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H3K56ac蛋白表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征及预后的关系

2025-07-26 50 上传者：管理员

摘要：目的探讨组蛋白H3第56位赖氨酸乙酰化（histoneH3lysine56acetylation,H3K56ac）蛋白表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征及预后的关系。方法选取161例乳腺浸润性导管癌组织和40例癌旁组织，用免疫组化EnVision二步法检测组织中H3K56ac蛋白的表达；通过χ2检验分析H3K56ac蛋白的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系；使用Kaplan-Meier和Logranktest统计学方法分析H3K56ac蛋白与乳腺癌患者预后的关系；采用logistic回归分析影响乳腺癌复发转移的影响因素。结果H3K56ac蛋白在癌旁组织中低表达率为45.0%,乳腺浸润性导管癌中低表达率为64.6%,H3K56ac蛋白在乳腺浸润性导管癌的低表达率高于癌旁组织（χ2=5.158,P=0.023）;H3K56ac蛋白在肿瘤最大径>5cm组的低表达率明显高于≤5cm组（χ2=5.886,P=0.015）,复发转移组的低表达率高于无复发转移组，差异有统计学意义（χ2=4.479,P=0.034）;H3K56ac蛋白低表达时患者无进展生存时间较短（P=0.037）,H3K56ac蛋白表达与年龄、月经情况、组织学分级、分子分型、肿瘤-淋巴结-远处转移（tumornodemetastasis,TNM）分期及淋巴结转移无关（P>0.05）;单因素和多因素logistic回归分析显示TNM分期和H3K56ac蛋白低表达是乳腺癌复发转移的独立影响因素（P<0.05）。结论H3K56ac蛋白低表达与乳腺浸润性导管癌分期有关，可能对患者的预后有预测价值。

关键词：
乳腺癌
乳腺肿瘤
免疫组织化学
组蛋白
组蛋白H3第56位赖氨酸乙酰化
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乳腺癌是全球女性最常见的癌症，同时也是女性因癌死亡的首要疾病，在我国乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势［1］。表观遗传学研究发现，组蛋白H3第56位赖氨酸乙酰化(histoneH3lysine56acetylation，H3K56ac)在基因转录中发挥着重要作用，常与恶性肿瘤的发生发展相关［2－3］。组蛋白H3K56ac最早发现位于酵母中核小体进出口区域，沉积于DNA新复制合成的核小体中，在DNA损伤后，促进染色质组装，维持基因组稳定［3］，在肝癌细胞系SNU-475和SK-Hep-1的研究中发现，H3K56ac过表达抑制了细胞活性、集落以及迁移［4］，在人乳腺癌细胞株MCF-7中，H3K56ac水平下降会促进细胞的增殖和迁移［5］，但H3K56ac在乳腺癌实体肿瘤中的研究鲜有报道。本研究通过免疫组化法检测乳腺癌组织中H3K56ac蛋白的表达情况，分析H3K56ac蛋白与乳腺癌临床病理特征及预后的关系，探究H3K56ac在乳腺癌中的表达及其临床意义。

1、材料与方法

1.1实验材料

1.1.1临床资料

收集贵州医科大学附属医院病理科161例未经新辅助化疗的乳腺浸润性导管癌患者乳腺组织蜡块作为研究对象，整理临床病理特征［年龄、月经情况、组织学分级、分子分型、肿瘤最大径、肿瘤-淋巴结-远处转移(tumornodemetastasis，TNM)分期、淋巴结转移］及5年生存预后资料，收集40例乳腺癌旁正常组织蜡块进行对照。由两位乳腺病理专业主任医师根据《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2021年版)》［6］，采用双盲法对乳腺癌复片，确定均为乳腺浸润性导管癌，并进行分级和分子分型。

1.1.2主要试剂

Anti-HistoneH3(acetylK56)抗体(abcam，兔抗人多克隆抗体)购自上海基因公司，二甲苯、无水乙醇、Mayer苏木素染液(索莱宝)，PBS粉剂(博士德)，一抗稀释液(碧云天)，二抗稀释液(碧云天)，山羊血清、柠檬酸盐、EDTA均购自贵州永博鑫公司。

