摘要:目的 研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora地上部分95%乙醇提取物正丁醇部位的化学成分及其体外抗炎活性。方法采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20和高效液相等多种色谱分离技术进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物结构,新化合物的绝对构型则采用电子圆二色谱(electronic circular dichroism,ECD)确定。结果 从裸花紫珠正丁醇部位分离得到9个化合物,分别鉴定为(3S,7S)-n-butyl tuberonate-12-O-[6′-O-(E)-feruloyl]-β-D-glucopyranoside(1)、syringaresinol-4'-O-D-monoglucopyranoside(2)、杜仲脂素A(3)、毛蕊花糖苷(4)、异毛蕊花糖苷(5)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷(7)、(7R)-hydroxyeucommic acid n-butyl ester(8)、2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside(9)。结论 化合物1为新化合物,命名为裸花紫珠苷E;化合物8为首次从裸花紫珠分离得到。体外抗炎实验表明,化合物1、3~5、7~9均有不同程度的抗炎活性。
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裸花紫珠CallicarpanudifloraHook.etArn.是马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物的干燥地上部分,药用部位多为茎枝,在我国是一种常用的海南传统民族药材,具有散瘀止血、解毒消炎、祛风除湿等功效[1]。裸花紫珠广泛分布于我国华南、华中等地,国外主要分布于马来西亚、中南半岛、印度等,植物资源丰富[2]。随着对裸花紫珠化学成分研究的增加,发现其化学成分种类多样,主要分为黄酮类、二萜类、三萜类、环烯醚萜苷类、苯丙素类、苯乙醇苷类及挥发油类等[3],具有抑菌止血、抗癌、抗衰老、保肝、增强免疫、促进伤口愈合等现代药理活性,用来治疗消化道及呼吸系统的各种出血、急性发现肝炎、脓疱烫伤、各类型感染等[4-5]。裸花紫珠收录于《中国药典》2020年版,临床应用的剂型包括了片剂、栓剂、颗粒剂和胶囊,其药效得到了充分认可。为进一步深入阐明裸花紫珠的药效基础,丰富其化学结构库,本研究对裸花紫珠的95%乙醇提取物的正丁醇部位进行系统分离及抗炎活性筛选,最终分离得到9个化合物,分别鉴定为(3S,7S)-tuberonic-n-butanolester-12-O-[6′-O-(E)-feruloyl]-β-D-glucopyranoside(1)、syringaresinol-4'-O-D-monoglucopyranoside(2)、杜仲脂素A(eucomminA,3)、毛蕊花糖苷(verbascoside,4)、异毛蕊花糖苷(isoverbascoside,5)、木犀草素-7-Oβ-D-葡萄糖苷(luteolin7-O-β-D-glucoside,6)、木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-4'-O-β-Dglucopyrano-side,7)、(7R)-hydroxyeucommicacidnbutylester(8)、2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside(9)。其中,化合物1为新化合物,命名为裸花紫珠苷E;化合物8为首次从裸花紫珠分离得到。
1、仪器与材料
AVANCE-400型400MHz核磁共振仪(德国Bruker公司);6540Q-TOF液质联用仪(美国Agilent公司);TripleTOF5600型高分辨液质联用仪(美国ABSciex公司);FI/IR-480PlusFourierTransform红外光谱仪(日本JASCO公司);Agilent1640分析型HPLC仪(美国Agilent公司);LC-20AT制备型HPLC仪(日本岛津公司);COSMOSILPackedColumn分析柱(250mm×4.6mm,5µm);InertsilPREP-ODS制备柱(250mm×20mm,10µm);柱色谱硅胶(60~80、100~200目,青岛海洋化工厂);ODS填料(日本YMC公司);SephadexLH-20葡聚糖凝胶(瑞士Fluka公司);高效液相试剂均为色谱纯(德国Merck公司);其他化学试剂为分析纯(天津大茂公司);FreeZol试剂、HiScript®IIQRTSuperMix试剂盒、SYBRPremixExTaq™IIPCR试剂盒[诺唯赞生物技术(南京)有限公司];基因特异性引物[生工生物工程(上海)股份有限公司];小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7,美国ATCC公司);地塞米松(dexamethasone,DEX)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)购自美国Sigma-Aldrich公司。
