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肝癌合并肝硬化采用复方甘草酸苷治疗的疗效观察

2020-08-10 266 上传者：管理员

摘要：目的：分析复方甘草酸苷（SNMC）对肝癌合并肝硬化患者肝功能的影响，并探讨该药物对肝癌细胞系Hep-G2、MHCC-97H增殖能力的影响。方法：160例肝癌合并肝硬化患者作为研究对象，随机分为观察组和对照组，观察并比较两组患者治疗前后各项肝功能指标变化、以不同浓度SNMC（0、25、100、200、800μg/mL）分别处理肝癌细胞系Hep-G2及MHCC-97H，应用CCK-8细胞增殖实验、平板集落形成实验探究其对肝癌细胞增殖能力的影响。结果：观察组治疗后AST、ALT、TBIL均明显低于对照组，ALB明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；随SNMC药物浓度的增加，肝癌细胞的增殖能力逐渐降低。100、200、800μg/mL的SNMC可显著降低肝癌细胞的增殖，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：SNMC对肝癌合并肝硬化患者具有保肝作用，可促进肝功能的恢复、延缓肝功能的恶化、提高患者的生存质量，其机制可能通过抑制肝癌细胞的增殖而实现。

关键词：
保肝作用
复方甘草酸苷
抑制肝癌细胞增殖
肝癌
肝硬化
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肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一[1,2,3]。根据组织学分型，肝癌可分为肝细胞型、胆管细胞型以及混合型，其中以肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）最多见，死亡人数位居肿瘤相关死亡的第3位[4]。在我国，超过80%的肝癌患者合并有肝硬化，此类患者肝脏代偿能力差、储备功能低下，加之正常肝细胞再生不良[5]，治疗过程中应用保肝药物显得尤为重要。复方甘草酸苷（stronger neo-mioniphagen C,SNMC）在临床上广泛用于抗炎、抗变态反应，具有稳定肝细胞膜、免疫调节等重要作用[6,7]，但对肝癌细胞增殖的影响研究较少。本研究采用回顾性分析，选取160例肝癌合并肝硬化患者作为研究对象进行对比研究，观察该药物对患者肝功能及对肝癌细胞增殖作用的影响，现报道如下。

1、材料和方法

1.1一般资料

1.1.1临床资料

选取2016年1月—2018年4月期间山东第一医科大学第一附属医院收治的160例肝癌合并肝硬化患者作为研究对象，纳入标准：（1）肝癌合并肝硬化诊断明确且肿瘤≤5 cm;(2）无严重器质性病变，无远处转移等；（3）排除酒精性肝损害、其他恶性肿瘤、自身免疫性肝病等疾病；（4）心肺功能良好。所有患者随机分为观察组和对照组，其中观察组80例，男68例，女12例；年龄35～85岁，平均（57.79±10.59）岁。对照组80例，男70例，女10例；年龄22～86岁，平均（56.04±11.71）岁。两组患者年龄、性别、体重等一般资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有患者对本次研究知情同意，且经过伦理委员会批准审核。

1.1.2实验材料

人肝癌细胞株Hep-G2、MHCC-97H均购于中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。

1.1.3试剂仪器

复方甘草酸苷注射液，20 mL/支，含有甘草酸苷40 mg、甘氨酸400 mg、盐酸半胱氨酸20 mg，日本美能发源制药株式会社生产。DMEM培养基、胎牛血清购于美国Gibco公司。CCK-8试剂购于美国APExBIO公司。6孔、96孔培养板购于美国Corning公司。

1.2方法

1.2.1

对照组患者根据肿瘤所在部位行肝癌局部切除术，术后对照组给予补液、抑酸、抗感染等常规治疗，观察组患者在常规治疗的基础上，于3 d加用SNMC注射液（日本美能发源制药株式会社生产）60mL与5%葡萄糖注射液250 mL混合后静脉滴注，1次/d，共持续10 d。

1.2.2细胞培养

Hep-G2、MHCC-97H细胞系用完全培养基（90%DMEM培养基+10%胎牛血清）进行培养，传代后备用。

1.2.3细胞实验CCK-8细胞增殖实验

将处于对数生长期的2种细胞均以5×103/m L接种于96孔板中，贴壁24 h后测0小时的OD值，待细胞长到70%～80%时，将培养基换成终体积100μL、含有SNMC25、100、200、800μg/m L的DMEM培养基，空白对照组为不加药处理，每组浓度设3个复孔。加药处理24、48及72 h后，每孔加入10μLCCK8溶液，37℃、5%CO2培养箱温育2～4 h，酶标仪450nm处测定各孔吸光度值（OD值）检测细胞增殖情况。平板集落形成实验：将处于对数生长期的2种细胞均以500个/孔的细胞密度接种于6孔板中，轻晃使细胞均匀分布，放置在37℃、5%CO2培养箱过夜贴壁，依次加入25、100、200、800μg/m L浓度的SNMC的DMEM培养基，空白对照组为不加药物的培养基，持续刺激14～20 d（期间可根据细胞生长情况更换培养基），最后终止培养，弃液体甲醇固定细胞30 min，弃固定液，结晶紫染色30 min,PBS洗3遍，室温下干燥后数每孔细胞形成的集落的数量。