1.2研究方法

1.2.1免疫组织化学

组织蜡块经切片、烤片、脱蜡、水化后采用EnVision二步法进行免疫组化染色［7］。EDTA(pH8.0)120℃高压修复3min，冷却后PBS冲洗3次，每次5min;滴加3%过氧化氢孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min;滴加一抗(稀释比为1∶100)，37℃温箱孵育1h后PBS冲洗3次，每次5min;加二抗温箱孵育1h，PBS冲洗后DAB显色3min，经苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明后封固。

1.2.2结果判读

H3K56ac在胞核中出现粗颗粒状、片状黄色或棕黄色着色为阳性。由两位病理医师按双盲法随机选取10个高倍视野，计数1000个上皮细胞，以染色强度(无表达为0分，点状淡黄色为1分，粗颗粒状和片状黄色为2分，棕黄色为3分)和阳性细胞百分比(＜1%为0分，≥1%～≤25%为1分，＞25%～≤50%为2分，＞50%～≤75%为3分，＞75%为4分)的乘积为免疫组化结果评分，即免疫反应分数(immunoreactivescore，IＲS)。IＲS≤8分为低表达，＞8分为高表达［8］。

1.3统计学分析

采用SPSS23.0软件对实验数据进行统计分析，计数资料以例数(n)和百分比(%)表示，率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关性进行检测。运用Kaplan-Meier和Logranktest统计学方法分析H3K56ac蛋白与乳腺癌预后的相关性。采用单因素logistic回归找出影响乳腺癌复发转移的显著因素，全部纳入logistic回归模型进行多因素回归分析影响乳腺癌复发转移的影响因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1H3K56ac蛋白在癌旁组织及浸润性导管癌组织中的表达

H3K56ac蛋白在癌旁组织中高表达，在浸润性导管癌中低表达。见图1。H3K56ac蛋白在乳腺浸润性导管癌中低表达率为64.6%，在癌旁组织中低表达率为45%，乳腺浸润性导管癌的低表达率高于癌旁组织(χ2=5.158，P=0.023)。

图1H3K56ac蛋白在癌旁组织和浸润性导管癌中的表达

2.2H3K56ac蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系

H3K56ac蛋白在肿瘤最大径＞5cm组的低表达率高于≤5cm组，复发转移组的低表达率高于无复发转移组，差异有统计学意义(P＜0.05);H3K56ac蛋白表达与年龄、月经情况、组织学分级、分子分型、TNM分期及淋巴结转移无关，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.3H3K56ac蛋白表达与乳腺癌患者预后的关系

应用Kaplan-Meier和Log-ranktest统计学方法分析，显示H3K56ac蛋白与无进展生存时间有关(P=0.037)，H3K56ac蛋白低表达时患者无进展生存时间较短;H3K56ac蛋白与总生存时间无关，差异无统计学意义(P＞0.05，图2)。单因素logistic回归分析显示组织学分级、肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移和H3K56ac与乳腺癌复发转移有关，差异有统计学意义(P＜0.05，表2)。

2.4影响乳腺癌复发转移的多因素logistic回归分析

把影响乳腺癌复发转移的全部单因素纳入回归模型，多因素logistic回归分析显示TNM分期是乳腺癌复发转移的危险因素(OＲ=1.902，P=0.027)，H3K56ac蛋白是乳腺癌复发转移的保护因素(OＲ=0.882，P=0.028)，见表3。提示TNM分期和H3K56ac蛋白低表达是乳腺癌复发转移的独立影响因素。