裸花紫珠药材于2021年10月采自海南省九芝堂种植基地,经暨南大学周光雄教授鉴定为裸花紫珠C.nudifloraHook.etArn.,样本(标本号20211010201)保存于广州中医药大学国际中医药转化医学研究所。
2、提取与分离
取裸花紫珠地上部分33.5kg干燥粉碎,95%乙醇回流提取3次,每次2h,减压浓缩至无醇味,得到总浸膏约2.5kg。采用溶剂萃取法,将总浸膏按照极性从小到大依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取各4次,合并萃取溶液,减压浓缩后分别获得石油醚部位56g、醋酸乙酯部位210g、正丁醇部位约600g。
将600g正丁醇部位用甲醇充分溶解后,称取930g硅胶(60~80目)拌样,充分挥干后备用。称取3.0kg硅胶(100~200目)装柱,湿法装柱,干法上样,二氯甲烷-甲醇(100∶0、98∶2、96∶4、94∶6、92∶8、90∶10、87∶13、85∶15、83∶17、80∶20、75∶25、50∶50)为流动相,每个梯度洗脱4~5个柱体积,同时用TLC检测所收集的流分,合并具有相似斑点的流分,最终得到9个部分(Fr.A~I)。根据TLC检识结果选取样品Fr.D和Fr.F进一步分离。
Fr.D(30.0g,二氯甲烷-甲醇94∶6~92∶8洗脱),采用硅胶色谱柱进行分离,以二氯甲烷-甲醇(100∶0、98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、94∶6、92∶8、90∶10、87∶13、83∶17、80∶20、75∶25、0∶100)进行梯度洗脱,TLC检识后合并具有相同斑点的流分,得到8个流分Fr.D1~D8。Fr.D52(3.0g,二氯甲烷-甲醇95∶5洗脱物),采用硅胶色谱柱进行分离,以二氯甲烷-甲醇(100∶0、98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、94∶6)进行梯度洗脱,TLC检识后合并具有相同斑点的流分,得到2个流分Fr.D5A和Fr.D5B。Fr.D5B(1.3g,二氯甲烷-甲醇94∶6洗脱物),采用ODS柱分离,以甲醇-水(20%、25%、30%、40%、50%、60%)梯度洗脱,TLC检识后合并具有相同斑点的流分,得到13个流分Fr.D5B1~D5B13。采用制备型高效液相对Fr.D5B3、Fr.D5B5、Fr.D5B12进行纯化,从Fr.D5B3获得化合物8(15.8mg,tR=65min,30%甲醇)和9(9.1mg,tR=60min,30%甲醇),Fr.D5B5获得化合物2(7.6mg,tR=60min,18%乙腈)和3(5.1mg,tR=65min,18%乙腈),Fr.D5B12获得化合物1(12.0mg,tR=16min,60%甲醇)。
Fr.F(79.1g,二氯甲烷-甲醇87∶13~85∶15洗脱物),采用硅胶色谱柱进行分离,二氯甲烷-甲醇(100∶0、96∶4、94∶6、92∶8、90∶10、87∶13、85∶15、80∶20、75∶25)梯度洗脱,TLC检识后合并具有相同斑点的流分。采用制备型高效液相对Fr.F9(二氯甲烷-甲醇80∶20洗脱物)进行纯化,获得化合物4(30.7mg,tR=25min,20%乙腈)、5(10.2mg,tR=35min,20%乙腈)、6(5.2mg,tR=32min,20%乙腈)、7(6.8mg,tR=60min,20%乙腈)。
3、糖构型的确定
3.1酸水解
精密称取3mg化合物1于反应瓶中,加2mol/L的盐酸(取浓盐酸1mL加水稀释至6mL)5mL,水浴加热2h。产物用醋酸乙酯-水萃取,取下层液浓缩至干得残渣。精密称取标准糖D-葡萄糖和L葡萄糖各3mg,残渣、D-葡萄糖和L-葡萄糖各加2mL吡啶溶解,并加入2mgL-半胱氨酸甲酯盐酸酯,60℃水浴加热1h,待反应结束后再加入5μL邻甲苯异硫氰酸酯,60℃水浴加热1h。
3.2HPLC分析
反应产物经高效液相分析,色谱柱为:WelchMaterialsXB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(25∶75)等度洗脱,体积流量1.0mL/min,检测波长270nm。与标准糖衍生物的液相保留时间进行比较,从而确定化合物1糖的绝对构型为D-葡萄糖。
4、抗炎活性研究
4.1细胞培养及毒性评价
