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头孢妥仑匹酯片溶出度一致性评价的方法学研究

2024-04-12 67 上传者：管理员

摘要：目的通过不同的溶出条件选择处方使自制样品与原研参比制剂有相同的体外溶出度。方法通过美国食品药品监督管理局非模型依赖法的(f2)相似因子对头孢妥仑匹酯片的溶解性能进行研究。用氯化钠-盐酸混合液作为溶出液，体积900 mL,用桨法，转速50 r·min-1,按紫外-可见分光光度法，波长为272 nm进行检测，并对自制头孢妥仑匹酯片与参比制剂的溶出性能进行对比，确定其溶出度性能和影响因素。结果头孢妥仑匹酯在7.5～22.5μg·mL-1内，线性关系好，标准曲线为A=3.25×10-2C-1.80×10-2(R2=0.999 7),平均回收率为99.33%。在体外实验中，自制样品与参比制剂的溶出度相似因子f2值差异很小，且符合预期。结论头孢妥仑匹酯片的溶出度检查方法适用于本制剂的研制，通过比较相似因子选择出来的处方制剂能大幅提高生物等效性的成功率。

关键词：
一致性评价
头孢妥仑匹酯片
溶出度
生物等效性
相似因子
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头孢妥仑匹酯片是一种口服头孢抗生素类药物，最早是日本明治制果药业株式会社研制开发上市的，并于2000年在我国被批准进口。头孢妥仑匹酯具有强大的抗菌活性[1],其能够被人体内的消化系统所代谢，并且能够在体内被结合到青霉素结合蛋白(penicillin-binding protein, PBP)上，以达到有效的消炎、止痛效果。《国务院办公厅关于开展仿制药质量与疗效一致性评价的意见》[2]及总局关于落实《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》有关事项的公告(2016年第106号)[3]的出台，表明政府药政机构正在加快改进药品的质量与功效，以满足消费者的需求与升级，促进药学的可持续发展。本文是以日本明治制果药业株式会社生产的头孢妥仑匹酯片为参比制剂与自制样品按指导原则[4]进行体外溶出度对比研究，旨在为本品的后续开发提供可靠的保障。

一、材料与方法

1 药品与仪器

头孢妥仑匹酯对照品，含量：98.4%,批号：202102,头孢妥仑匹酯片，规格：每片100 mg, 批号：20220221、20220222、20220223、20220224,武汉海鹏医药科技有限公司自制；参比制剂：头孢妥仑匹酯片，规格：每片100 mg, 批号：CFNTCV1013,批准文号：国药准字J20150116,日本明治制果药业株式会社生产，汕头经济特区明治医药有限公司分外包装，广东香雪医药有限公司提供。

RC12AD溶出仪，购自天津天大天发科技公司；XSR105DU电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司产品；UV-1900i紫外-可见分光光度仪，购自日本岛津公司。

2 体外溶出实验

2.1 溶出方法的选择

2.1.1 溶出介质

水(a):用二级反渗透法制得的高品质纯化水；pH 1.2氯化钠-盐酸混合液(b):称取氯化钠2.0 g、盐酸7.0 mL,将其混合在一起，加水溶解并定容至1 000 mL,振摇均匀即得；pH 3.0磷酸盐缓冲液(c):称取磷酸氢二钠35.82 g, 加水溶解并稀释成2 000 mL,得到0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠溶液；另称取柠檬酸2.62 g, 同法制成500 mL的溶液，得到2.50×10-2 mol·L-1的柠檬酸溶液，用制得的柠檬酸溶液调节上述磷酸氢二钠溶液pH值至3.0,即得；pH 6.8磷酸盐缓冲液(d):称取磷酸二氢钾13.60 g, 与0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液(取氢氧化钠4.0 g, 加水溶解并定容至500 mL)224.0 mL混合置于2 000 mL量瓶中，加水500 mL溶解后定容至刻度，搅拌均匀，即得。

2.1.2 溶出度检查

参考头孢妥仑匹酯片日本上市药品综述资料(interview form, IF)文件[5]、《中国药典》2020年版四部附录[6]及国家药监局指导原则[4],本课题组用pH 1.2氯化钠-盐酸混合溶液(氯化钠2.0 g、盐酸7.0 mL,加纯化水至1 000 mL)作为溶出液，体积900 mL,用桨法，转速为50 r·min-1×20 min, 取液进行过滤稀释操作，按紫外-可见分光光度法检查，测量波长为272 nm。

对照品溶液称取头孢妥仑匹酯对照品15 mg置于100 mL量瓶中，加入乙腈-水(3∶1)溶液20 mL,振摇溶解后，再加溶出介质定容，摇匀，作为储备液。量取上述对照品储备液2 mL置于20 mL量瓶中，加水定容，摇匀即得。

