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胃癌患者Bmi-1、CDH17、胃蛋白酶原检测及与临床病理特征的关系

2021-09-27 75 上传者：管理员

摘要：目的:探究胃癌患者黏膜组织细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)、肝肠钙黏连蛋白17(CDH17)及胃蛋白酶原(PGC)表达,并分析这3项指标与患者临床病理特征的关系。方法:随机选取2016年12月—2019年12月确诊并行手术的胃癌患者80例,另选择同期30例胃良性病变患者作为对照组。取手术标本切片,进行免疫组织化学法测定胃黏膜组织Bmi-1、CDH17、PGC及肿瘤标志物[血清糖类抗原50(CA50)、CA199、CA242、CA724及癌胚抗原(CEA)]表达,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有患者血清肿瘤标志物水平,根据胃癌TNM分期分为Ⅰ～Ⅳ期,对比不同分期各指标差异,并分析Bmi-1、CDH17及PGC与临床病理特征的相关性。结果:胃癌患者Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性水平均显著高于胃良性病变患者(P<0.05);随着胃癌患者TNM分期升高,Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性率进一步升高,胃癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者Bmi-1、CDH17及PGC阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者血清及胃黏膜组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平显著高于胃良性病变患者,且随着胃癌患者TNM分期升高,血清CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平进一步升高,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman等级相关分析结果显示,胃癌组织中Bmi-1、CDH17、PGC、CA50、CA199、CA242、CA724及CEA表达存在呈正相关性(P<0.05)。胃癌患者不同性别、不同年龄、是否远处转移Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤分化程度、不同TNM分期、是否淋巴转移、不同肿瘤大小、不同浸润深度Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌的发生发展过程中,Bmi-1、CDH17、PGC表达明显提高,并与胃癌患者的临床病理特征存在相关性,检测Bmi-1、CDH17、PGC表达对于反映胃癌生物学行为具有重要意义。

关键词：
临床病理特征
细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点1
肝肠钙黏连蛋白17
胃癌
胃蛋白酶原
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胃癌为消化系统中发病率较高的恶性肿瘤疾病，多数患者早期无典型症状，部分患者存在上腹不适、嗳气等非特异性症状，因而十分容易出现误诊、漏诊。早期胃癌可通过根治性手术切除，患者预后较为良好，而随着胃癌临床分期增加，胃癌患者预后逐渐变差，5年生存率明显降低。随着细胞分子生物学的不断发展，多种蛋白分子为胃癌的早期诊断和治疗及预后评估提供了可能。细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)为转录抑制因子多巯基家族的一员，Bmi-1表达水平与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后等病理指标存在密切关系。肝肠钙黏蛋白17(CDH17)为近年新发现的一种钙黏蛋白，其在正常机体中仅在肝肠组织中表达，在恶性肿瘤患者中其表达水平明显升高，且在其他组织中也有表达。胃蛋白酶原(PGC)主要反映胃底生理病理变化，可提示胃底异性增生、腺管萎缩及肠上皮化生等多种疾病状态。目前对于胃癌的诊断主要依赖病理检查电子胃镜及CT、MRI影像学检查为主，其专业要求较高，推广普及难度较大，尤其是基层医院。而多种肿瘤标记物表达及作用检测为胃癌的早期筛选及预后评估提供了更加简便实用的方法。因此，本研究对胃癌组织Bmi-1、CDH17、PGC表达水平进行检测，并分析了三者与临床病理特征的关系，现报告如下。

1、资料与方法

1.1对象

随机选取2016年12月—2019年12月于我院确诊并行手术的胃癌患者80例，其中男46例，女34例；年龄39～77岁，平均(58.3±3.8)岁；TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期26例，Ⅲ期20例，Ⅳ期12例；分化程度：低分化26例，中分化33例，高分化21例；肿瘤大小：<5cm55例，≥5cm25例；浸润深度：T118例，T227例，T324例，T411例；淋巴结转移：是32例，否48例；远处转移：是14例，否66例。纳入标准：①合并上腹部隐痛、反酸及饱胀不适等临床表现，并经病理及影像学等检查确诊;②均为初次确诊，未经手术、放化疗等治疗；③符合手术相关指征，并择期行手术治疗；④均自愿签署知情同意书；⑤临床资料完整，能够配合完成研究。排除标准：①合并肝、肾等器官严重功能障碍者；②合并其他消化系统疾病者；③合并其他恶性肿瘤者；④胃癌复发患者；⑤存在沟通障碍者。并选择同期30例胃良性病变患者作为对照组，其中男17例，女13例；年龄37～75岁，平均(57.8±3.6)岁；病理类型：胃溃疡6例，胃息肉6例，胃平滑肌瘤2例，慢性萎缩性胃炎7例，慢性浅表性胃炎9例；排除合并其他消化系统疾病、其他脏器或组织恶性肿瘤及肝肾等脏器功能异常者。各组患者性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究获得医学伦理委员会批准通过。