1.3观察指标

术后7 d，分别检测两组患者肝功能，比较两组患者手术前后各项肝功能变化，包括AST、ALT、TBIL及ALB。同时分别比较不同浓度SNMC对Hep-G2、MHCC-97H两种肝癌细胞系增殖能力的影响。

1.4统计学处理

采用SPSS 24.0软件，计量资料以表示，组内比较采用配对t检验，组间比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组手术前后肝功能情况的比较

术前，两组患者的肝功能指标ALT、AST、TBIL及ALB，差异均无统计学意义（t=0.27,P>0.05;t=1.05,P>0.05;t=0.24,P>0.05;t=1.37,P>0.05）。术后7 d，观察组ALT、AST、TBIL均明显低于对照组，ALB明显高于对照组，差异均有统计学意义（t=13.72,P<0.001;t=6.74,P<0.001;t=3.29,P<0.05;t=3.83,P<0.001），见表1。

2.2 CCK-8细胞增殖实验

随着浓度的不断增加，SNMC对处于对数生长期的Hep-G2、MHCC-97H的细胞增殖抑制作用逐渐增强。100、200、800μg/mL浓度的SNMC可显著降低肝癌细胞的增殖，差异有统计学意义（P<0.05），见图1。

表1应用SNMC两组肝功能变化情况

图1 CCK-8细胞增殖实验显示不同浓度的SNMC对肝癌细胞系Hep-G2、MHCC-97H增值的影响

2.3平板集落形成实验结果

随着浓度的不断增加，SNMC对Hep-G2、MHCC-97H的细胞增殖抑制作用逐渐增强。100、200、800μg/mL浓度的SNMC可显著降低肝癌细胞的集落形成数目，差异有统计学意义（P<0.05）。见图2。

3、讨论

根据最新的2019年慢性乙型肝炎防治指南，目前我国慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者约有7000万例[8,9]。HBV在肝内持续的活化导致正常肝细胞受损以及肝纤维化等，可导致肝硬化，早期干预肝硬化则是阻止向肝癌进展的重要步骤[10]。临床治疗中，肝切除是治疗肝癌的常用方式，已有研究表明，肝切除术可对肝功能造成不同程度的损害[11,12,13]。复方甘草酸苷是一种由甘草酸苷、甘氨酸、盐酸半胱氨酸组成的混合制剂，广泛应用于肝病、皮肤、免疫、肿瘤放化疗等各个领域，用于调节免疫、抗炎、抗变态反应的治疗，其中，甘草酸能够阻断花生四烯酸代谢、抑制磷脂酶A2达到保护肝细胞膜的效果。

图2平板集落形成实验显示不同浓度的SNMC对肝癌细胞系Hep-G2、MHCC-97H集落形成的影响及量化

AST、ALT、TBIL、ALB等肝功能指标可直接反映肝细胞的状态[14,15]。本临床试验结果显示，观察组与对照组相比，观察组的ALT、AST、TBIL指标较对照组明显改善，分别为（47.59±20.36)U/L、（45.56±34.86)U/L、（26.84±14.48)U/L，差异有统计学意义（P<0.05），而观察组的ALB明显高于对照组（P<0.05），说明SNMC在保护肝功能方面有积极意义。而100、200、800μg/mL的SNMC可显著降低肝癌细胞的增殖，差异均有统计学意义（P<0.05），证明随SNMC药物浓度的增加，肝癌细胞的增殖能力逐渐降低。

综上所述，复方甘草酸苷对肝癌合并肝硬化患者产生良好的保肝效应，且通过一定的浓度依赖关系抑制肝癌细胞的增殖。

参考文献：

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[7]李国欣,韩丽利.复方甘草酸苷在肝癌介入化疗患者中的保肝作用探讨[J].中国现代药物应用,2019,13(1):102-103.

[8]中华医学会感染病学分会､中华医学会肝病学分会.《慢性乙型肝炎防治指南》(2019年版)[J].中华肝脏病杂志,2019,27(12):938-961.

[11]杨勇志,曹铭辉,吴强,等.复方甘草酸苷对肝癌合并肝硬化患者术中肝功能的影响[J].中国药房,2006,17(13):1006-1007.

[12]李国欣,韩丽利.复方甘草酸苷在肝癌介入化疗患者中的保肝作用探讨[J].中国现代药物应用,2019,13(1):102-103.

[13]周磊,朱先海,费一鹏,等.复方甘草酸苷在原发性肝癌介入化疗中的护肝作用研究[J].中国药物评价,2019,36(2):65-67.

[14]刘娜.乙肝舒康胶囊联合恩替卡韦和复方甘草酸苷治疗慢性重症乙型肝炎的疗效观察[J].现代药物与临床,2016,31(10):1648-1651.

赵悦怡,逯素梅,葛肖肖,马万山.复方甘草酸苷对肝癌合并肝硬化的作用研究[J].中国现代普通外科进展,2020,23(03):169-172.