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血清微小RNA-221联合前列腺特异性抗原检测对前列腺癌的探析

2023-11-01 54 上传者：管理员

摘要：目的探讨血清微小RNA-221(miR-221)联合前列腺特异性抗原(PSA)检测对前列腺癌的诊断价值，分析血清miR-221与前列腺癌临床病理特征及预后的关系。方法收集2019年1月至2020年6月在宜春市第三人民医院行前列腺穿刺活检术的患者60例，其中病理结果为前列腺癌(前列腺癌组)患者34例、前列腺增生(前列腺增生组)患者26例，测得2组患者的血清miR-221相对表达量及PSA水平，分析miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断价值，探讨前列腺癌组血清miR-221与患者年龄、前列腺体积、临床分期、分化程度及Gleason评分等临床病理特征的关系。以前列腺癌患者的内分泌治疗去势抵抗时间为指标，分析血清miR-221与前列腺癌患者预后的关系。结果不同Gleason评分、临床分期及分化程度患者血清miR-221相对表达量比较差异有统计学意义(t=7.387,P<0.001;t=7.897,P<0.001;t=7.212,P<0.001)。血清miR-221相对表达量与患者内分泌治疗后的去势抵抗时间呈负相关(r=0.58,P<0.001)。血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断具有一定价值，曲线下面积为0.835(95%CI:0.725～0.945,P<0.001),敏感性为0.78,特异性为0.85。结论血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌具有一定的诊断价值，有助于提高单纯PSA检测的特异性；不同临床分期、Gleason评分及分化程度的前列腺癌患者血清miR-221相对表达量存在显著差异；miR-221高表达的前列腺癌患者内分泌治疗去势抵抗时间缩短，预示患者的预后可能较差。

关键词：
前列腺特异性抗原
前列腺癌
微小RNA-221
诊断
预后
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近年来，前列腺癌的发病率逐年上升，严重危害男性健康[1]。由于前列腺癌早期症状不够典型，我国前列腺癌患者诊断时多以中晚期为主，因此可靠的肿瘤检测指标能够有助于前列腺癌的早期诊断，为患者争取宝贵的治疗时间。目前大多数前列腺癌的筛查依靠前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)水平，但由于PSA容易受到射精、炎症、检查操作(导尿、膀胱镜、直肠指诊)等影响[2],在特异性方面仍有不足，人们致力于寻找更加可靠的方式用于前列腺癌的诊断和预后评估。在近年的研究中，微小RNA(micro RNA-221,miR-221)作为一种小RNA分子被证实在前列腺癌的诊断中具有一定的检验效能[3],本研究旨在分析血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断价值以及其与前列腺癌患者临床病理特征和预后的关系，现报道如下。

1、资料与方法

1.1 临床资料

选取2019年1月至2020年6月在宜春市第三人民医院行超声引导下前列腺穿刺活检术的患者，收集患者年龄、前列腺体积、病理结果、血清PSA水平等，病理为前列腺癌的患者同时收集其Gleason评分、分化程度及临床分期等。纳入研究的所有患者年龄52～73(62.7±5.3)岁；血清PSA水平为(40.23±20.17)ng/mL;病理结果示前列腺癌患者34例(前列腺癌组)、前列腺增生患者26例(前列腺增生组)。在所有34例前列腺癌患者中，Ⅰ～Ⅱ期患者16例、Ⅲ～Ⅳ期患者18例；Gleason评分<8分者15例，Gleason评分≥8分者19例。纳入标准：1)行超声引导下前列腺穿刺活检病理证实为前列腺癌或前列腺增生；2)临床资料完整；3)术后规律行前列腺癌内分泌治疗且定期复查PSA及睾酮水平；4)术后随访满2 a者。排除标准：1)存在严重的肝、肾及心脑血管疾病者；2)内分泌治疗期间同时行前列腺癌根治术或化疗、放疗等其他治疗者；3)合并其他肿瘤的患者；4)随访期间因非疾病原因死亡者。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集