1.2方法

1.2.1临床资料统计

所有患者入院后详细记录性别、年龄、疾病史、手术史等基线资料，胃良性病变患者并记录病理类型，胃癌患者并记录TNM分期、分化程度、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及远处转移等情况。

1.2.2血清指标检测

所有患者入院后收集3mL空腹静脉血，3000r/min离心15min分离血清，-80℃保存待测，所有血清均于收集当日完成检测。采用电化学发光免疫分析法检测血清糖类抗原50(CA50)、CA199、CA242、CA724及癌胚抗原(CEA)水平，试剂盒由上海生工生物工程有限公司提供，严格依照试剂盒说明书执行各项操作。

1.2.3免疫组化染色检测

①主要试剂：鼠抗人Bmi-1单克隆抗体、绵阳抗人PGC多克隆抗体购自美国Abcam公司，CDH17、CA50、CA199、CA242、CA724及CEA单克隆抗体均购自北京中山金桥生物技术有限公司，兔抗绵羊IgG抗体购自美国SantaCruz公司，SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。②取所有患者病理组织蜡块，切片机连续切片为4μm组织切片，常规脱蜡水化，加入3%的过氧化氢浸泡10min抑制内源性过氧化物酶活，抗原修复，分别加入1抗和2抗，37℃孵育30min,PBS冲洗2次，加入SABC,37℃孵育30min,PBS重新3次。加入DAB显色，苏木精对比染色，脱水、透明、封片，显微镜下观察。各指标阳性细胞表达采用半定量积分法，每个切片选取10个高倍视野，统计阳性细胞数，具体标准为，显色强度：0分，无显色；1分，浅黄色；2分，黄色；3分，棕黄色；4分，棕褐色。阳性细胞数统计：0分，视野内无阳性细胞；1分，视野内阳性细胞数占25%以下；2分，25%<视野内阳性细胞数≤50%;3分，50%<视野内阳性细胞数≤75%;4分，视野内阳性细胞数>75%。以两者评分之和作为阳性判断标准：0分，阴性(-);≥1分为阳性，其中1～2分，弱阳性(+);3～4分，中度阳性(++);5分以上，强阳性(+++)。

1.3统计学分析

采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，计数资料以%表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以x¯±s表示，组间两两比较采用t检验，3组及以上比较采用单因素方差分析；Spearman等级相关分析Bmi-1、CDH17、PGC及肿瘤相关标志物之间的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1各组血清及胃黏膜组织肿瘤标志物表达比较

胃癌患者血清及胃黏膜组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平显著高于胃良性病变患者，且随着胃癌患者TNM分期升高，血清CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平进一步升高，各组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期胃癌患者胃黏膜组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2各组胃黏膜组织Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性水平比较

胃癌患者Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性水平均显著高于胃良性病变患者(P<0.05);随着胃癌患者TNM分期升高，Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性率进一步升高，胃癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者Bmi-1、CDH17及PGC阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3胃癌胃黏膜组织Bmi-1、CDH17、PGC及肿瘤标志物表达相关性分析

Spearman等级相关分析结果显示，胃癌组织中Bmi-1、CDH17、PGC、CA50、CA199、CA242、CA724及CEA表达存在正相关性(P<0.05)。见表3。

2.4胃黏膜组织Bmi-1、CDH17、PGC表达与临床病理特征的关系

胃癌患者不同性别、不同年龄、是否远处转移Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤分化程度、不同TNM分期、是否淋巴转移、不同肿瘤大小、不同浸润深度Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