供试品溶液取溶出度检查20 min时的溶出液，用微孔滤膜过滤，弃去初液，吸取续滤液2 mL置于20 mL量瓶中，加水定容，振摇均匀，即可得到所需的样品溶液。

空白辅料溶液称取头孢妥仑匹酯片空白辅料少许(约相当于处方量14 mg),置于100 mL容量瓶中，加乙腈-水(3∶1)溶液20 mL,振摇使其溶解后，加溶出液定容，摇匀，作为空白辅料储备液，备用。量取储备液2 mL,置于20 mL量瓶中，加水定容，振摇均匀，即得。

2.2 处方的筛选

对不同处方自制制剂与参比试剂各取12片，按“2.1.2”的方法进行操作，分别于5、10、20、30、45、60 min取溶液检测，计算自制头孢妥仑匹酯片样品与参比试剂的溶出量(每个时间点的溶出度值以12片样品的平均值计),绘制溶出曲线。

2.3 溶出度方法验证

头孢妥仑匹酯片日本上市药品综述资料IF文件[5]中规定溶出介质为pH 1.2氯化钠-盐酸溶液，参考其方法，本课题组选择pH 1.2氯化钠-盐酸溶液作为溶出液进行本品的溶出度方法验证工作。

2.3.1 专属性(干扰实验)

称取头孢妥仑匹酯片空白辅料(约相当于14 mg处方量)置于100 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶1)溶液20 mL,强力振摇溶解后，再加溶出液定容至刻度，振摇均匀作为空白辅料储备液备用。量取空白辅料储备液2 mL,置于20 mL量瓶中，加水定容，振摇均匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，按紫外-可见分光光度法，以pH 1.2氯化钠-盐酸溶液为空白，在190～400 nm内进行光谱测量。结果显示，空白辅料在波长272 nm处没有吸收，说明本法对头孢妥仑匹酯片的溶出度检查没有干扰(见图1)。

2.3.2 线性关系

称取头孢妥仑匹酯对照品15 mg置于100 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶1)溶液20 mL,振摇使溶解后，加溶出液至刻度，振摇均匀，作为头孢妥仑匹酯对照品储备液，备用。取对照品储备液1.0、2.0、1.0、3.0、3.0 mL分别置于20、25、10、25、20 mL量瓶中，加溶出液定容，充分振匀，分别对应得到7.5、12.0、15.0、18.0、22.5 μg·mL-1的头孢妥仑匹酯标准溶液。以溶出介质为空白，在272 nm波长处进行光密度测量。以头孢妥仑匹酯质量浓度(C,μg·mL-1)为横坐标，将其相应的光密度(A)值为纵坐标，进行线性回归计算，结果显示，头孢妥仑匹酯在7.5～22.5 μg·mL-1内，其光密度值与质量浓度有较强的正相关性，其标准曲线为A=3.25×10-2C-1.8×10-2(R2=0.999 7)。

2.3.3 精密度实验

设备精密度连续测定6次“2.3.2”项下15.0 μg·mL-1的头孢妥仑匹酯对照品溶液，其相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为0.28%,表明该法具有较高的准确度和良好的可靠性。

重复性取头孢妥仑匹酯片(批号：20220221)12片，按照“2.2”的方法进行溶出度测定，在20 min时取液，滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液2 mL置于20 mL量瓶中，加水定容至刻度，振摇均匀，作为样品溶液，测量其光密度，计算12片样品溶出度，结果显示，其RSD为1.21%,表明该方法具有较好的重复性。

图1 头孢妥仑匹酯的空白辅料(A)/对照品(B)光谱扫描图

日间精密度取头孢妥仑匹酯片(批号：20220221)24片，由不同实验人员在不同时间(2 d)按“2.2”的方法进行溶出度测定(12片/次),在20 min时取液，滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液2 mL放入20 mL量瓶中，加水至刻度，振摇均匀，作为样品溶液，测量其光密度，分别计算24片样品溶出度结果，其RSD值为1.19%,说明该方法的日间精密度良好。

2.3.4 稳定性实验

取“2.3.2”项下15 μg·mL-1的头孢妥仑匹酯对照品溶液，置于实验室室温条件，经过8 h的测试，结果发现，其RSD为0.39%。这说明头孢妥仑匹酯对照品溶液在室温条件下具有良好的稳定性。取20 min溶出度检查时样品溶出液100 mL,置于室温条件，分别在0、1、2、4、8 h取20 mL液滤过，弃去初滤液，取续滤液2 mL置于20 mL量瓶中，加水定容至刻度，混匀，作为样品溶液进行光密度测量，结果显示，8 h内溶出数据RSD为0.57%。这说明头孢妥仑匹酯片溶出度检查法中样品溶液在室温8 h内稳定性良好。

2.3.5 回收率实验

将9份空白辅料(相当于头孢妥仑100 mg)分别放入烧杯中，精密称定，各加pH 1.2盐酸溶液900 mL,分3份依次加入头孢妥仑匹酯原料药85、110和130 mg, 用玻棒搅拌使其溶解，滤膜滤过；弃去初滤液，取续滤液2 mL置于20 mL量瓶中，加pH 1.2氯化钠-盐酸溶液定容，振摇均匀，在272 nm处按紫外-可见分光光度法进行光密度测量分析，并计算头孢妥仑匹酯含量及各自回收率。结果见表1,这说明该法回收率平均值为99.33%,RSD值为0.86%,表明本法回收率高，重现性好，方法准确可行。

