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紫外分光光度法测定清火栀麦片中栀子苷含量的不确定度评定

2024-08-15 89 上传者：管理员

摘要：目的：建立紫外分光光度（UV）法测定清火栀麦片中栀子苷含量的方法，并对结果进行不确定度评定。方法：采用UV法进行方法学验证并测定栀子苷含量，对测定结果进行不确定度评定，计算合成不确定度，最终给出测量结果。结果：清火栀麦片中栀子苷经不确定度评定表明其含量测定结果在95%置信区间下的扩展不确定度为±1.724%(k=2)。结论：建立的不确定度评定法能为紫外分光光度法测定中药复方制剂有效成分的不确定度分析提供参考。

关键词：
不确定度评定
中成药制剂
栀子苷
清火栀麦片
紫外分光光度法
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清火栀麦片是一种现代中成药制剂[1]，广泛用于治疗咽喉肿痛、牙痛、发热、眼睛红肿等疾病。栀子苷是一种环烯醚萜苷类物质，具有重要的药理活性，是该复方的有效成分之一。不确定度是人们用于表达测量值与真实值之间偏离程度的指标，不确定度的大小可以反映测量结果的科学性[2]，有利于控制实验误差，提高分析的精准度[3-5]。

本文对UV法测定清火栀麦片中栀子苷含量过程中引入的各类不确定度进行评定，建立UV法测定清火栀麦片中栀子苷含量测量不确定度评定方法，对改进清火栀麦片生产工艺，优化栀子苷检测方法有一定的指导意义。

1、实验部分

1.1仪器与试剂

UV-5500PC型-紫外可见分光光度仪（Shang hai HAI METASH),AUW220D型十万分之一电子天平（Japan SHIMADZU),AB104-N型万分之一电子天平（Switzerland METTLER TOLEDO),BL6-189A型超声仪（Shanghai BILON）。

栀子苷对照品（批号：110749-201919，质量分数为97.1%），购自中国食品药品检定研究院；清火栀麦片（市售，批号：210401、210503、210806）；甲醇（分析纯，上海振兴化工一厂），水为Milli-Q超纯水。

1.2方法与结果

1.2.1对照品溶液的制备

精密称取干栀子苷对照品适量，置于10 m L量瓶中，加入色谱级甲醇适量，摇动使得对照品充分溶解，继续加入色谱级甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.8124 mg/mL的对照品储备溶液。精密量取1 mL对照品储备液置于25 m L容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，充分摇匀，即制备成对照品溶液。

1.2.2供试品溶液的制备

取清火栀麦片供试品20片，除去包衣，研细，精密称取粉末约0.15 g，倒入50 mL量瓶中，加入约40 m L的甲醇溶液，超声处理30 min，放冷，再用甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，精密量取续滤液1 mL置于25 m L容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即制备成供试品溶液。

1.2.3测定方法

取不同浓度的对照品溶液和甲醇溶液，按照UV测定方法，在238 nm的波长处测定上述各溶液的吸光度（A），以A为纵坐标，各溶液的浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。取已制备的供试品溶液，按照标准曲线制备项下的测定方法，测定供试品中栀子苷吸光度（A），根据标准曲线计算得出供试品中栀子苷的含量。

2、不确定度评估

2.1数学模型

根据UV测定原理，确定清火栀麦片中栀子苷含量的计算公式为：

式中，W为清火栀麦片中栀子苷含量；A为供试品溶液的吸光度；V1为供试品溶解体积；V2为供试品稀释体积；E为栀子苷的吸收系数；l为液层厚度；m为供试品称样量。

2.2不确定分量评定

2.2.1标准溶液引入的相对标准不确定度

2.2.1. 1标准物质纯度引入的相对不确定度

栀子苷对照品购自中国食品药品检定研究院，由于尚无法得到不确定度参考值，故此项忽略。

2.2.1. 2称量标准物质引入的相对不确定度

称量对照品使用的是十万分之一天平，核查该天平生产厂家的相关指标可知，该天平的允差为±0.01 mg，按矩形分布计算不确定度为：

该天平称量时重复性为±0.01 mg，则：

因此，称量标准物质引入的不确定度为：

本实验采用该天平称量栀子苷的质量分别为8.0 mg，则：

2.2.1. 3配制标准溶液引入的相对标准不确定度

本试验中使用了1 mL移液管、50 mL量瓶、100 mL量瓶。1 m L移液管、50 mL量瓶、100 mL量瓶引入的标准不确定度u (V)主要包括：玻璃仪器各自的容量允许差影响的标准不确定度u1(V)、温度影响的标准不确定度u2(V)。这两项被认为是线性叠加，因而不确定度公式为：

查询JJG 196—2006《常用玻璃量器》可知，1 mL单线吸量管（A级）的允许容量差是±0.007 mL,50 mL(A级）量瓶的允许容量差是±0.05 mL,100 mL单线容量瓶（A类）的允许误差是±0.10 mL，因校准结果实际误差都非常小，故按三角分布考虑[9]。3种玻璃容器因容量允许误差引入的标准不确定度分别为：

配制对照品溶液时温度为25℃，1 mL移液管（A级）、50mL量瓶（A级）、100 mL单线容量瓶（A类）按温度为20℃定标，1 mL移液管（A级）、50 m L量瓶（A级）、100 m L单线容量瓶（A类）因温度产生的体积增量分别为（1×0.00021×5)mL、（50×0.00021×5)mL、（100×0.00021×5)m L。由于不同容器测量时分布类型难以确定，假设均为矩形分布。3种玻璃容器因温度影响引入的标准不确定度为：

3种玻璃仪器合成标准不确定度为：

因此，配制标准溶液引入的相对标准不确定度为：

2.2.2标准曲线变动性引入的相对标准不确定度

配制不同浓度对照品溶液，根据栀子苷标准溶液不同浓度的吸光度，利用最小二乘法拟合得到测量清火栀麦片中栀子苷含量标准曲线的线性方程为：

由标准曲线变动性引入的标准不确定度为：

由此引起的相对标准不确定度为：

2.2.3样品前处理引入的相对标准不确定度

2.2.3. 1样品称量引入的相对标准不确定度

称量样品使用是万分之一天平，该天平的允差为±0.001g，则：

该天平称量时重复性标准偏差为±0.0002 g，则：

因此，样品称量引入的标准不确定度为：

该天平称量样品的质量是0.3 g，则：