3、讨论

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，尽早诊治对于改善患者预后至关重要，多数患者在肿瘤早期诊断中缺乏足够重视，多数就诊时已错过最佳的诊疗时机。肿瘤抗原检测具有快速、无创等优点，在胃癌等肿瘤临床诊断中得到普遍认可。CA50在各类肿瘤组织中表达水平相较于正常组织明显升高，反映了肿瘤组织的细胞分化、细胞功能等情况。CA199为胰腺癌、消化道肿瘤等筛查的常用糖类抗原，对于消化道肿瘤血源性复发、腹膜复发等检查具有显著价值。CA242为肿瘤鞘糖脂类抗原，对于消化道恶性肿瘤诊断具有一定的敏感性，CA724是胃癌诊断的重要标志物，CEA在正常机体中浓度较低，在胃肠道肿瘤中可反流至淋巴和血液中，导致血清CEA水平升高。本研究中，胃癌患者血清及胃黏膜组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平相比于胃良性病变患者明显升高，提示各肿瘤标志物表达对于胃癌辅助诊断具有一定价值。房静远等究表明，胃癌发生发展的病理过程机制复杂，因素多样，肿瘤标志物在不同肿瘤发展阶段表达存在一定的差异；本研究随着胃癌患者不同TNM分期，血清CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平差异显著，这与前述研究结果相似；但胃癌组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA阳性率比较无明显差异，这可能与患者纳入较少导致数据存在偏差有关。

王秋兰等研究指出，肿瘤的发生过程中伴随着一定程度的组织多态性和遗传基因不稳性，因此需要更具敏感性和特异性的标志物。Bmi-1为参与细胞增殖调控的一类核蛋白，肿瘤细胞高表达Bmi-1基因被认为是肿瘤迅速发展的可靠标志。并有研究认为Bmi-1高表达为恶性肿瘤患者预后差的一项独立危险因素。钙黏蛋白能够促进上皮间质转化，诱导细胞于胞外基质黏附，调控信号传导途径刺激细胞增殖并抑制细胞凋亡从而参与肿瘤的发生及发展。CHD17主要表达于胰腺导管上皮细胞、肠上皮细胞及胚胎组织中，在胃黏膜组织、食管上皮细胞中几乎不表达。CHD17可增强基质金属蛋白酶活性，降低E-钙黏蛋白活性，促进胞外基质重塑和降低，引发黏附机制失调，促进肿瘤细胞转移。国内外研究证实，CDH17在胰腺癌、肝癌等恶性肿瘤中均明显高表达。胃蛋白酶原为胃蛋白酶的前提物质，PGC为胃蛋白酶原的主要亚群之一，PGC分泌提示了危险细胞的分化成熟，其水平与胃黏膜生理病理变化存在密切关系。本研究，胃癌黏膜组织中Bmi-1、CDH17、PGC阳性表达率较胃良性病变患者胃黏膜组织表达水平明显升高，提示Bmi-1、CDH17、PGC参与了胃癌的发生发展过程，可作为胃癌患者病情检测的重要指标。

对于Bmi-1、CDH17、PGC与胃癌患者临床病理特征的关系进行分析结果显示，Bmi-1、CDH17、PGC阳性表达与患者肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴转移、肿瘤大小及浸润深度密切相关，与患者年龄、性别、远处转移无关。即Bmi-1、CDH17、PGC阳性表达患者肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度均较高，肿瘤直径较大，淋巴转移较多，患者肿瘤恶性程度更高。本研究结果显示，胃癌组织中Bmi-1、CDH17、PGC、CA50、CA199、CA242、CA724及CEA表达存在正相关性。因此，Bmi-1、CDH17、PGC表达存在相关性，三者可能在胃癌的发生和演变过程中可能存在协同作用，其具体机制尚需进一步研究。但本研究样本量较小，未统计患者随访结果，各指标检测结果可能存在一定的偏差，在随后的研究中将进一步扩大样本，延长研究时长，深入进行探究。综上所述，在胃癌的发生发展过程中，Bmi-1、CDH17、PGC表达明显提高，并与胃癌患者的临床病理特征存在相关性，检测Bmi-1、CDH17、PGC表达对于反映胃癌生物学行为具有重要意义。