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胰腺癌组织中miR-183和BNIP3表达与胰腺癌吉西他滨化疗敏感性关系分析

2025-04-25 54 上传者：管理员

摘要：目的探索胰腺癌组织中微小RNA-183(miR-183)､Bc1-2/腺病毒E1B-19k相关蛋白3(BNIP3)表达与胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的关系｡方法回顾性分析于2017年2月至2022年2月期间濮阳油田总医院收集的72例吉西他滨化疗干预的胰腺癌患者,均进行miR-183､BNIP3检测,比较不同miR-183､BNIP3表达水平中临床病理特征,再分析不同miR-183､BNIP3表达患者疾病控制率｡同时,随访2年,经Kaplan-Meier分析不同miR-183､BNIP3表达患者生存情况｡结果经单因素分析,性别､肿瘤直径､肿瘤分期､肿瘤位置与miR-183､BNIP3表达水平无统计差异性(P>0.05),而组织分化程度与miR-183､BNIP3表达水平存在一定相关性(P<0.05)｡miR-183高表达疾病控制率(50.98%vs85.71%)低于miR-183低表达;BNIP3高表达疾病控制率(49.02%vs76.19%)低于BNIP3低表达(P<0.05)｡同时,经2年随访,36例发生死亡,所占比50.00%｡经Kaplan-Meier分析,miR-183､BNIP3不同表达情况的生存率､生存时间比较差异有统计学意义(P<0.05),经Cox比例风险回归模型分析,miR-183高表达､BNIP3高表达是影响胰腺癌患者2年生存率的独立危险因素(P<0.05)｡结论胰腺癌患者应用吉西他滨化疗敏感性与miR-183､BNIP3表达有关,低表达miR-183､BNIP3患者行吉西他滨化疗生存率更高｡

关键词：
Bc1-2/腺病毒E1B-19k相关蛋白3
化疗
吉西他滨
微小RNA-183
胰腺癌
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消化系统肿瘤,由于早期症状不具有特异性,大部分确诊是已处于中晚期,此阶段进行手术治疗效果不佳[1]｡经统计[2],经手术切除后5年生存率仍不足10%,故临床常通过术后辅助化疗延长生存时间｡在目前辅助化疗方案中,吉西他滨具有显著效果,其是一种新的胞嘧啶核苷衍生物,能够抑制核苷酸还原酶活性,激活脱氧胞嘧啶激酶,渗入细胞DNA,降低胞内脱氧核苷三磷酸酯,有效抑制肿瘤繁殖､生长[3]｡但随着相关报道增多,学者发现胰腺癌患者应用该化疗方案效果却不相同,考虑是肿瘤对吉西他滨产生耐药性,从而影响效果[4-5]｡近年来,越来越多研究表明,miRNAs和特定蛋白表达与胰腺癌进展､疗效密切相关[6]｡其中,微小RNA-183(miR-183)和BNIP3作为两种重要的分子标志物,受到了广泛关注｡Bc1-2/腺病毒E1B-19k相关蛋白3(BNIP3)是一种促凋亡蛋白,属于BH3-only促凋亡蛋白亚类的线粒体蛋白,与抗凋亡蛋白结合,可形成异二聚体,影响蛋白抗凋亡功能,低氧环境下,还会引起细胞代谢改变,影响细胞存活时间,故推测其与癌症发生､发展存在一定关联[7]｡而miR-183参与调控多种生理和病理过程,是一种非编码单链小分子RNA,有研究表明,其可能影响化疗敏感性[8],但具体机制尚未明确,基于此背景,本研究进一步分析BNIP3､miR-183在胰腺癌组织中表达情况及与吉西他滨化疗敏感相关性,以期为日后精准治疗提供新的策略和靶点｡

1、资料与方法

1.1一般资料

对在2017年2月至2022年2月期间濮阳油田总医院收集的72例胰腺癌患者基本资料进行回顾性分析,其中,男性49例,女性23例,平均年龄(53.67±4.11)岁,平均病程(6.32±2.27)个月,平均体重(57.32±7.86)kg｡纳入标准:①符合胰腺癌诊断标准[9];②术后规律应用以吉西他滨化疗干预;③临床资料完整｡排除标准:①行姑息手术者;②肿瘤无法完整切除,向远处转移;③有严重基础疾病;④合并肝肾功能异常者;⑤存在治疗不耐受､药物过敏者｡

