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从超氧化物歧化酶分析黄芪核桃饮防治痴呆的效果

2024-12-20 72 上传者：管理员

摘要：目的分析黄芪核桃饮对阿尔茨海默病模型小鼠(APP/PS1 Tg)的疗效及作用机制。方法将8月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠(阿尔茨海默病模型小鼠，APP/PS1 Tg)随机分为阿尔茨海默病模型组（AD组）和黄芪核桃饮组（HH组，中药组），另采用8月龄C57BL/6雄性小鼠作野生对照组（WT组）。对比3组小鼠超氧化物歧化酶（SOD）含量的差异,以及TUNEL在海马区的分布差异。结果 (1)SOD含量方面：治疗后，AD组与WT组比较，同月龄小鼠均有显著差异；HH组8月龄小鼠与WT组有显著差异，而与AD组无明显差异；HH组10月龄小鼠与WT组无显著差异，而与AD组差异显著；(2)TUNEL在海马区的分布上，治疗后HH组与WT组无差异，与AD组有显著差异。结论经黄芪核桃饮治疗后APP/PS1小鼠认知功能改善与其抗氧化抗凋亡能力有关。

关键词：
TUNEL
脾肾亏虚
超氧化物歧化酶
阿尔茨海默病
黄芪核桃饮
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随着人口老龄化时代的到来，痴呆（Alzheimer’s disease,AD）发病率、死亡率呈现逐步上升趋势[1]。相关报告预估，到2050年全世界患者将达到1.315亿人[2]。在中国，60岁以上老年群体的AD发病率达6.3%,80岁以上的发病率则骤然升高至30%[3]。AD以缓慢出现的记忆力逐渐减退、学习新知识能力下降、智力障碍为主要特征，并且疾病前期常常出现情绪不稳，伴有不同程度、渐进性加重的人格改变。作为神经退行性疾病，AD是一组临床综合征，而非一种独立的疾病，其智力、认知以及生活自理等能力下降，严重影响患者生活质量。研究证实中药的对证使用可有效改善AD患者不断下降的生活能力和认知功能，逐步缓解其异常精神状态及行为举止[4]。

AD属于中医学中的“痴呆”，散在记载于“善忘”“呆病”“郁证”“健忘”等相关病症中，其核心症状表现为善忘、迷路，甚至昏不识人或物，烦躁不安或者易怒并且伴有攻击行为，神志不清、呆傻，伴有二便失禁。有的患者出现幻觉、妄想、思路怪诞离奇，有的患者则表现为言语含混不清、反应迟钝。其起病隐匿、病情渐进性加重、病程较长，顽固难治。其病因病机多为年老体衰、先天性禀赋不足、肾虚血少。病程分为平台期、波动期以及下滑期。AD在疾病早期多见到脾虚甚至脾肾两虚的表现，随着病情的渐进性发展，多见痰浊壅盛伴随神志昏蒙、意识不清。王永炎[5]提出将痴呆分为虚实两端，虚证分为髓海不足型、肝肾阴虚型、脾肾不足型，实证分为痰浊阻窍型、瘀血内阻型、心肝火旺型。“黄芪核桃饮”药物主要组成为黄芪、黄精、胡桃仁、薏苡仁、赤小豆、莲子、山药等，国家级名中医李斯文教授治疗脾肾不足型痴呆或记忆力减退患者临床常用该方，可以增强记忆力、改善乏力等症状。为探讨该方治疗AD的机制进行了动物实验研究。

1、实验部分

1.1实验流程

将APP/PS1双转基因小鼠进行水迷宫实验，小鼠的认知功能都下降，显示痴呆小鼠造模成功。同月龄C57BL/6小鼠10只认知功能正常，作为野生组。将APP/PS1双转基因小鼠随机分为中药组和模型组。动物8月龄时，模型组和野生组喂食普通饲料，中药组喂食含中药的饲料，两月后至10月龄，分别测试超氧化物歧化酶值。

1.1.1实验动物

将3月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠20只(20±2g），随机分为阿尔茨海默病模型组（AD组）和黄芪核桃饮组（HH组，中药组）；3月龄C57BL/6雄性小鼠10只(20±2g)，作为野生组（WT组）。均由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2014-004。

