm。结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 8),平均加样回收率99.64%～101.73%,RSD 0.56%～2.33%。结论该方法准确、可靠、灵敏，重复性好，可用于糖止丸的质量控制。

关键词：
巴马汀
盐酸小檗碱
盐酸黄连碱
糖止丸
绿原酸
芍药苷
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糖止丸为甘肃省中医院院内制剂(甘药制备字Z20200441000),是以仝小林教授经验方糖止方为基础研制而成的浓缩丸，由桑叶、茵陈、茯苓、党参等11味中药组成，主要用于治疗糖尿病前期，可预防本病发生。现代药理研究表明，茵陈中绿原酸具有抑制葡萄糖-6-磷酸酶[1,2]、抗氧化[3]、抗脂质过氧化[4]、抗糖尿病活性[5,6]及减缓2型糖尿病形成作用[7];赤芍中芍药苷类成分是抑制PTP 1B负调控、改善胰岛素抵抗的物质基础[8,9];黄连总生物碱对糖尿病肾病大鼠的肾功能有保护作用，能延缓肾功能衰竭过程，其中巴马汀、药根碱、表小檗碱、黄连碱及其他含量较低的甲基黄连碱、木兰碱等成分对糖尿病防治具有很好的促进作用[10,11];陈皮中橙皮苷、川陈皮素均有降糖、降脂作用[12,13]。为了保证糖止丸安全性、有效性、均一性，本实验参照2020年版《中国药典》[14],采用HPLC法同时测定绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷的含量，以期为该制剂质量控制提供科学依据。

1、材料

1.1仪器

Altus-A10型高效液相色谱仪，配置PDA检测器、四元泵、Empower3工作站等(美国Perkin Elmer公司);ZDHW型调温电热套(北京科伟永兴仪器有限公司);DZF-300型真空恒温干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);360EP型、125SM型电子天平(德国Satorius公司);HH-S4型电热恒温水浴锅(郑州长城科工贸有限公司);LA753型实验室纯化水机(上海威立雅水务设备安装工程有限公司);SB-320DTDN型超声波清洗器(宁波新芝生物科技有限公司)。

1.2试剂与药物

绿原酸(批号110753-201814,纯度96.8%)、芍药苷(批号110736-201842,纯度97.4%)、橙皮苷(批号110721-201818,纯度96.2%)、盐酸黄连碱(批号110715-201829,纯度96.8%)、盐酸小檗碱(批号110713-2011212,纯度86.7%)、巴马汀(批号110711-201806,纯度96.8%)对照品及各对照药材均购自中国食品药品检定研究院。糖止丸(40 g/瓶，批号210301、210302、210303、210401、210402、210403、210501、210502、210503、210601)由甘肃省中医院制剂中心制备。色谱纯甲醇(天津市大茂化学试剂厂);分析纯磷酸、甲醇(国药集团化学试剂有限公司);水为超纯水(由LA753型实验室纯化水机制备)。

2、方法与结果

2.1色谱条件

参照文献[15,16,17,18]报道，Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相甲醇(A)-水(含0.15%磷酸)(B),梯度洗脱(0～13 min, 15%A;13～50 min, 15%～23%A;50～60 min, 23%～30%A;60～75 min, 30%～55%A;75～76 min, 55%～15%A);体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长325 nm(0～35 min,绿原酸)、230 nm(35～76 min,芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷);进样量10μL。

2.2对照品溶液制备

精密称取绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷对照品适量，制成每1 mL分别含0.580、2.271、1.708、4.940、1.629、4.720 mg上述成分的贮备液，分别精密吸取适量，置于10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，即得(每1 mL分别含0.058 0、0.227 1、0.170 8、0.494 0、0.162 9、0.472 0 mg上述成分)。

2.3供试品溶液制备

精密称取本品粉末1.0 g,置于具塞锥形瓶中，加25 mL甲醇超声(250 W、50 kHz)处理30 min,滤过，滤液蒸干，甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，摇匀，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.4阴性样品溶液制备

按处方工艺，分别制得缺茵陈、缺赤芍、缺黄连、缺陈皮的阴性样品，按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5系统适用性考察

取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分均达到基线分离，理论塔板数均大于3 000,阴性无干扰。

2.6线性关系考察

精密吸取“2.2”项下对照品溶液适量，置于10 mL量瓶中，甲醇定容并制成系列质量浓度，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行回归，结果见表1,可知各成分在各自范围内线性关系良好。