RAW264.7细胞来源于ATCC,在37℃、5%CO2条件下,置于含10%胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)和1%青霉素/链霉素(Invitrogen,Carlsbad,CA,美国)的Dulbecco'sModifiedEagleMedium(DMEM)中培养。培养24h后取对数生长期细胞,细胞浓度为1×104个/mL,每孔100μL接种于96孔板,细胞贴壁后,分为对照组、阳性对照DEX组(20μmol/L)、给药组(待测化合物20μmol/L),每组3个复孔,培养24h。加入10%CCK-8溶液,继续培养4h,在450nm处测定吸光度(A)值。
4.2实时定量
PCR(RT-qPCR)分析阳性对照组和给药组用20μmol/L化合物预处理1h,然后除对照组外加入1μg/mLLPS,培养24h。药物处理后,按照说明书使用FreeZol试剂提取总RNAs,使用HiScript®IIQRTSuperMix(含gDNA清除剂)试剂盒转化为cDNA。使用BGI公司提供的基因特异性引物和SYBRPremixExTaq™IIPCR试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNFα)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β以及ACTB的mRNA表达水平。最后,将目标mRNA水平归一化为ACTBmRNA水平的几何平均值(表1)。
表1RT-qPCR引物序列
5、结果
5.1结构鉴定
化合物1:黄色油状物,[α]20D−34.5(c1.00CH3OH),HR-ESI-MSm/z629.2574[M+Na]+(计算值629.2568),结合1H-NMR和13C-NMR数据化合物1分子式为C31H42O12,不饱和度11。IR谱提示有羟基(3427cm−1)、双键(1625,1508cm−1)等特征吸收峰。
1H-NMR(表2)显示有1个苯环的ABX偶合系统δH7.04(1H,d,J=2.0Hz,H-2''),6.78(1H,d,J=8.2Hz,H-5''),6.94(1H,dd,J=8.2,2.0Hz,H-6''),1组反式双键氢信号δH7.57(1H,d,J=15.9Hz,H7''),6.29(1H,d,J=15.9Hz,H-8''),1对顺式烯烃氢信号δH5.49(1H,dt,J=11.0,7.2Hz,H-9)、5.37(1H,dt,J=11.0,6.7Hz,H-10),1个β-D-葡萄糖端基氢信号δH4.31(d,J=8.0Hz,H-1'),1个连氧亚甲基氢信号δH3.80(1H,dt,J=9.8,7.0Hz,H-12a)、3.60(1H,dt,J=9.7,7.1Hz,H-12b)。13C-NMR(表1)和DEPT135显示共有31个碳信号,包括6个季碳、14个次甲基、10个亚甲基和1个甲基。其中有1个酮羰基δC221.5,2个酯羰基δC174.1,169.1,1个葡萄糖端基碳δC104.6。化合物1的波谱数据与已知化合物(3R,7R)-tuberonic-acid-12-O-[6′-O-(E)-feruloyl]-β-D-glucopyranoside[6]的波谱数据非常相似,区别在于化合物1的C-1发生酯化,连接了1个正丁基,HMBC谱(图1)中,δH4.80(H2-1''')与δC174.1(C1)有远程相关,δH1.36(H2-3''')与δC65.5(C-1''')、31.8(C-2''')、14.1(C-4''')均有远程相关,表明C-1位的羧基发生丁酯化。综上分析,确定了化合物1的平面结构(图2)。
图1化合物1的1H1HCOSY()相关和HMBC(HC)相关
图2化合物1的结构
通过化学位移的比较,H-3(δH2.30)和H-7(δH1.94)以及NOESY谱图中H-3/H-8相关和H-2/H-7相关可知,H-3/H-7相对构型为反式构型[transisomer:δH2.24(H-3)、δH1.91(H-7);cisisomer:δH2.80(H-3)、δH2.35-2.45(H-7)[6]]。通过ECD计算得出,化合物1的CD谱与3S,7S构型的理论计算ECD谱拟合度良好(图3),故确定化合物1的绝对构型为3S,7S。经SciFinder检索可知,化合物1为新化合物,命名为裸花紫珠苷E。
化合物2:白色粉末,[α]25D−5.3(c0.1,MeOH),HR-ESI-MSm/z579.2095[M-H]−(calcd.for579.2072),分子式为C28H36O13。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.72(2H,s,H-2',6'),6.66(2H,s,H-2,6),4.87(1H,d,J=7.3Hz,H-1''),4.77(1H,d,J=3.9Hz,H-7'),4.72(1H,d,J=4.3Hz,H-7),4.29(1H,m,H9'b),4.26(1H,m,H-9b),3.92(1H,m,H-9'a),3.90(1H,m,H-9a),3.86(6H,s,3,5-OCH3),3.84(6H,s,3',5'-OCH3),3.11(2H,m,H-8,8');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:154.4(C-3',5'),149.4(C-3),149.4(C-5),139.5(C-1'),136.2(C-4),135.6(C-4'),133.1(C-1),105.3(C-1''),104.8(C-2),104.8(C-6),104.5(C-2',6'),87.6(C-7'),87.2(C-7),78.3(C-3''),77.8(C-5''),75.7(C-2''),72.9(C-9),72.9(C-9'),71.3(C-4''),62.6(C-6''),57.1(3',5'-OCH3),56.8(3,5-OCH3),55.7(C8),55.5(C-8')。