2.4 溶出曲线及相似因子计算

本课题组用相似因子法进行溶出曲线比较。计算公式如下：

表1 紫外-可见分光光度法检测头孢妥仑匹酯的回收率(n=3)

其中，n为取样的时间点个数；Rt:参比制剂在某时刻的溶出度值；Tt:自制样品在某时刻的溶出度值。

2.5 不同溶出介质中的溶出曲线

用自制头孢妥仑匹酯片3批供试品(批号：20220222、20220223、20220224)和日本明治制果药业株式会社生产的头孢妥仑匹酯片，分别以pH 1.2氯化钠-盐酸混合液、pH 3.0、6.8磷酸盐溶液和水为溶出介质，按照“2.1.2”项下的溶出度检查方法进行操作，在不同时间(pH 1.2盐酸溶液溶出介质中取样时间为5、10、20、30、45、60 min; 其他溶出介质取样时间为5、10、15、30、45、60、120、240、360 min)取溶液进行检测(每个时间点的溶出度值以12片样品的平均值计),评估其溶出度情况。结果见表2。

表2 头孢妥仑匹酯片相似因子结果(f2)

3 统计学处理

用相似因子法对自制头孢妥仑匹酯片与日本明治制果药业株式会社生产的头孢妥仑匹酯片的体外溶出度曲线进行分析。

二、结果

1 处方筛选

通过对不同自制处方与参比制剂的溶出度检查结果及溶出曲线对比，本课题组不难看出自制处方21的溶出度检查结果和对应的溶出曲线与参比制剂的溶出曲线较为接近，故选择自制样品处方21为优选处方进行后续验证。结果见图2及表3。

2 体外溶出度

通常情况下，相似因子f2值越大，说明2条曲线越相似。当测得的相似因子f2值在50以上时，可判定2条曲线具有相似性，也就是2个制剂具有初步的体外溶出一致性。用相似因子法对优选的处方制备的样品与参比制剂进行溶出度对比评估，结果显示，在pH 1.2氯化钠-盐酸混合液、pH 3.0、6.8磷酸盐溶液及水为溶出介质的相似因子f2值均在60以上，据此本课题组可以判定自制样品与参比制剂体外溶出行为具有一定的相似性。

图2 头孢妥仑匹酯片体外溶出曲线

表3 头孢妥仑匹酯片溶出度结果比较

三、讨论

普通口服固体制剂常规的溶出液为pH值1.0、1.2、3.0、5.0、6.8和水溶液，美国食品药品监督管理局的溶出度方法中指出，头孢妥仑匹酯片的溶出度检查是以pH 1.2氯化钠-盐酸溶液900 mL为溶出液，转速75 r·min-1;而在头孢妥仑匹酯片日本IF文件[5]中采用pH 1.2氯化钠-盐酸水溶液为溶出介质，转速50 r·min-1,本溶出度检查方法验证结果说明，选择转速50 r·min-1更适用于本品溶出度的质量控制。文献也验证了，采用头孢妥仑匹酯片日本IF文件的溶出检查方法是可行的[7]。

本研究结果发现，pH 1.2、3.0、6.8缓冲液及水作为4种最佳的溶出介质，通过确定处方的自制样品与参比制剂在以上溶出介质中进行的溶出曲线比较可知，在以上4种介质中相似因子f2均超过了60,故本课题组可判定自选处方制得的样品与参比制剂在体外溶出释放行为具有一致性，为产品后期的中试放大及其生物等效性试验提供了一定的数据支持，并打下了坚实的基础。

参考文献:

[1]张明发.头孢妥仑匹酯的抗菌活性[J].上海医药,2005,26(7):307—310.

[2]国家药品监督管理局.国务院办公厅关于开展仿制药质量与疗效一致性评价的意见[EB/OL].2016-03-05 [2023-12-26].

[3]国家药品监督管理局.总局关于落实《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》有关事项的公告(2016年第106号)[EB/OL].2016-05-26 [2023-12-26].

[4]国家药品监督管理局.《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》[EB/OL].2015-02-05 [2023-12-26].

[5]日本医药品医疗器械综合管理局.ｾﾌｼﾞﾄﾚﾝﾋﾟﾎﾞｷｼﾙIF文件[EB/OL].2012-04-24 [2023-12-26].

[6]Ch.P(2020) Vol Ⅳ,中华人民共和国药典2020年版[S].四部.2020:466—472.

[7]李敏,杨宏硕,贾玉捷,等.头孢妥仑匹酯片的制备及其溶出度研究[J].中国药剂学杂志,2020,18(4):194—202.

文章来源:罗清,陈亚军.头孢妥仑匹酯片溶出度一致性评价的方法学研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(07):1054-1058.