血清标本采集：2组研究对象入院后均采集空腹静脉血5 mL保存于促凝管中，于4 ℃环境下1 200 g离心10 min, 分离血清并保存于-80 ℃冰箱中待检。

1.2.2 miR-221相对表达量

采用实时定量逆转录PCR技术进行检测。首先按照miRcute miRNA提取分离试剂盒(DP501)[天根生化科技(北京)有限公司]说明书进行miRNA的提取。逆转录反应严格按照miScript Reverse Transcription Kit[天根生化科技(北京)有限公司]说明书步骤进行操作，将RNA逆转录为cDNA。PCR反应按照miScript Reverse Transcription Kit[天根生化科技(北京)有限公司]说明书进行，PCR反应条件如下：95 ℃预变性15 min, 94 ℃ 20 s, 60 ℃ 30 s, 共40个循环。反应结束后分析PCR反应曲线，以U6为内参基因，采用2-△△CT法计算miR-221相对表达量。

miR-221引物序列：正向5’-TGAACATCCAGGTCTGGGGC-3’,反向5’-GA-GAACATGTTTCCAGGTAGCCT-3’,U6引物序列：正向5’-GCTTCGGCAGCAC-ATATACTAAAAT-3’,反向5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0进行数据分析；符合正态分布的计量资料用

表示，比较用t检验；计数资料用百分数表示，比较用χ2检验； miR-221的截断值通过绘制受试者工作特征曲线计算；血清miR-221相对表达量与生化复发时间的相关性分析用Pearson相关分析法；检验水准α=0.05。

2、结果

2.1 血清miR-221相对表达量与前列腺癌临床病理特征的关系

不同Gleason评分、临床分期及分化程度患者血清miR-221相对表达量比较差异有统计学意义(t=7.387,P<0.001;t=7.897,P<0.001;t=7.212,P<0.001)。见表1。

表1 血清miR-221相对表达量与前列腺癌临床病理特征的关系

2.2 血清miR-221相对表达量与内分泌治疗去势抵抗时间的关系

本研究纳入的所有患者诊断后均行规律前列腺癌内分泌治疗，通过对患者的随访记录患者去势抵抗时间，标准为同时具备以下条件：1)血清睾酮达去势水平(<500 ng/L或<1.7 nmol/L);2)间隔1周，连续3次血清PSA水平上升，较最低值升高50%以上。血清miR-221相对表达量与患者内分泌治疗去势抵抗时间呈负相关(r=0.58,P<0.001)。见图1。

图1 血清miR-221与前列腺癌内分泌治疗去势抵抗时间散点图

2.3 血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断价值

血清miR-221相对表达量诊断前列腺癌的曲线下面积(area under the curve, AUC)为0.812(95% CI:0.703～0.921,P<0.001),当截断值为0.488时，敏感性为0.79,特异性为0.75;PSA检测前列腺癌诊断标准为>10 ng/mL,诊断前列腺癌的AUC为0.619(95%CI:0.472～0.765,P<0.001),敏感性为0.85,特异性为0.61;血清miR-221联合PSA检测的诊断标准为血清miR-221相对表达量>0.488且PSA>10 ng/mL,此时AUC为0.835(95%CI:0.725～0.945,P<0.001),敏感性为0.78,特异性为0.85。3种诊断方式的受试者工作特征曲线见图2。

图2 3种方式诊断前列腺癌的受试者工作特征曲线比较

3、讨论

目前，前列腺癌正迅速成为世界范围的常见恶性肿瘤之一，也是导致男性癌症相关死亡的重要原因[4],人们一直致力于发现新的前列腺癌诊断、治疗及预后预测指标，以期提高前列腺癌患者生存率。近些年，很多权威的证据表明，miR与许多疾病有关，并被开发为疾病的诊断和预后预测标志物，或者作为治疗的靶点[5],其中miR-221被认为与前列腺癌的发病、进展及预后密切相关。miR-221是一种位于X染色体p11.3位点的短链非编码RNA,与miR-222共用一个启动子且具有相似的序列结构及生物学功能[6]。有研究[7]表明，miR-221不仅在甲状腺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤中均呈异常高表达，而且参与了肿瘤的发生、增殖、侵袭、转移等过程。

