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胃淋巴上皮瘤样癌临床病理特征及DHX37表达情况分析

2025-02-24 85 上传者：管理员

摘要：目的:探讨胃淋巴上皮瘤样癌（LELGC）临床病理特征及DHX37、PD-L1、CD4+和CD8+的表达情况。方法:收集10例LELGC,采用免疫组织化学标记DHX37、PD-L1、CD4+、CD8+及错配修复基因蛋白（MLH1,MSH2,MSH6和PMS2）,采用原位杂交检测EB病毒编码的小RNA（EBER）并探究其临床病理特征。筛选临床特征相仿的10例普通型胃腺癌作为对照。结果:10例LELGC年龄（55.00±10.19）岁；男性8例，女性2例；6例发生于胃体，2例发生于胃角，1例发生于贲门，1例发生于胃窦且为残胃癌。10例手术切除大体标本肿物类型均为溃疡型，最小径为1.7 cm,最大径为7.0 cm。10例LELGC均为错配修复蛋白功能完整（pMMR）且EBER阳性，其中CD8+T细胞数均大于CD4+T细胞数。PD-L1的CPS评分为（35.00±14.53）分；DHX37的平均阳性表达数为（42.26±13.11）。LELGC中DHX37在淋巴细胞表达比例低于普通型胃腺癌（P<0.05）,且该病PD-L1表达水平较高（P<0.05）。结论:LELGC的诊断及预后判断依赖于特征性病理形态和分子检测。细胞间质中主要以CD8+T细胞为主；LELGC较普通型胃腺癌表达更高的PD-L1和更低的DHX37,可能与此类患者良好的预后及免疫治疗效果的敏感性高有一定联系，提示了DHX37、CD4+、CD8+和PD-L1不同表达情况可能对于影响LELGC或普通型胃腺癌预后具有重要价值。

关键词：
DHX37
EB病毒
PD-L1
肿瘤微环境
胃淋巴上皮瘤样癌
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胃淋巴上皮瘤样癌(lymphoepithelioma-likegastriccarcinoma,LELGC),又称伴有淋巴样间质的胃癌或髓样癌,在2010年WHO消化系统肿瘤分类中被单独罗列出来｡LELGC在临床中较为少见,占胃癌的1%~4%,中老年男性多发,好发于近端胃(即胃体､贲门及胃底)和残胃,合体样肿瘤细胞及大量淋巴细胞间质是该病独特的临床病理学特征[1-2]｡LELGC可分为两个亚型:EB病毒(epstein-barrvirus,EBV)感染阳性(约占临床中LELGC的80%)和高频微卫星不稳定性(microsatelliteinstability-high,MSI-High),后者发病率具有明显的地域差异性[3]｡Grogg等[4]报道的110例LELGC中,未有1例同时出现EBV阳性和MSI-High,这与其他病例报道的结果一致,提示了EBV感染和MSI-High可能是参与LELGC不相关的两个病因通路,但是无论哪种亚型,LELGC都会出现淋巴细胞的广泛浸润,可能与患者预后较好有关｡

最新研究[5-6]表明,在部分肿瘤中CD8+T细胞上DHX37的表达上调可以降低淋巴细胞毒性及数量,从而有望作为评估预后和后续免疫治疗效果的指标,但该因子在胃癌中的作用及意义尚不明确｡目前,关于LELGC中DHX37表达情况及意义的国内外研究文献报道较少｡因此,本研究拟对10例LELGC进行回顾性分析并复习相关文献,进一步认识其病理形态学特征和其中DHX37､PD-L1､CD4+及CD8+的表达情况｡

1、资料与方法

1.1临床资料

收集2018年7月至2023年9月联勤保障部队第940医院10例诊断为LELGC患者的临床病理资料,同时筛选与LELGC临床特征相仿的10例普通型胃腺癌患者,包括患者的性别､年龄､肿瘤发生部位､肿瘤大小､大体类型､TMN分期､手术方式､治疗方法｡病理分期参考美国癌症联合委员会(AJCC)癌症分期(第8版)[7];病理诊断经两名高年资病理医师(副主任医师及以上)复核;本研究获得所有患者知情同意｡

1.2免疫组织化学检测

标本使用3.7%中性甲醛溶液固定､常规脱水､石蜡包埋,切片4μm;免疫组织化学采用EnVision二步法,标本均设立内对照;所用抗体依次为CKpan､Ki67､CD4+､CD8+､PD-L1､错配修复基因蛋白(福州迈新生物技术开发有限公司),DHX37(赛默飞世尔科技有限公司),所有免疫组化操作步骤严格按照说明书进行｡切片同时行EBER原位杂交,以棕褐色的细胞核着色为阳性结果｡

