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MACC1、c-Met蛋白在肺癌中的表达及意义

2024-05-10 63 上传者：管理员

摘要：目的探讨肺鳞癌和肺腺癌癌组织中结肠癌转移相关基因(MACC)1和肝细胞生长因子受体(c-Met)的表达及其与临床病理学特征的关系。方法应用免疫组化检测104例肺癌患者癌组织及癌旁正常肺组织中MACC1与c-Met蛋白的表达情况，分析两者与临床病理学参数的关系。结果肺癌组织中MACC1阳性表达率[67.30%(70/104)]高于正常肺组织[23.08%(22/104)],差异有统计学意义(χ2=44.906,P<0.05)。肺癌组织中c-Met的阳性表达率[69.23%(72/104)]高于正常肺组织[23.08%(24/104)],差异有统计学意义(χ2=44.571,P<0.05)。肺鳞癌中c-Met的阳性表达率显著高于肺腺癌，吸烟组c-Met的阳性表达率显著高于非吸烟组(P<0.05)。MACC1与病理类型及吸烟史无关。MACC1及c-Met的表达水平与肺癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间均有明显关系；MACC1蛋白与c-Met蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 MACC1与c-Met高表达在肺癌发生、发展中起重要作用，MACC1及c-Met高表达促进了肺癌细胞的侵袭和转移。

关键词：
免疫组织化学
结肠癌转移相关基因1
肝细胞生长因子受体(c-Met)
肺癌
肺肿瘤
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肺癌是起源于支气管黏膜或腺体的恶性肿瘤，在许多国家已居癌症相关死因之首，其发病率逐年上升，其中非小细胞肺癌占肺癌总数的80%～87%。虽然近年来肺癌的早诊早治有了长足的进步，但由于肺癌易发生浸润、转移，5年生存率较低。复发与转移是决定患者取得良好预后的重要因素，因此，需要加大对肺癌复发、转移分子机制的研究。结肠癌转移相关基因(MACC)1定位于染色体7p21.1,是结肠癌原发和转移机制研究中的重要基因，是肝细胞生长因子/肝细胞生长因子受体(HGF/c-Met)信号转导通路的关键调节因子，能够独立预测结肠癌形成和远处转移。近两年，人们在MACC1基因对肿瘤发生发展的影响及其对癌症预后方面的影响进行了研究，发现MACC1基因极有可能成为治疗肿瘤转移的一个新靶点。c-Met原癌基因存在于人类7号染色体长臂(7q21-31),其蛋白产物是c-Met酪氨酸激酶受体。MACC1和c-Met基因在肺癌发生和转移的作用机制尚不完全清楚。本研究应用免疫组化方法检测肺鳞癌和腺癌组织及癌旁正常肺组织中MACC1与c-Met的表达情况，进而分析两者与肺癌临床病理学参数的关系，探讨其在肺癌发生、发展、转移及预后的作用，为肺癌的诊断和预后提供指导。

1、材料与方法

1.1 病理组织来源

选择2018年1月至2019年1月河北北方学院第一附属医院胸外科104例肺癌手术患者，分别切取癌组织和癌旁正常组织标本(距肿瘤边缘5 cm以上),中位年龄61.2岁；分期采用2009年国际肺癌协会(IASLC)/国际抗癌联盟(UICC)公布的肺癌第七版TNM分期，其中Ⅰ期24例，Ⅱ期32例，Ⅲa期20例，Ⅲb期28例。患者术后随访3年，随访终止日期为2022年1月30日。患者术前均未行放疗或化疗。

1.2 材料

兔抗人MACC1多克隆抗体IgG和c-Met兔抗人多克隆抗体IgG分别购自美国Sigma公司和北京博奥森生物技术有限公司；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)染色试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色

MACC1和c-Met蛋白的表达情况使用免疫组化SP法进行检测。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，同时以试剂公司提供的阳性标本切片为阳性对照。判定标准：MACC1、c-Met的阳性表达者细胞膜和细胞质被染成浅黄色、棕黄色或黄色。细胞膜和细胞质不着色的细胞为阴性细胞。具体判定标准：由经验的病理医师，每张切片在高倍镜下(×400)随机选取10个视野，计数100个细胞。对细胞阳性表达率和染色强度进行综合分析：阳性细胞率：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%者为3分；染色强度：无染色者为0分，弱染色者为1分，中等染色者为2分，强染色者为3分；将上述两种评分相加，≥3分者为阳性，<3分者为阴性。

1.4 统计学分析

采用SPSS22.0软件进行χ2检验、Kaplan-Meier分析、Spearman等级相关分析。

2、结果

2.1 MACC1和c-Met在肺癌原发灶中及癌旁正常肺组织中的表达

MACC1和c-Met着色主要分布于细胞膜和细胞质，高倍镜下呈棕黄色颗粒，MACC1在肺癌组织中高表达，阳性表达率[67.30%(70/104)]与正常肺组织[23.08%(22/104)]差异有统计学意义(χ2=44.906,P<0.05)。c-Met在肺癌组织中高表达，阳性表达率[69.23%(72/104)]与正常肺组织[23.08%(24/104)]差异有统计学意义(χ2=44.571,P<0.05)。见图1。

图1 MACC1和c-Met在肺癌组织中阳性表达(SP法，×200)