在肿瘤发生方面，miR-221能靶向作用于p27/Kipl、p57等抑癌基因，间接激活细胞周期，阻断细胞凋亡配体，在肿瘤的发生过程中发挥类似于致癌基因的作用[8]。在本研究中，前列癌患者的血清miR-211相对表达量较前列腺增生患者明显升高，利用其特性同时联合PSA检测在诊断时具有良好的检测效能，其AUC值为0.835(95% CI:0.725～0.945,P<0.001),表明两者联合检测具有更加科学的敏感性及特异性。

在肿瘤的侵袭方面，Dart等[9]的研究表明，对于高度侵袭性的PC3细胞系，miR-221的表达明显上调，而如果其从基因组中缺失则可导致细胞生长的减慢、细胞黏附力的减退。本研究通过比较不同临床病理特征的前列腺癌患者血清miR-221相对表达量后发现，不同年龄、PSA水平以及前列腺体积的患者miR-221相对表达量无明显差异，而不同肿瘤分期、分化程度及Gleason评分的患者miR-221相对表达量的差异存在统计学意义，这可能也暗示了miR-211的表达差异可能与肿瘤的分化、转移等有关。

前列腺癌最初表现为雄激素依赖特性，雄激素能够促进肿瘤生长与进展，因此初期癌症患者对雄激素剥夺疗法敏感，然而几乎所有的患者都会进展为去势抵抗性前列腺癌[10]。本研究结果显示，前列腺癌患者发生去势抵抗的时间与miR-221相对表达量呈负相关，表明miR-221高表达可能对前列腺癌细胞的雄激素依赖性起到抑制作用。Sun等[11]的研究推测雄激素受体能够抑制miR-221的表达，经雄激素剥夺疗法后miR-221表达上调，高表达的miR-221通过其作用靶点HECTD2和RAB1A促进非雄激素依赖细胞的生长，加快了患者雄激素剥夺疗法后的去势抵抗进程。

此外，结合近年研究发现，miR-221针对前列癌的作用机制较为复杂，也有其他研究结果显示其在前列腺癌患者血清中的表达下调[12,13,14],而关胜等[15]通过研究发现前列腺癌患者血清miR-221的相对表达量与PSA水平呈正相关。

综上所述，血清miR-221联合PSA检测具有一定的临床诊断价值，但其对前列腺癌的具体作用机制仍有待进一步研究。

参考文献:

[2]曹希亮,高江平,韩刚,等.以前列腺特异抗原水平分组筛查与前列腺穿刺阳性率的关系[J].中华外科杂志,2006,44(6):372-375.

[3]张进.前列腺癌组织miR-221和miR-222的表达及临床意义[J].中国老年学杂志,2012,32(12):2472-2474.

[4]黄桂海,李伟.前列腺特异性抗原相关参数在前列腺穿刺中的应用及其研究进展[J].现代泌尿外科杂志,2019,24(1):72-76.

[7]龙斌,李林法,易贺庆.miR-221/222在肿瘤诊治中的研究进展[J].中国基层医药,2016,23(16):2542-2545.

[14]谢国平,姜睿.非编码RNAs在去势抵抗性前列腺癌中的研究进展[J].中华男科学杂志,2015,21(11):68-73.

[15]关胜,曹林升,徐皖江,等.前列腺癌患者血清miR-221水平与临床特征的关系及诊断价值[J].浙江医学,2019,41(21):2288-2291.

文章来源:李旭,刘飞,徐荣等.血清微小RNA-221联合前列腺特异性抗原检测对前列腺癌的诊断及预后评估价值[J].肿瘤基础与临床,2023,36(06):487-490.