以上数据与文献报道一致[7],故鉴定化合物2为syringaresinol-4'-O-D-monoglucopyranoside。
表2化合物1的1H-NMR和13C-NMR数据(400/100MHz,CD3OD)
图3化合物1的ECD谱图
化合物3:白色粉末,[α]25D−8.6(c0.1,MeOH),HR-ESI-MSm/z549.1985[M-H]−(calcd.for549.1967),分子式为C27H34O12。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.95(1H,d,J=1.9Hz,H-2),6.83(1H,dd,J=8.1,1.9Hz,H-6),6.77(1H,d,J=8.1Hz,H-5),6.72(2H,s,H-2',6'),4.87(1H,d,J=7.5Hz,H-1''),4.76(1H,d,J=3.9Hz,H-7'),4.72(1H,d,J=4.4Hz,H-7),4.28(1H,m,H-9b),4.25(1H,m,H-9'b),3.90(1H,m,H-9'a),3.88(1H,m,H-9a),3.86(9H,s,3,3',5'-OCH3),3.14(2H,m,H-8,8');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:154.4(C-3',5'),149.3(C-3),147.4(C-4),139.6(C-4'),135.6(C-1'),133.8(C-1),120.1(C-6),116.1(C-5),111.0(C-2),105.3(C-1''),104.8(C-2',6'),87.5(C-7),87.2(C-7'),78.3(C-5''),77.8(C-3''),75.7(C-2''),72.9(C-9),72.7(C-9'),71.3(C-4''),62.6(C6''),57.1(3',5'-OCH3),56.4(3-OCH3),55.8(C-8'),55.3(C-8)。以上数据与文献报道一致[8],故鉴定化合物3为杜仲脂素A。
化合物4:绿色油状物,HR-ESI-MSm/z623.1998[M-H]−(calcd.for623.1971),分子式为C29H36O15。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.61(1H,d,J=15.9Hz,H-8'''),6.97(1H,dd,J=8.2,2.0Hz,H-6'''),6.80(1H,d,J=8.1Hz,H-2),6.71(1H,d,J=1.9Hz,H5'''),6.69(1H,d,J=8.4Hz,H-2'''),6.58(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.56(1H,d,J=2.0Hz,H-5),6.29(1H,d,J=15.9Hz,H-7'''),5.21(1H,d,J=3.9Hz,H1''),4.40(1H,d,J=7.9Hz,H-1'),3.70(2H,m,H-7),2.81(2H,t,J=7.4Hz,H-8),1.11(3H,d,J=6.1Hz,H-6'');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:168.3(C=O),149.8(C-3'''),148.0(C-8'''),146.8(C-4'''),146.1(C4),144.7(C-3),131.4(C-1),127.6(C-1'''),123.2(C6'''),121.3(C-6),117.2(C-2),116.5(C-5'''),116.3(C-5),115.2(C-2'''),114.7(C-7'''),104.2(C-1'),103.0(C-1''),81.6(C-3'),76.2(C-2'),76.0(C-5'),73.8(C-4''),72.3(C-2''),72.2(C-7),72.0(C-3''),70.6(C-5''),70.4(C-4'),62.3(C-6'),36.5(C-8),18.4(C-6'')。以上数据与文献报道一致[9],故鉴定化合物4为毛蕊花糖苷。