图1各成分HPLC色谱图

表1各成分线性关系

2.7精密度试验

分别取绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷低质量浓度(0.003 5、0.013 6、0.010 2、0.029 6、0.009 8、0.028 3 mg/mL)、中质量浓度(0.023 2、0.090 8、0.068 3、0.197 6、0.065 2、0.188 8 mg/mL)、高质量浓度(0.058 0、0.227 1、0.170 8、0.494 0、0.162 9、0.472 0 mg/mL)对照品溶液适量，在“2.1”项色谱条件下各进样测定6次，测得各成分在低质量浓度下峰面积RSD分别为2.24%、0.83%、1.89%、0.97%、2.05%、0.74%,中质量浓度下分别为2.16%、0.66%、1.17%、0.52%、1.24%、0.32%,高质量浓度下分别为1.38%、0.43%、0.96%、0.35%、1.27%、0.49%,表明仪器精密度良好。

2.8重复性试验

取本品(批号210401)适量，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷峰面积RSD分别为2.83%、0.29%、0.92%、0.30%、1.23%、0.17%,表明该方法重复性良好。

2.9稳定性试验

取本品(批号210401)适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，于0、4、8、12、18、24 h在“2.1”项色谱条件下各进样10μL测定，测得绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷峰面积RSD分别为1.39%、0.37%、0.40%、0.25%、0.61%、0.08%,表明溶液在24 h内稳定性良好。

2.10加样回收率试验

取各成分含量已知的本品(批号210401)适量，研细，精密称取0.5 g,置于具塞锥形瓶中，共6份，按100%水平分别精密加入0.77 mg/mL绿原酸对照品溶液、1.64 mg/mL芍药苷对照品溶液、0.97 mg/mL盐酸黄连碱对照品溶液、1.976 mg/mL盐酸小檗碱对照品溶液、1.628 mg/mL巴马汀对照品溶液、0.634 mg/mL橙皮苷对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷平均加样回收率分别为101.73%、100.61%、100.57%、101.09%、99.64%、99.96%,RSD分别为2.33%、2.27%、1.59%、0.86%、1.58%、1.29%。

2.11样品含量测定

取10批样品，每批3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表2。

表2各成分含量测定结果(mg/g, n=3)

3、讨论

3.1提取溶剂选择

本实验分别考察了乙醇、甲醇及不同比例甲醇-水，发现甲醇提取时杂质峰较少，易于分离，故选择其作为提取溶剂。

3.2取样量、提取时间选择

本实验以各成分含量、杂质含量、色谱峰干扰情况为指标，分别考察了取样量0.5、1.0、2.0 g,发现取样1.0 g时色谱峰分离效果较好，干扰较少，故选择其作为取样量。在同一色谱条件下，本实验还分别考察了提取时间30、60 min,发现两者差异不大，考虑到效率，选择前者作为提取时间。

3.3检测波长选择

本实验在190～400 nm波长处进行扫描，发现绿原酸最大吸收波长为325 nm,而芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、橙皮苷在230 nm、最大吸收波长处的峰面积相差5%以内，为了便于测定，选择230 nm作为检测波长，并采用波长切换方式，可实现对所有成分含量的同时测定，降低杂质对其色谱峰的干扰。

参考文献:

[8]卜琨赤芍降血糖有效部位化学成分研究[D]北京:中国中医科学院,2013.

[9]孟广杰,刘静,朴成玉,等.赤芍相关药对配伍比例与药理作用研究进展[J]中医药学报,2020, 48(5):30-34.

[10]汤喜兰,唐剑彬,张启云,等黄连总生物碱对糖尿病大鼠降血糖作用研究[J]中国临床药理学与治疗学,2010,15(9):967-971.

[11]王新征,李燕黄连降糖作用机制的研究进展[J]中医临床研究,2021,13(12):125-127.

[12]刘沁如,向茗,瞿昊宇,等陈皮黑茶颗粒提取工艺条件对降糖降脂活性成分的影响[J]亚太传统医药,2021, 17(12)-66-73.

[13]谭乾开,李裕琳,唐小文陈皮提取物对a-萄萄糖苷酶的抑制作用研究[J].云南化工,2019,46(5):63-65.

[14]国家药典委员会中华人民共和国药典: 2020年版四部[S].北京:中国医药科技出版社,2020.

[15]周军,张黄,张茉,等HPLC法同时测定香连化滞丸中7种成分的含量[J].中国药房,2016,27(6):840-843.

[16]赵旭,汪坤HPLC同时测定栀黄止痛贴中栀子苷､大黄酸､芍药苷､盐酸小壁碱含量[J]中国中医药现代远程教育,2017,15(3):128-130.

[17]李广生,李玥瑛,张清波,等HPLC法测定天芪降糖胶袁中盐酸黄连碱和盐酸小檗碱的含量[J].中医药信息,2014,31(2):76-78.

[18]朱泓霖多波长RP-HPLC法同时测定盆炎净胶袁中绿原酸和芍药苷的含量[J]中国药品标准,2019,20(1):46-50.