1.2疗效判定

以《中国胰腺癌诊治指南(2021)》[10]为依据,判定治疗效果,完全缓解(CR):连续4周肿瘤标志物正常､无新病灶出现,靶病灶消失;部分缓解(PR):维持4周,病灶最大径之和减少超过30%;疾病稳定(SD):未达到PR标准,但未发生新病灶;疾病进展(PD):出现新病灶｡疾病控制率=CR率+PR率｡

1.3检测方法

miR-183､BNIP3表达检测:将癌变组织修剪成1mm3大小,加入RNA保护液,冷冻保存｡在提取组织总RNA时运用TRIzol法,选取1.9-2.1吸光度A280的RNA样品,按照说明书将M-MLV逆转录酶转录为cDNA｡用美国Bio-Rad公司提供的荧光PCR仪(CFX96型号)进行检测｡序列号见表1｡反应体系:dNTP1.6μL,10μmol/L上下游引物各1μL,TaqDNA聚合酶1μL,加缓冲液25μL｡反应条件:96℃变性2s,92℃预变性20s,80℃退火6s,85℃延伸20s,共30个循环,用2-△△ct法计算miR-183､BNIP3表达量｡

表1miR-183､BNIP3上下游引物序列指标

免疫组织化学分析:根据肿瘤细胞染色范围､强度进行综合评估,根据染色范围评分:4分:阳性>50%,3分:阳性26%~50%,2分:阳性11%~25%,1分:阳性≤10%,0分:阳性<1%｡染色强度:3分:肿瘤细胞高于淋巴细胞染色强度,强着色,2分:肿瘤细胞与淋巴细胞染色强度相当,中等着色,1分:浅着色,0分:无着色｡miR-183､BNIP3评分由染色范围和强度评分相加而成,强阳性≥7分,阳性5~6分,弱阳性3~4分,阴性≤2分｡将强阳性和阳性判定为高表达组,弱阳性和阴性判定为低表达组｡结果判定由两名专业病理人员进行双盲法评估,结果一致记录结果,不一致由第三位更权威医师确定｡

1.4随访情况

通过上门､电话､查阅病历等方式对患者进行随访,以出院当天为随访起点,以死亡为终点｡

1.5统计学处理

使用SPSS22.0软件计算数据,计数资料用[例(%)]表示,行χ2检验;计量资料符合正态分布,用(x±s)表示,行独立样本t检验;采用Kaplan-Meier生存曲线分析生存率,以LogRank(Mantel-Cox)检验差异性,预后影响因素采用Cox比例风险回归模型分析;P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1分析患者不同miR-183､BNIP3表达水平中临床病理特征

经单因素分析,性别､肿瘤直径､肿瘤分期､肿瘤位置与miR-183､BNIP3表达水平无统计差异性(P>0.05),而组织分化程度与miR-183､BNIP3表达水平存在一定相关性(P<0.05),见表2｡

表2分析患者不同miR-183､BNIP3表达水平中临床病理特征

2.2分析miR-183表达与患者化疗效果

miR-183高表达疾病控制率低于miR-183低表达(P<0.05),见表3｡2.3分析BNIP3表达与患者化疗效果BNIP3高表达疾病控制率低于BNIP3低表达(P<0.05),见表4｡

表3分析miR-183表达与患者化疗效果

表4分析BNIP3表达与患者化疗效果

2.4对比miR-183值患者的生存率和生存时间

72例患者经2年随访,36例发生死亡,所占比50.00%｡而miR-183､BNIP3不同表达情况患者生存率､生存时间如表5｡经Kaplan-Meier分析显示,而miR-183､BNIP3不同表达情况的生存率､生存时间比较差异有统计学意义(P<0.05),如表6､图1-2｡

2.5影响胰腺癌患者预后的Cox比例风险分析

以“miR-183(1=高表达,2=低表达)､BNIP3(1=高表达,2=低表达)”作为协变量,将“治疗后2年生存率”作为因变量,纳入Cox比例风险回归模型中进行分析,结果显示,miR-183高表达､BNIP3高表达是影响胰腺癌患者2年生存率的独立危险因素(P<0.05),如表7｡