化合物5:绿色油状物,HR-ESI-MSm/z623.1983[M-H]−(calcd.for623.1971),分子式为C29H36O15。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.58(1H,d,J=15.8Hz,H-8'''),7.05(1H,dd,J=8.0,2.1Hz,H-6'''),6.90(1H,d,J=1.9Hz,H-5'''),6.79(1H,d,J=8.7Hz,H2'''),6.70(1H,d,J=8.1Hz,H-2),6.65(1H,d,J=2.0Hz,H-5),6.55(1H,dd,J=8.1,2.2Hz,H-6),6.30(1H,d,J=15.8Hz,H-7'''),5.20(1H,d,J=3.9Hz,H-1''),4.51(1H,d,J=7.2Hz,H-1'),3.73(2H,m,H-7),2.79(2H,t,J=7.4Hz,H-8),1.27(3H,d,J=6.2Hz,H6'');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:169.1(C=O),149.6(C-4'''),147.2(C-8'''),146.7(C-3'''),146.1(C4),144.6(C-3),131.3(C-1),127.6(C-1'''),123.2(C6'''),121.3(C-6),117.0(C-2),116.5(C-5'''),116.3(C5),115.1(C-2'''),114.8(C-7'''),104.3(C-1'),102.7(C1''),83.9(C-3'),75.6(C-5'),75.3(C-2'),74.0(C-4''),72.4(C-3''),72.3(C-7),72.2(C-2''),70.3(C-5''),70.0(C-4'),64.6(C-6'),36.6(C-8),17.9(C-6'')。以上数据与文献报道一致[9],故鉴定化合物5为异毛蕊花糖苷。
化合物6:淡黄色粉末,HR-ESI-MSm/z447.0937[M-H]−(calcd.for447.0922),分子式为C21H20O11。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.99(1H,s,5-OH),7.45(1H,d,J=2.4Hz,H-2'),7.44(1H,dd,J=2.4,8.4Hz,H-6'),6.90(1H,d,J=8.3Hz,H-5'),6.79(1H,d,J=2.2Hz,H-8),6.75(1H,s,H-3),6.44(1H,d,J=2.2Hz,H-6),5.08(1H,d,J=7.1Hz,H-1'');13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:181.9(C-4),164.5(C7),163.0(C-2),161.2(C-5),157.0(C-9),150.0(C-4'),145.8(C-3'),121.4(C-1'),119.2(C-6'),116.0(C-5'),113.6(C-2'),105.4(C-3),103.2(C-10),99.9(C-1''),99.6(C-6),94.7(C-8),77.2(C-5''),76.4(C-3''),73.1(C-2''),69.6(C-4''),60.6(C-6'')。以上数据与文献报道一致[10],故鉴定化合物6为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物7:黄色粉末,HR-ESI-MSm/z447.0934[M-H]−(calcd.for447.0922),分子式为C21H20O11。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.44(1H,dd,J=2.1,8.1Hz,H-6'),7.42(1H,d,J=2.0Hz,H-2'),7.30(1H,d,J=8.1Hz,H-5'),6.58(1H,s,H-3),6.43(1H,d,J=2.1Hz,H-8),6.20(1H,d,J=2.1Hz,H-6),4.94(1H,d,J=7.0Hz,H-1'');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:183.8(C-4),166.2(C-2),165.4(C-7),163.2(C-5),159.4(C-9),150.0(C-4'),148.6(C-3'),127.2(C-1'),119.8(C-6'),117.9(C-5'),114.8(C-2'),105.4(C-10),105.0(C-3),103.2(C-1''),100.3(C-6),95.1(C-8),78.5(C-5''),77.55(C-3''),74.8(C-2''),71.3(C-4''),62.4(C6'')。以上数据与文献报道一致[11],故鉴定化合物7为木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物8:棕色油状物,HR-ESI-MSm/z273.1353[M-H]−(calcd.for273.1333),分子式为C13H22O6。