实验动物在温度25℃左右、40%左右湿度的清洁级动物房内饲养5个月。实验方案得到山西大同大学动物实验伦理委员会批准。实验动物到8月龄开始实验。

1.1.2实验药物

国家级名中医李斯文教授常应用黄芪20 g、核桃仁10 g、赤小豆20 g、黄精10 g、山药10 g、莲子10g以健脾补肾。在临床应用药物剂量及比例随患者病情、体质随证加减。所有药物均购自北京同仁堂药店，药物经过鉴定合格。将药物（除核桃仁）冲洗，将赤小豆和莲子打碎，混合于其他药物中，用水浸泡3 h，再用2倍量纯水煎煮1.5 h，收集并过滤药液，浓缩。药物的最终浓度相当于2 g/mL生药，最后把药液、研碎的核桃仁和普通鼠粮混匀搓成条状放入烘箱烘干备用。根据中药药理研究方法学，人按70 kg，得出30 g小鼠（8月龄～10月龄），每日服中药0.41 g生药[6]。

1.2实验结果

(1)WT组与AD组和HH组8月龄和10月龄小鼠的血液超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)见表1。

表1各组小鼠血清SOD水平

图1各组小鼠脑组织TUNEL染色结果（×200)

2、结论与讨论

2.1实验

氧化应激反应是导致阿尔茨海默病发病的关键因素之一，脑组织的氧化损伤严重影响学习记忆能力。SOD是生物体内存在的一种抗氧化酶，能够催化超氧阴离子自由基歧化，从而生成对身体无害的氧合过氧化氢，对平衡机体的氧化与抗氧化之间的关系起到极重要的作用。SOD可以保护细胞免受氧化应激。经过黄芪核桃饮治疗后，HH组小鼠治疗效果较好可能与机体阴阳平衡，自我调节良好，生成SOD量增加相关。小鼠海马区TUNEL染色显示细胞凋亡数量AD组>HH组>野生组。海马区神经细胞凋亡HH组较AD组少，可能与黄芪核桃饮中黄芪等药物具有抗氧化抗凋亡有关。

2.2药物

方中主要药物黄芪具有抗炎、抗氧化等多种药理作用[7]；核桃仁具有抗衰老、清除活性氧自由基的能力[8]；山药具有益气健脾胃，缓解机体氧化应激[9]、抗炎[10]、增强免疫力等多种生物活性。

2.2.1黄芪配伍黄精

《景岳全书》中记载“五脏中皆有脾气”，是说人的思维失常是五脏的病症，而要想安抚五脏，就必须先调理脾脏。因此治疗这种病症，无论用何种治疗方法都离不开健脾益气。在临床实践中发现，脾虚证的AD患者较为常见，所以应用健脾益气法治疗AD的情况较多。脾胃是气血之源头，脾有显著的升清功能，将生成的水谷精微上呈于清窍，或者脾气通过散精上归于肺，再通过心肺作用生成血，增加脑血流量从而促进大脑血液循环，提高学习和记忆能力。

健脾益气药物首先选择黄芪，其味甘，性微温，归脾肺经。黄芪具有良好的补气作用，而且还可以升举清阳。气虚的人往往会形成气虚血滞，脉络瘀阻的病机。黄芪在大补元气的同时又能通调血脉。其补气的特点是持续的时间比较长，药力厚重，是很多补气药物所不能及的。在《理虚元鉴》中指出“欲久安长治，非黄芪不可”。在临床当中对于肢体软弱、气短自汗、疲乏无力，面色不华，脉象虚弱者适用，如果脉象实而有力无气虚证，则不能用，因为黄芪温而升补，可能使血液愈发上行导致脑出血，并影响智力[11]。

在运用黄芪治疗痴呆的过程中，一些报道指出黄芪会升高血压，这导致很多人尤其是高血压患者害怕。因为高血压会使得脑部血管重塑，致使大脑调节功能紊乱、灌注异常并影响智力。但是，如果由于气虚导致的血压升高，就可以用黄芪[12]，不能够画地为牢束缚医生的思维。临床上由于气虚导致的高血压在老年患者尤其是一些脑力劳动者中，是非常常见的。脏腑功能正常的生理活动依赖气机的升降维持协调。如果气虚不能够升清，则中焦胃中之浊气也不会下降，浊阴相反会上升而影响血压，头重脚轻，昏昏沉沉。一些脑力劳动者由于思虑过度导致脾虚，脾虚则化源不足，反而会形成高血压、眩晕影响智力[13-14]。此时抓住疾病的本质，辩证论治后选用补气健脾的黄芪不但不会升高血压还可以降压。

