分析加减补肺汤、地塞米松联合治疗对IPF小鼠胶原沉积的影响性

2020-05-29 265 上传者：管理员

摘要：目的考察用加减补肺汤联合地塞米松对特发性肺纤维化（idiopathicpulmonaryfibrosis,IPF）小鼠肺细胞外基胶原蛋白和外周血中纤维连接蛋白（Fibronectin,FN）含量的影响。方法以博来霉素诱导建立IPF实验小鼠模型，监测每天小鼠体重和行为学特征。予加减补肺汤（中药组）、地塞米松（激素组）、加减补肺汤加地塞米松（联合组）行药物干预。观察指标:肺组织单位面积内的胶原面积S，积分吸光度（A），支气管肺泡灌洗液的FN含量。结果与正常组实验小鼠比较，中药组、激素组和联合组的胶原面积S，积分吸光度（A）减少，BALF中FN含量降低，联合组的改善更显著（均P<0.05）。结论加减补肺汤联合地塞米松可抑制IPF小鼠肺细胞外基质胶原蛋白和FN的过度沉积，阻止肺组织纤维化的进程。

关键词：
IPF
加减补肺汤
地塞米松
小鼠
肺组织胶原蛋白
肺间质疾病
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IPF是慢性、进行性恶化的肺间质疾病。无论哪种病因所致，其主要病理变化均为成纤维细胞增殖、形成纤维成细胞灶，肌成纤维细胞增殖，和细胞外基质（ECM）过度沉积。研究发现，在IPF发生、发展过程中，胶原Ⅰ和Ⅲ型胶原等肺组织胶原含量的表达有明显变化[1,2]。本研究拟考察用加减补肺汤联合地塞米松对IPF小鼠肺组织相关胶原蛋白含量表达的影响。

1、材料

1.1药物和试剂

自制加减补肺汤组成：黄芪20g、党参10g、补骨脂15g、百部10g、桑白皮10g、丹参15g。加8倍量水煎煮1h，水煎2次，浓缩为每毫升含生药1g,4℃冰箱保存备用。

1.2IPF小鼠模型的建立及分组

清洁级昆明种小鼠70只，雌雄各半。自由饮食喂养一周。随机分为中药组（10只）、激素组（10只）、联合药物组（40只）和对照组（10只）。除了对照组（滴注0.1mL生理盐水），其他3个组经麻醉后分别行气管中切、逐层剥离暴露气管后，往气管软骨环向心端以注射器滴注实验药物，各0.1mL，均为上午给药，其中联合组在下午给予加减补肺汤滴注。给药方案均每天1次，连续4周。

1.3观察指标

肺组织胶原蛋白相关指标：药物干预后第28d，取左肺上叶组织，使用HE染色法，采用日本奥林巴斯光学显微镜观察肺组织胶原形态学（胶原纤维分布、组织形态学改变）。采用Masson染色法检测肺组织胶原，采用放射免疫分析法检测支气管肺泡灌洗液中的FN含量（μg/L）。采用图像分析软件，分析肺组织单位面积内的胶原纤维面积（S，%）和积分吸光度（IA）。

2、结果

2.1肺组织形态学

光镜下肺组织胶原呈蓝色。可见：对照组小鼠的肺泡结构紊乱，肺泡腔扩大，肺泡隔、肺间质、血管壁周围的胶原纤维均增多，肺泡弹性减弱呈囊状扩张，以炎性淋巴细胞堆积为主。其他3个治疗组（中药组、激素组和联合组）的情况好于对照组，其中联合组的支气管结构正常，肺组织的病理改变减轻较其他两个治疗组明显，炎症细胞的浸润也少于对照组及其他两个治疗组。

2.2肺组织胶原蛋白含量

与对照组小鼠（7.82±2.39）%比较，中药组（5.66±1.34）、激素组（5.19±1.15）和联合组（2.57±2.03）胶原面积S均降低。与对照组小鼠（0.55±0.20）比较，中药组（0.43±0.16）、激素组（0.36±0.18）和联合组（0.20±0.14）积分吸光度（A）均降低。与对照组小鼠（21.44±2.08）μg/L比较，中药组（17.15±3.67）、激素组（16.80±3.52）和联合组（7.93±2.10)BALF中FN含量均减少。与其他3个组比较，联合组如上指标改善更显著（均P<0.05）。

3、讨论

临床将糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗肺纤维化，仅10%～30%患者病情可改善[3]。长期应用以上药物可出现严重药物副作用。故地塞米松等在临床的应用受限。加减补肺汤由元代李仲南所著《永类玲方》中的补肺汤化裁而来。本院呼吸科应用该方已10余年。本研究前期基础实验果显示：加减补肺汤可改善COPD肺气虚症实验大鼠的呼吸系统症状和体征，降低肺泡灌洗液IL-8,TNF-α含量；可提高血及肺组织GSH、SOD及GSH-PX，降低MDA，有较好抗氧化作用。本前期临床试验结果显示：加减补肺汤可改善COPD疾病稳定期肺脾气虚证患者的症状，降低IL-8,TNF-α含量。慢性肺组织炎症可引起气道重构，可致ECM（肺细胞外基质）合成与降解失衡，导致ECM过度沉积。ECM主要成分是胶原蛋白和FN。本研究结果显示：与其他几个组比较，联合组的肺组织胶原纤维面积S和积分吸光度均降低，FN含量均减少，表明联合用药方案可更好地抑制IPF小鼠肺组织胶原沉积。

笔者分析，地塞米松可抑制IPF小鼠肺泡炎症因子，而减轻对成纤维细胞刺激，故可抑制IPF小鼠肺纤维化的病情发展。本研究以博来霉素复制IPF实验小鼠模型，其肺组织纤维化形成有急性炎性期、纤维形成期和纤维化的三个阶段。从中医角度，其病变涉及肺、脾、肾三脏。其重要病机是虚瘀相合，故其肺病变不断进展。联用加减补肺汤，诸组分齐奏效，具有补肺、益气、清热的作用，故可直接或间接抑制CTGF表达，抑制IPF小鼠肺纤维化的胶原，而实现抗IPF小鼠肺组织纤维化作用。总之，本研究结果与前期结果吻合，前后研究成果的一致性良好。

综上，加减补肺汤协同地塞米松可抗炎、控制纤维形成过程中的胶原蛋白和FN过度沉积。

参考文献：

[1]杨长福,刘杨,徐昌君,等.补肺汤对肺纤维化中自噬蛋白Cat-D,beclin-1,p62的影响[J].中国新药杂志,2017,10(16):78-85.

[2]刘杨,朱星,徐昌君,等.补肺汤对肺纤维化小鼠肺组织中自噬相关蛋白的影响[J].中药材,2017,5(1):33-35.

[3]刘先斌.辨证分期联合西药治疗支气管哮喘随机平行对照研究[J].实用中医内科杂志,2015,9(8):103-105.

邓颖,杨长福,刘明,耿晓照.IPF小鼠胶原沉积受加减补肺汤､地塞米松联合治疗的影响性分析[J].心理月刊,2020,15(11):214.