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HPK1 GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌患者中的表达及与预后分析

2024-02-01 54 上传者：管理员

摘要：目的分析造血祖细胞激酶1(HPK1)、生长调节蛋白-β(GROβ)及THRSP蛋白在乳腺癌患者中的表达及与预后的相关性。方法选取2016年1月—2019年12月温州市中医院收治的乳腺癌患者100例，取所有患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本，采用免疫组化染色法检测GROβ水平，Western blot法检测HPK1、THRSP表达量。结果癌旁组织中HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量分别为(1.62±0.35)、(47.23±6.56)pg/ml、(1.13±0.16);癌组织中HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量分别为(1.16±0.19)、(116.35±25.59)pg/ml、(1.57±0.31)。与癌旁组织相比，癌组织中HPK1表达量较低，GROβ、 THRSP蛋白表达量较高(均P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ期、Ⅳ期、低分化患者中HPK1表达量较低，GROβ、 THRSP蛋白表达量较高(均P<0.05)。乳腺癌癌组织中HPK1与GROβ表达量呈负相关(r=-0.292,P<0.05),GROβ与THRSP表达量呈正相关(r=0.277,P<0.05),HPK1与THRSP表达量呈负相关(r=-0.348,P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示：HPK1、 GROβ、 THRSP蛋白是乳腺癌患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论 HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌组织中表达异常，与TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移相关，三者表达和乳腺癌患者预后有一定相关性。

关键词：
THRSP蛋白
乳腺癌
生长调节蛋白-β
造血祖细胞激酶1
预后
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乳腺癌为临床常见的恶性肿瘤，在女性中具有较高发病率，且乳腺癌为妇科发病率最高的恶性肿瘤[1,2,3]。大多数乳腺癌患者采取手术切除乳腺组织，会对患者身心健康造成严重威胁。我国乳腺癌发病率一直居高不下，已经发展成一种普遍的公共卫生问题[4]。若患者得不到及时的诊断和治疗，乳腺癌会对患者生命安全造成严重威胁，对乳腺癌进行早诊断、早治疗，对改善预后有重要意义[5,6]。本研究收集乳腺癌患者手术切除标本，检测造血祖细胞激酶1(HPK1)、生长调节蛋白-β(GROβ)及THRSP蛋白表达量，旨在分析HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量及与乳腺癌患者预后的相关性。

1、资料与方法

1.1 资料来源

选取温州市中医院2016年1月—2019年12月收治的100 例乳腺癌患者，癌组织标本、距癌组织5 cm以上的癌旁组织。患者年龄38～62岁，平均(50.30±9.60)岁；Ⅰ期23例， Ⅱ期26例， Ⅲ期27例，Ⅳ期24例；癌组织分化程度：高分化26例，中分化35例，低分化39例。纳入标准：所有患者均符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范》中的诊断标准[7], 且进行手术。排除标准： ①临床资料不全； ②未进行手术； ③心、肾、肝等脏器功能不全者； ④存在其他恶性肿瘤；⑤无法进行沟通。患者及家属均知情同意，并签署同意书，经温州市中医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 GROβ表达检测

采用免疫组化法测定GROβ表达，将待检癌组织、癌旁组织贴附于经多聚赖氨酸处理过的破片上，石蜡切片(切片厚度4 μm)脱蜡至水，并经10%甲醛溶液固定，95%乙醇浸泡12 h, 3% H2O2条件下避光孵育8 min, PBS洗涤3次，滴加复合物增强剂，并进行石蜡包埋，常温孵育5 min, 自来水充分冲洗以去除PBS,滴加一抗(鼠抗人),5 ℃孵育过夜，次日PBS缓冲液洗涤3次，5 min/次，加入DAB显色6 min, 根据颜色变化(棕色本底出现)终止反应，复染、梯度乙醇脱水、透明封片，使用电子显微镜(青岛菲优特检测有限公司，型号JEM-2100)进行观察。记录GROβ表达量。

1.2.2 Western blot法检测HPK1、THRSP表达量

取患者癌组织、癌旁组织，采用RIPA裂解液，从癌组织、癌旁组织的匀浆中提取蛋白。使用Western blot法检测HPK1、THRSP表达量。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0统计学软件分析数据。计量资料用述，组间对比采用LSD-t检验，多组间比较行F检验，影响因素分析采用logistic回归模型。相关性采用Pearson相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌癌组织和癌旁组织中的表达量对比

与癌旁组织相比，乳腺癌癌组织中HPK1表达量较低，GROβ、THRSP蛋白表达量较高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1、图1、图2。

表1 HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌癌组织和癌旁组织中的表达量对比

图1 HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌癌旁组织中的表达(免疫组化染色，×40)

图2 HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌组织中的表达(免疫组化染色，×40)