黄芪运用中往往配伍黄精，因为它质地柔润而性平，味甘则补，归脾、肺、肾经。具有滋阴、补气润肺、润肠健脾、补肾精之功。在黄精中含有多种化学成分[15]，如多糖、黄酮、低聚糖、生物碱、甾体皂苷、氨基酸、木脂素、挥发油、无机元素，还含有多种美容活性成分，能够抗氧化[16-17]、防辐射、抗炎、抗菌。研究还发现黄精的水提物可以显著改善AD大鼠的空间学习、记忆能力，推测其作用机制应与调节胆碱能系统α7nAChR表达有关[18]。黄精还具有生髓促智等功效[19]。近期实验证实黄精可升高衰老小鼠血清中的SOD[20]同时降低脂褐素，提高老化模型鼠对于体内自由基的清除能力，增加小鼠皮肤胶原纤维含量，对于皮肤损伤具有一定的保护和修复功能。该配伍有较好的抗老年痴呆、抗衰老作用。

还有研究者在实验中发现,黄精多糖能明显缩短大鼠逃避潜伏期，同时穿台次数增多，尼氏体阳性神经元数目明显增多，提示黄精多糖可以提高大鼠学习能力、记忆能力并且改善脑组织超微结构[21]。还有学者发现黄精多糖能增加痴呆小鼠海马CA1区线粒体密度[22-24],减轻线粒体变形程度。线粒体是多种细胞代谢的重要整合者，如氧化磷酸化、糖异生及生酮作用、脂肪酸氧化等，线粒体还可以产生能量，控制细胞凋亡，非常类似于中医的脾主运化作用。可见黄精多糖可以通过补气来提高机体的循环功能，防治老年痴呆[25]。黄精药性平和、历史悠久,中医古方含有黄精的二精丸、黄精地黄丸沿用至今。

《素问·金匮真言论》说：“夫精者，身之本也。”精是构成、维持人体生命活动最基本的物质，对于人体生命的活动具有非常重要的意义。广义之精是气、血、津液等人体一切精微物质。后天之精是出生后，吸入自然界的清气和水谷化生的精微物质。它分藏于全身各个脏腑中，濡养脏腑，并化气以推动、调控其功能活动。肾藏之精是先天之本，有赖于后天脾胃生成的水谷之精所充养。肾精足则脑髓充盈，博闻强识。

2.2.2黄精配伍核桃仁

黄精在临床使用中可以治疗狂躁不安[26]，“登高而歌，弃衣而行”者，对于痴呆进程中会由于气血亏虚或者痰浊邪气郁结而化火，导致患者情绪暴躁不安。黄精可以补益气血，而且对于老年人血压高，津液亏虚的患者效果极好，因为黄精质地柔润，补气的同时不会引起血压升高，性平和，不燥，在补气药物当中实属少见。对于需要长期服用的药物，药性平和至关重要，否则需要经常调节方药用量及配伍。

将核桃仁中的瓜氨酸为主要成分的多种氨基酸混合物作为受试物,观察其对小鼠的学习和记忆的作用,发现核桃提取物在一定范围内可以生成较多NO，促进神经元细胞的发育、成熟信息的传导,从而较明显地改善小鼠学习记忆能力[27]。除此之外核桃仁还有抗氧化、提高免疫力、治疗急性肝损伤、抗衰老作用[28]。核桃仁配伍黄精，二者均有益智、补精填髓之功效。由于核桃仁脂肪含量较高，用量不宜过多，尤其是血脂较高的患者。

2.2.3黄芪、黄精配伍山药、莲子、赤小豆

方中黄芪、黄精着力补气，但为了补而不滞，又加入药食同源的山药、莲子。莲子甘补收敛,性平而不偏，入脾经则补脾止泻，入肾经则益肾固精，入心经则养心安神，交通心肾（偏于补脾止泻,补力较强）。

脾肾亏虚容易招致湿邪，加山药、赤小豆健脾调中，利水，防止痰饮生成，还可以防止核桃仁油腻碍胃，核桃仁合黄精二药相使，共奏补肾温脾生精、益智健脑之功，使肾中精气充沛，改善“高年无记性者，脑髓渐空”（《医林改错·脑髓说》）的状况，更好地发挥脑的“精明之府”的生理功能。

综上，诸药相伍，扶正不碍邪，祛邪不伤正，服用黄芪核桃饮可充养脑髓，交通心肾。在痴呆病未发病时或早期服用黄芪核桃饮有一定的预防痴呆发病的作用。

参考文献:

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