1.3免疫组化染色及结果判读

(1)PD-L1依据CPS评分:(阳性肿瘤细胞及阳性免疫细胞总数之和/存活肿瘤细胞总数)×100进行判读;(2)LELGC中CD4+､CD8+､DHX37判读:随机选择5个高倍镜视野(×400),结合K-viewer软件进行阳性细胞计数并人工复核,将每个高倍视野的阳性淋巴细胞计数后,取平均数代表样本中该因子阳性情况;(3)LELGC与普通型胃腺癌比较DHX37表达差异:两组患者均随机选择10个视野,每个视野选取100个T细胞并计数其中阳性细胞,取平均数代表样本中DHX37阳性情况｡

1.4统计学分析

利用SPSS27､GraphPadPrism9分析不同因子表达相关性､LELGC与普通型胃癌中DHX37及PDL1表达情况差异｡计量资料以(x-±s)表示,组间比较行独立样本t检验;计数资料以[n(%)]表示,组间比较行Fisher确切概率法检验;等级资料比较行秩和检验｡P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1临床资料

10例LELGC诊断时年龄为(55.00±10.19岁);男性8例,女性2例;6例发生于胃体,2例发生于胃角,1例发生于贲门,1例发生于胃窦｡其中,发生于胃窦的患者曾在35年前行胃大部切除术,为残胃癌｡10例手术患者均获得病理分期数据,其中1例发生远处转移｡见表1｡

表110例胃淋巴上皮瘤样癌临床病理学特征

2.2组织病理学特征

10例手术切除大体标本肿物类型均为溃疡型,最小径为1.7cm,最大径为7.0cm,边界较模糊,切面灰白灰红,质实(图1A)｡镜下观察:肿瘤组织呈小巢团状､细梁状排列或单个散在分布;细胞呈卵圆形,核呈空泡状､核仁明显､核膜较厚,核分裂象易见;间质中可见大量成熟淋巴细胞,较多浆细胞及少量中性粒细胞浸润,并可见淋巴滤泡形成,纤维组织较少(图1B-1C),10例LELGC均为错配修复蛋白功能完整(mismatchrepairproficient,pMMR),且EBER阳性(图1D)｡见图1｡

图1组织病理学特征

2.3免疫组织化学结果

所有病例均表达CKpan(图2A);Ki67阳性指数为20%~70%,且表达不同程度的CD4+､CD8+､PDL1及DHX37(图2B-2F);CD8+T细胞表达计数均大于CD4+T细胞的表达计数;PD-L1的CPS评分最高60,最低15,平均(35.00±14.53);DHX37的表达,最高64.8,最低20.4,平均(42.26±13.11)｡见表2｡

2.4治疗及随访10例LELGC进行了手术治疗,其中5例采取胃大部切除术,4例采取胃全切术,1例采取残胃全切术,所有患者术后均辅以化疗｡9例获得随访数据,随访时间3~65个月,平均随访时间(31.3±25.4)个月,中位随访时间23个月;其中2例在2年内死于该疾病,7例存活,其余1例失访｡见表2｡

图2免疫组化结果图

表210例胃淋巴上皮瘤样癌CD4+､CD8+､PD-L1､DHX37表达情况

2.5LELGC与普通型胃腺癌差异

对浸润性淋巴细胞中DHX37及肿瘤PD-L1的表达差异进行比较,得出LELGC中DHX37在淋巴细胞表达比例低于普通型胃腺癌(P<0.05),且该病PD-L1表达水平较高(P<0.05)｡见表3及图3｡

表3胃淋巴上皮瘤样癌与普通型胃腺癌患者中DHX37及PD-L1表达情况

3、讨论

LELGC临床中较为少见,通常症状以腹痛､腹胀､食欲不振､体重减轻为主,与普通胃癌无明显差别,肉眼观察多为溃疡型肿物｡本研究10例患者多为中老年男性,好发胃体,且多为溃疡性肿物,与文献[1]报道LELGC发病特点基本相符｡在一项有关13例EBV阳性胃癌的CT研究[8]中发现,此类肿瘤好发于胃上部,肿物厚度与宽度比值较大,不过该病也可有其他CT表现,包括局灶性粘膜增厚､增强CT可见明显的厚壁以及出现较大肿块,无特异性改变｡因此,仅通过临床及影像学检查很难诊断,主要根据镜下的特征性组织学改变而确诊｡首先肿瘤间质出现大量淋巴细胞､浆细胞等多种炎细胞浸润,间质纤维反应轻,这与普通型胃腺癌不一致,具有特征性[9];其次肿瘤呈巢团状､细梁状排列或散在分布,细胞体积较大且核呈泡状､核仁明显[10]｡