2.2 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者淋巴结转移情况的关系

与无淋巴结转移患者相比，有淋巴结转移患者HPK1表达量较低，GROβ、THRSP蛋白表达量较高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者淋巴结转移情况的关系

2.3 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者TNM分期的关系

与Ⅰ、Ⅱ期患者相比，Ⅲ、Ⅳ期患者HPK1表达量较低，GROβ、THRSP蛋白表达量较高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

表3 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者TNM分期的关系

2.4 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者分化程度的关系

与高分化患者相比，中分化患者HPK1表达量较低，GROβ、THRSP蛋白表达量较高，差异均有统计学意义(t=2.668,5.091,2.500,均P<0.05);与中分化患者相比，低分化患者HPK1表达量较低，GROβ、THRSP蛋白表达量较高，差异均有统计学意义(t=4.257,4.098,2.482,均P<0.05)。见表4。

2.5 乳腺癌癌组织中HPK1、GROβ、THRSP蛋白表达量的相关性

对乳腺癌癌组织中HPK1、GROβ、THRSP蛋白表达量的相关性进行分析，结果显示：HPK1表达量与GROβ表达量呈负相关(r=-0.292,P<0.05),GROβ表达量与THRSP表达量呈正相关(r=0.277,P<0.05),HPK1表达量与THRSP表达量呈负相关(r=-0.348,P<0.05)。见图3。

2.6 乳腺癌患者预后危险因素的多因素logistic回归分析

多因素logistic回归分析结果显示：HPK1、GROβ、THRSP蛋白表达量是乳腺癌患者预后的危险因素(均P<0.05)。见表5。

表4 HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量与乳腺癌患者分化程度的关系

图3 乳腺癌中HPK1、GROβ及THRSP蛋白表达量的相关性

表5 乳腺癌患者预后危险因素的多因素logistic回归分析

3、讨论

乳腺癌是临床常见的乳腺恶性肿瘤，相比其他脏器，是临床治疗效果较理想的恶性肿瘤[8,9,10]。若乳腺癌患者得不到及时、有效的治疗，由于癌细胞排列较稀松、易脱落的原因，癌细胞可通过机体内血液、淋巴液进行转移，使患者生命安全受到较大影响，故临床早期对乳腺癌进行诊断，可改善临床治疗效果与预后[11,12]。临床尚未明确乳腺癌发病机制，故需通过基础医学、分子生物学方向进行研究[13,14]。

HPK1在机体炎症反应、免疫调节通路以及造血细胞生物学行为调控中具有重要作用[15]。研究[16]表明：HPK1表达变化与膀胱癌、肺癌等恶性肿瘤的发生、发展具有密切联系，HPK1能够预测恶性肿瘤的发生、发展，调控HPK1表达可对肿瘤的发展产生抑制作用。相关研究[17]显示：在乳腺癌患者体内， HPK1 表达较低，且与患者的病情严重程度以及预后具有密切联系。本研究结果显示：HPK1在乳腺癌癌组织中呈异常低表达，说明HPK1表达变化在乳腺癌发生、发展过程中发挥重要作用，与上述研究结论一致。本研究发现：HPK1表达与淋巴结转移、TNM分期、分化程度相关，说明HPK1参与乳腺癌的发生、发展。

GROβ是机体炎症反应发生、发展过程中不可缺少的一环[18]。近年来，有学者[19]对GROβ在恶性肿瘤发生、发展过程中的作用进行研究，发现：GROβ在癌组织发展、转移、新生血管形成过程中具有重要作用。研究[20]显示：GROβ作为一种特殊的肿瘤细胞因子，在结直肠癌、肝癌等恶性肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用，但是目前国内外关于GROβ水平变化在乳腺癌发生、发展过程中作用的研究还相对较少。本研究结果显示：GROβ在乳腺癌癌组织中水平较高，说明GROβ水平异常升高在乳腺癌发生、发展过程中作用较大。GROβ表达量可受到淋巴结转移、 TNM 分期、分化程度的影响，推测GROβ 水平变化可能参与乳腺癌的发生、发展。

有学者[21,22]研究显示：THRSP蛋白在乳腺癌组织中的表达明显异常，在癌组织发展、代谢状况控制中发挥重要作用。本研究结果发现：在乳腺癌癌组织中，THRSP蛋白表达量较高，说明 THRSP 蛋白可参与乳腺癌的发生、发展，且在淋巴结转移、 Ⅲ期、Ⅳ期、低分化组织中，THRSP蛋白表达量较高，说明THRSP蛋白表达变化在乳腺癌发生、发展过程中发挥重要作用。

综上所述，HPK1、GROβ及THRSP蛋白在乳腺癌组织中的表达量明显异常，与TNM分期、分化程度、淋巴结转移相关，三者表达和乳腺癌患者预后有一定相关性，可能共同参与乳腺癌的发生、发展。

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