表1H3K56ac蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系

图2H3K56ac蛋白与乳腺癌预后的关系

表2影响乳腺癌复发转移的单因素logistic回归分析

表3影响乳腺癌复发转移的多因素logistic回归分析

3、讨论

表观遗传学已成为广泛生物学进展的基础［9］，组蛋白乙酰化是表观遗传学中组蛋白修饰的一种，与癌症的发生发展有关［10］，在许多癌症中发现组蛋白H3乙酰化异常［11］，H3K56ac通过影响核小体的结构促进DNA修复，维持基因组稳定［3］，缺乏H3K56ac的酵母菌对DNA损伤高度敏感［12－14］。在哺乳动物的研究中发现，H3K56突变的细胞系中多倍体/非整倍体细胞数量增加，细胞异型更明显［15］。在对肝癌细胞系SNU-475和SKHep-1的研究发现，H3K56ac过表达抑制了细胞活性、集落以及迁移［4］。在MCF-7人乳腺癌细胞株中，H3K56ac水平下降会促进MCF-7细胞的增殖和迁移，上调H3K56ac水平可部分抑制MCF-7细胞的增殖能力和迁移能力［5］，H3K56ac表达与乳腺癌细胞增殖和迁移呈负相关。本研究发现，H3K56ac蛋白在乳腺浸润性导管癌的低表达率高于癌旁组织(P＜0.05)，H3K56ac蛋白在肿瘤最大径＞5cm组的低表达率高于≤5cm组，复发转移组的低表达率高于无复发转移组(P＜0.05)，这与李玉凤等［5］在MCF-7人乳腺癌细胞株中的研究一致。综合以往研究，提示H3K56ac可能通过促进DNA修复，维持基因组稳定，而H3K56ac下调时可致DNA修复失败发生基因突变，而增加癌变风险。

众所周知，癌症常伴有快速转移，晚期乳腺癌患者常因脑转移死亡［16］。癌细胞转移能力与细胞活性、集落数量以及迁移有关［4］，下调H3K56ac水平会促进MCF-7细胞的增殖和迁移［5］。本研究结果显示，复发转移组H3K56ac蛋白低表达率高于无复发转移组(P＜0.05)，H3K56ac蛋白低表达时患者无进展生存时间较短(P＜0.05)，单、多因素logistic回归示H3K56ac蛋白低表达是乳腺癌复发转移的独立影响因素，这符合以往在细胞中的研究。H3K56ac可能通过调节Ｒas-PI3K下游因子CYＲ61、NT5E及GDF15来调节癌细胞的生长［4］，在乳腺癌中CYＲ61的过度表达导致E-钙黏蛋白和FOXO1的减少，促进癌细胞的侵袭和增殖［17］，发生骨转移的乳腺癌患者经常表现为NT5E高表达［18］，GDF15在紫杉醇耐药的三阴性乳腺癌细胞中显著升高，并与不良预后显著相关，沉默GDF15会抑制肿瘤细胞的增殖［19］。由此推测，H3K56ac可能促进了乳腺癌细胞的增殖以及复发转移。

组蛋白修饰是一个可逆的过程，保持着快速动态平衡［20］，CBP和P300乙酰化H3K56ac，SIＲT2、SIＲT6以及HDAC1/HDAC2使H3K56ac去乙酰化［21－23］。有文献报道，SIＲT6通过增强促炎细胞/趋化因子(如IL8和TNF)的表达，促进胰腺癌细胞的迁移［24］。在MDA-MB-231乳腺癌细胞株的研究中发现，小檗碱可能通过下调P300和H3K56ac蛋白，上调SIＲT2蛋白增强细胞对阿霉素的敏感性［25］。

综上所述，H3K56ac蛋白在乳腺浸润性导管癌中低表达，对乳腺癌不良预后可能有预测价值，进一步研究H3K56ac在组蛋白修饰中发挥的作用，可能为乳腺癌的诊断和治疗找到新靶点。

参考文献:

[5]李玉凤,刘岩,李玉辉,等.Ras-PI3K信号负性调节的H3K56乙酰化促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力[J].中国生物化学与分子生物学报,2016,32(3):319-325.

[6]中国抗癌协会乳腺癌专业委员会.中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2021年版)[J].中国癌症杂志,2021,31(10):954-1040.

[7]孙紫君,杨宇石,黄瑾瑾,等.BRCA2蛋白表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系[J].贵州医科大学学报,2020,45(6):655-659.

[8]杨宇石,石玉,郑美娟,等.乳腺癌中乙酰化转移酶P300和H3K56乙酰化蛋白表达与新辅助化疗及临床病理特征的相关性[J].临床与实验病理学杂志,2018,34(7):747-751.

基金资助:贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwjkj2018-1-062);

文章来源:段彦林,杨宇石,金柔,等.H3K56ac蛋白表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征及预后的关系[J].贵州医科大学学报,2025,50(07):1029-1034.