Burke等[11]在1990年发表的一项研究中首次证实该病与EBV相关｡LELGC与普通胃腺癌好发于胃窦部不同,胃底､胃体部发病率明显高于胃窦部,且幽门螺旋杆菌感染率较低[12]｡目前,EBV感染胃黏膜的机制尚不明确,有研究[13]发现,虽然胃黏膜上皮缺乏EBV受体CD21,但EBV可以通过一种未知的上皮特异性EBV结合受体来直接感染胃黏膜的上皮细胞｡也有部分学者[14]认为,EBV可能首先通过与B细胞表面受体CD21结合感染B细胞,再经细胞间直接接触从而感染胃黏膜上皮细胞｡EBV感染胃黏膜后并不会立刻引起疾病,而是使人体处于一种潜伏感染状态,在有外界因素引起胃黏膜上皮细胞损伤或自身免疫功能下降的情况下,EBV大量增殖,且机体受到相关EBV潜伏基因(包括LMP2A､EBER等)的调控[15-17],打破原有潜伏时的平衡状态,进而诱导肿瘤的发生｡

PD-L1作为重要的免疫检查点,对胃癌患者预后至关重要,且多种因子参与调节PD-L1的表达及影响T细胞的功能状态[18]｡DHX37是一种DEAHboxRNA解旋酶,参与小核糖体亚基的生物发生过程[19]｡在多种癌症中DHX37表达谱的生物信息学分析发现,DHX37是一种潜在的标志物并可作为评估患者预后的指标,且DHX37的表达与调节性T细胞和T细胞衰竭标志物呈正相关,有助于免疫耐受[20-21]｡一项实验性研究[6]表明,敲除DHX37的CD8+T细胞表达更高水平PD-1､Lag3和Tim-3｡但本实验对10例LELGC中上述因子相关性进行统计分析,尚未得出DHX37与PD-L1､CD4+､CD8+间存在相关性｡

为进一步探究LELGC中上述因子的表达特征,对比10例普通型胃腺癌患者进行差异分析｡由于LELGC患者间质淋巴细胞远大于普通型胃腺癌,因此采取阳性百分比的方法代表样本中DHX37阳性情况｡结果LELGC中DHX37在淋巴细胞表达比例低于普通型胃腺癌,且PD-L1表达水平较高｡提示此类患者接收免疫治疗获益几率可能大｡综上,初步推断DHX37低表达即CD8+细胞毒性T细胞应答效果明显和PD-L1高表达可能是LELGC患者预后和免疫治疗效果好的原因之一｡10例LELGC中CD8+T细胞表达计数均大于CD4+T细胞的表达计数,也可能提示间质中CD8+表达比例较大与该病预后较好有关｡对死亡的2名患者观察发现,表达较高的CD4+(9例中CD4+表达最高2例)和表达较低的PD-L1､DHX37(9例中PD-L1､DHX37表达最低2例),可能提示CD4+高表达､PD-L1低表达与患者较差生存有关｡上述结果提示,DHX37､CD4+､CD8+和PD-L1不同表达情况可能对于影响LELGC或普通型胃腺癌预后具有重要价值,但其机制尚不明确,需进一步探究｡

目前LELGC无针对性的治疗手段,临床治疗大多同常规胃腺癌一致,手术选择胃镜下黏膜剥脱术或根治切除术及周围淋巴结清扫术,根据患者术后情况辅以化疗,但是LELGC预后优于胃普通型低分化腺癌｡已有研究[22]表明,EBV阳性表达是LELGC患者预后较好的独立预测因素之一,且通过本研究所收集的10例EBV阳性LELGC患者的临床病理信息发现,EBV阳性LELGC的淋巴结转移率较低,PD-L1表达较高,与相关文献[23]报道相符｡LELGC预后可能与肿瘤间质广泛淋巴细胞浸润伴淋巴滤泡形成有关[24],这种现象一定程度反映了机体对肿瘤细胞产生了明显的免疫应答,有效清除肿瘤细胞从而限制肿瘤的发展,利于患者的预后｡本实验通过对LELGC中DHX37､CD4+､CD8+和PDL1表达进行研究,发现其不同于普通型胃腺癌的特点｡PD-1/PD-L1抑制剂及DHX37相关靶向药物可能是未来治疗EBV阳性LELGC所必需的｡

参考文献:

[7]刘光艺,黄镇,王子卫.第8版国际抗癌联盟和美国癌症联合委员会胃癌TNM分期系统简介及解读[J].腹部外科,2017,30(4):241-245.

基金资助:甘肃省科技计划资助项目(省青年科技基金,22JR5RA022); 中国人民解放军联勤保障部队第940医院项目(2021yxky049);

文章来源:郭小冬,王环环,姬菩忠,等.胃淋巴上皮瘤样癌临床病理特征及DHX37表达情况分析[J].川北医学院学报,2025,40(02):137-141.