表5对比不同miR-183､BNIP3值患者的生存率和生存时间指标

表6胰腺癌患者2年后生存发生情况平均值分析指标

图1胰腺癌患者不同miR-183表达水平2年后生存曲线图

图2胰腺癌患者不同BNIP3表达水平2年后生存曲线图

表7影响胰腺癌患者2年生存率的Cox比例风险分析

3、讨论

胰腺癌是一种预后极差､进展快､发病隐匿的恶性肿瘤,发病率逐年上升,中位生存期不超过6个月,且大部分确诊患者已处于中晚期,已丧失手术机会[11]｡目前主要以化疗干预为主,吉西他滨是胰腺癌常用的一类药物,作为一种二氟核苷类抗代谢药物,主要在肿瘤细胞DNA合成期发挥一定作用,具有细胞周期特异性,在进入细胞后,能够被脱氧胞苷激酶磷酸化,形成双氟脱氧胞苷三磷酸活性产物和脱氧胞苷二磷酸活性产物,进一步抑制DNA链合成和鸟苷配对,进而促使DNA断裂,诱导肿瘤细胞凋亡[12-13]｡虽然吉西他滨利用价值较高,但随着相关研究增多,学者发现仍有大部分胰腺癌患者存在化疗不敏感迹象,导致化疗失败,因此,如何逆转胰腺癌药物耐药,提高抗肿瘤药物敏感性是当前研究热点问题[14]｡

化疗个体化先决条件需要稳定药敏检测平台,分为体外､体内两种检测,人体存在的肿瘤组织是一个三维立体细胞群体,单层细胞模型未考虑肿瘤细胞之间相互影响作用,因此无法模拟体内环境,近年来,有越来越多研究验证肿瘤细胞和微环境的关系,两种相互作用可能参与了肿瘤耐药发生[15-16]｡miR-183基因位于染色体7q32位置,参与肿瘤转移､侵袭的调节机制已被多次报道,不仅会通过靶向胰腺导管腺癌4调节胰腺癌细胞株SW1990侵袭､凋亡､增殖,也可通过靶向Bmi-1调控胰腺导管腺癌细胞的凋亡､增殖,影响癌症严重程度,均提示miR-183能够成为治疗胰腺癌新靶点[17]｡而BNIP3是一种具有肿瘤抑制功能的基因,属于BH3-only促凋亡蛋白家族成员,通过将抗凋亡蛋白和特有BH3结构结合会形成异二聚体,发挥促细胞凋亡功能｡分析本次结果,性别､肿瘤直径､肿瘤分期､肿瘤位置与miR-183､BNIP3表达水平无统计差异性,组织分化程度与miR-183､BNIP3表达水平存在一定相关性,说明miR-183､BNIP3蛋白表达参与调控肿瘤组织生长､发展､增殖过程｡其中BNIP3可通过影响线粒体自噬和细胞凋亡或存活参与组织再生､分化过程;miR-183会通过调控细胞凋亡､分化､增殖过程来影响组织分化程度｡而通过进一步分析细胞因子与胰腺癌吉西他滨化疗敏感性,结果显示,miR-183､BNIP3高表达疾病控制率低于miR-183､BNIP3低表达,说明高表达更能够降低胰腺癌细胞对化疗敏感性,导致疾病控制率减少｡可能是因为miR-183､BNIP3蛋白高表达会降低细胞对外界物质的摄取能力,影响细胞膜表面其他跨膜蛋白的功能和数量,此结果与王喆学者[18]相似,进一步说明miR-183､BNIP3蛋白表达可能与患者化疗敏感性存在一定关联｡而通过建立Kaplan-Meier模型分析,胰腺癌患者miR-183､BNIP3高表达生存率低于miR-183､BNIP3低表达,说明miR-183､BNIP3表达与肿瘤缺血缺氧严重程度､预后密切相关｡而经Cox比例风险回归模型分析,miR-183高表达､BNIP3高表达是影响胰腺癌患者2年生存率的独立危险因素,进一步说明miR-183､BNIP3高表达能够作为预后判定独立指标｡究其原因miR-183､BNIP3的高表达会通过影响细胞周期､抑制凋亡､促进肿瘤细胞增殖､降低化疗敏感性,加速胰腺癌进展,从而降低生存率｡相反,miR-183､BNIP3低表达可能意味着对治疗敏感性较高,肿瘤细胞恶性程度较低,因此患者生存率相对较高｡

综上所述,miR-183､BNIP3在胰腺癌中具有高表达,且与肿瘤分化程度密切相关｡若miR-183､BNIP3表达越高,对吉西他滨药物更加敏感,生存率越低,因此可将miR-183､BNIP3作为预测胰腺癌疗效的标志物指标,从而为临床化疗药物选择提供科学依据｡但由于miR-183､BNIP3在胰腺癌调控机制较为复杂,具体影响因素和相关机理仍需进一步研究｡

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