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:4.67(1H,d,J=5.6Hz,H-8),4.28(2H,dd,J=12.9,7.8Hz,H10),4.14(2H,m,H-1),4.10(2H,t,J=6.6Hz,H-1'),3.88(1H,dd,J=5.6,4.6Hz,H-9),3.10(1H,m,H-5),2.67(1H,q,J=15.6Hz,H-4b),2.40(1H,q,J=15.6Hz,H-4a),1.63(2H,m,H-2'),1.41(2H,m,H-3'),0.95(3H,t,J=7.4Hz,H-4');13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:174.7(C-3),142.6(C-9),139.9(C-8),76.6(C-6),75.8(C-7),65.6(C-1'),57.4(C-10),56.8(C-1),49.5(C-5),36.3(C-4),31.8(C-2'),20.2(C-3'),14.0(C-4')。以上数据与文献报道一致[12],故鉴定化合物8为(7R)-hydroxyeucommicacidn-butylester。
化合物9:黄色油状物,HR-ESI-MSm/z283.1196[M-H]−(calcd.for283.1176),分子式为C14H20O6。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.26(2H,s,H-2,6),7.25(2H,s,H-3,5),7.17(1H,m,H-4),4.30(1H,d,J=7.8Hz,H-1'),4.10(1H,m,H-8a),3.74(1H,m,H8b),2.94(2H,m,H-7);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:140.1(C-1),130.0(C-2,6),129.3(C-3,5),127.2(C4),104.4(C-1'),78.1(C-3'),78.0(C-5'),75.1(C-2'),71.7(C-8),71.6(C-4'),62.7(C-6'),37.2(C-7)。以上数据与文献报道一致[13],故鉴定化合物9为2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside。
5.2体外抗炎活性评价
对所分离的化合物进行体外抗炎活性筛选,寻找具有良好抗炎活性的化合物。采用CCK-8法测定化合物是否具有细胞毒性,实验结果表明,当化合物浓度为20μmol/L时,所有化合物对RAW264.7细胞存活率均高于85%。然后采用LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞作为体外炎症细胞模型,DEX为阳性药,通过检测LPS诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平,评估化合物的抗炎作用。采用Bonferroni检验进行单因素方差分析。如图4所示,化合物1、3~5、7~9均能不同程度抑制TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达。其中化合物4和5表现出显著的抗炎效果。
6、讨论
裸花紫珠的化学成分种类相对多样,主要分为二萜、三萜、黄酮、苯丙素、环烯醚萜等,本实验通过对裸花紫珠95%乙醇提取物正丁醇部位进行分离和鉴定,得到9个单体化合物,其中化合物1为新化合物,化合物8为裸花紫珠中首次分离得到。值得注意的是,新化合物1在C-1位发生丁酯化,考虑到本研究在分离过程中使用了正丁醇作为溶剂,且部分步骤可能涉及加热条件,因此不排除该酯化基团是在提取过程中由C-1位羧基与正丁醇发生Fischer酯化反应所形成的可能性。
鉴于此,推测化合物1可能为提取过程中生成的半人工产物。尽管如此,其结构的新颖性仍具有一定研究价值,并可为该类天然产物结构多样性和人工修饰提供参考。
另外,多个化合物包括化合物1均能抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平,本课题不仅丰富了裸花紫珠的化学结构库,也为其进一步的药理研究奠定物质基础。
图49个化合物对LPS刺激RAW264.7细胞炎症介质诱导的影响(xs±,n=3)
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基金资助:福建省自然科学基金项目(2022J05326);广东省自然科学基金项目(2023A1515011761);深圳市“医疗卫生三名工程”项目资助(SZZYSM202206005);
文章来源:陈斯淇,胡云霜,刘中秋,等.裸花紫珠正丁醇部位抗炎活性成分研究[J].中草药,2025,56(13):4549-4555.
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