2.2 MACC1和c-Met与肺癌临床病理特征的关系

MACC1的阳性表达率与肺癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间明显有关(P<0.05),c-Met的阳性表达率与吸烟史、肺癌的病理类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间明显有关(P<0.05)。见表1。

2.3 MACC1与c-Met表达的相关性

MACC1阳性患者中c-Met阳性60例，MACC1阴性患者中c-Met阳性12例。Spearman等级相关分析显示，两者在肺癌组织中表达呈显著正相关(r=0.512,P<0.05)。

2.4 MACC1、c-Met与患者生存分析

100例患者获术后随访，平均21.9个月。MACC1阴性患者中位总生存期(OS)为33.5个月，MACC1阳性患者OS为26.8个月，两者间Kaplan-Meier法分析差异显著(χ2=10.244,P=0.001)。c-Met阴性患者的OS为33.5个月，c-Met阳性患者OS为26.0个月，两者间Kaplan-Meier法分析差异显著(χ2=10.312, P=0.001),说明MACC1、c-Met阴性患者获得较高OS。见图2。

表1 肺癌组织中MACC1与c-Met阳性表达与临床病理参数的关系(n)

图2 MACC1、c-Met表达阴性与阳性患者OS比较

3、讨论

MACC1是一种调控肿瘤生长和转移的重要基因，MACC1是新近发现的与结肠癌的发生和转移密切相关的基因。体外研究发现，MACC1能够诱导肿瘤细胞的增生、增殖及迁移，是HGF/c-Met信号通路中Mrt基因的关键调节因子，在肿瘤的发生及发展中也起主要作用，研究表明，MACC1在结肠癌[1]、恶性胶质瘤[2]、肺癌[3]、胃癌[4]、乳腺癌[5]等癌组织中高表达。肺癌的预后判断一直是临床面临的重大难题之一，判断肺癌患者是否会复发或者转移需要一个敏感的监测指标。本研究发现，MACC1阳性表达率与肺癌患者的预后密切相关，阳性表达率越高，预后越差，同时患者拥有的生存期越短。因此，可以认为MACC1可能作为肺癌患者预后及复发转移危险性的预测因子。本实验结果说明，MACC1表达上调在肺癌的发生发展过程中起着重要作用。

c-Met由间充质-上皮细胞转化因子(MET)基因编码产生，具有自主磷酸化活性的跨膜受体，它负责调控细胞的增殖、分化、运动和凋亡等重要过程[6,7]。c-Met信号通路的异常激活，可以导致细胞过度增殖，参与多种肿瘤的发生发展。正是由于c-Met激酶参与了多种肿瘤的发生发展，使其成为抗肿瘤药物的一大热门研究方向，受到了国内外的普遍重视，越来越多的新型c-Met抑制剂正在逐步开发[8]。期待着通过对c-Met通路的进一步研究，能够推动肺癌诊断及治疗的发展[9,10]。本实验结果说明，c-Met 蛋白在肺癌中起一定作用，c-Met 表达上调与吸烟有关。有学者研究发现，烟草提取物可以上调c-Met并激活下游的蛋白激酶B(AKT)信号通路，沉默c-Met可减少AKT的激活[11]。因此，c-Met 可能是烟草致癌的靶基因，香烟烟雾会增加非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中c-Met的癌基因成瘾性，MET抑制剂可能对有吸烟史的肺癌患者显示出临床获益。本文结果提示c-Met 可能与肺鳞癌的恶性演进关系更为密切，c-Met 的表达上调在肺癌侵袭转移过程中发挥重要作用。

上皮-间质转化(EMT)是指上皮细胞失去上皮表型，从而获得间充质表型的转化过程，EMT过程被认为与肿瘤细胞的浸润转移的密切相关。HGF/c-Met信号通路是MACC1影响肿瘤转移的重要通路之一[12],异常的HGF/c-Met信号通路调节EMT的发生过程，进而促进肿瘤发生过程的各种恶性行为。MACC1在多种类型的人类恶性肿瘤中高表达，并能促进癌细胞的增殖、转移和癌细胞的耐药性。但是MACC1表达的调控机制仍然不清楚。癌变的关键调节因子MACC1在肿瘤中通过wnt/β-catenin信号通路介导表达，MACC1是结肠癌细胞中wnt/β-catenin信号通路的直接目标，结肠癌细胞中wnt信号刺激MACC1表达的激活。在MACC1基因的内含子中存在一个增强区，这是wnt/β-catenin信号诱导所必需的，并且β-catenin通过MACC1增强子和启动子之间的染色体循环来增强MACC1的表达[13]。 c-Met可通过c-Met/AKT依赖的正反馈回路促进细胞的EMT、侵袭和迁移[14]。MACC1、c-Met通过调控MACC1/Met/AKT信号通路来参与EMT过程[15]。本研究提示，MACC1蛋白和c-Met蛋白可能以协同或互补的方式共同参与EMT发生，进而促使了肺癌的发生发展及侵袭转移。

综上，MACC1蛋白和c-Met表达与肺癌发生、发展及预后密切相关，MACC1和c-Met表达上调在EMT中发挥着重要作用，下调MACC1及c-Met的表达，将为肺癌的基因治疗及抗肿瘤药物的研发提供新的思路。

基金资助:2017年度河北省医学科学研究重点课题计划(No.20170779);

文章来源:董跃华,魏玉磊,高永山,等.MACC1､c-Met蛋白在肺癌中的表达及意义[J].中国老年学杂志,2024,44(09):2222-2225.