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lncRNACCHE1与肺腺癌临床特征及预后的关系

2020-11-02 413 上传者：管理员

摘要：目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)CCHE1表达与肺腺癌临床特征及预后的关系。方法:选取2015年12月至2016年12月行手术切除的肺腺癌患者83例，收集其肺癌组织和癌旁正常组织蜡块，采用qRT-PCR法检测lncRNACCHE1的表达，分析其表达与患者临床病理特征的关系;随访患者预后情况，分析lncRNACCHE1表达在患者预后判断中的价值。结果:肺腺癌组织中lncRNACCHE1的表达明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05);高TNM分期、存在淋巴结转移及低分化程度的患者lncRNACCHE1表达明显高于低TNM分期、无淋巴结转移及高分化程度者，差异有统计学意义(P<0.05);lncRNACCHE1诊断为肺腺癌的AUC为0.925(95%CI:0.876～0.974)，当lncRNACCHE1≥29.18时，敏感度为94.0%，特异度为89.2%;入组病例死亡22例，存活61例，死亡者lncRNACCHE1表达为(73.15±8.45)，明显高于存活者(P<0.05)。lncRNACCHE1高表达患者术后3年无进展生存率为32.84%(22/67)，总生存率为68.66%(46/67)，分别明显低于lncRNACCHE1低表达者(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、分化程度及lncRNACCHE1水平是肺腺癌患者术后3年PFS和OS的独立影响因素(P<0.05)。结论:lncRNACCHE1在肺腺癌组织中表达升高，其表达与患者临床病理特征及预后有关，可作为肺腺癌潜在的分子标志物。

关键词：
lncRNACCHE1
临床特征
肺腺癌
预后
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我国自2010年来，癌症已取代心血管疾病成为主要的死亡原因，其中肺癌的发病率和死亡率高居首位，2014年我国肺癌发病率为57.13/10万，死亡率为45.80/10万[1]。早期肺癌临床表现无明显特异性，大部分患者确诊为肺癌时往往已进入中晚期。因此，肺癌的早期筛查对于其治疗及预后有重要的临床意义。根据其组织学特点，肺癌可以分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)，其中80%的肺癌均为NSCLC，而NSCLC又以腺癌较为常见。大量数据表明[2,3]，肿瘤的局部进展、复发以及转移是预后不良的主要原因。长链非编码RNA(longnon-codingRNAs,lncRNAs)是体内不参与蛋白编码的一类长链RNA分子，研究发现lncRNAs在肿瘤的发生发展中有重要的调控作用。lncRNACCHE1(cervicalcarcinomahigh-expressed1,CCHE1)是一个新近鉴定一种lncRNA,YangM等[4]在宫颈癌组织中进行lncRNA筛查，发现一种高表达lncRNA(定义为lncRNACCHE1)，其表达与患者临床病理特征密切相关，可预测宫颈癌患者预后，其在宫颈癌中表现出促癌作用。近期研究发现，lncRNACCHE1可促进非小细胞肺癌的增殖、转移和侵袭，对非小细胞癌的预后有一定预测作用[5]。但国内关于lncRNACCHE1和肺腺癌的报道较少，故本研究旨在观察lncRNACCHE1在肺腺癌中的表达情况，并分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系，为肺腺癌的早期诊断、治疗及预后判断提供新思路。

1、资料与方法

1.1一般资料:

选取2015年12月至2016年12月行手术切除的肺腺癌患者83例，收集其肺癌组织和癌旁正常组织蜡块，肺癌组织经病理检测确诊，癌旁正常组织距离病灶>5cm。其中男45例，女38例;年龄35～79岁，平均年龄(58.26±7.45)岁;TNM分期:Ⅰ期25例，Ⅱ期13例，Ⅲ期39例，Ⅳ期6例;淋巴结转移:存在淋巴结转移35例，无淋巴结转移48例;分化程度:高分化29例，中分化34例，低分化20例。本研究已通过医院伦理委员会审批，且患者及家属均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1qRT-PCR法检测lncRNACCHE1的表达:

取适量肺癌组织和癌旁正常组织，加入Trizol裂解液(美国Invitrogen公司)，室温下匀浆;采用氯仿-异丙醇体系提取其总RNA，测定其纯度、浓度及完整度;参照逆转录试剂盒(美国GeneCopoeia公司)说明书，将提取总RNA逆转录为cDNA链;取等量cDNA模板，混入SYBRGreenPCRMasterMix(美国ThermoScientific公司)上qRT-PCR仪(美国Bio-Rad公司)进行检测，采用2-ΔΔCT法，以GADPH的表达为内参，计算组织标本中lncRNACCHE1的相对表达量，作3次独立重复试验。条件设置:95℃预变性20s,95℃变性15s,60℃退火45s,72℃延伸2min，共40个循环。内参GAPDH上游引物:5’-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3’，下游引物:5’-CCATGTAGTTGAGGTCAATGAAG-3’[6]。lncRNACCHE1上游引物:5’-AAGGTCCCAG-GATACTCGC-3’，下游引物:5’-GTGTCGTGGACTG-GCAAAAT-3’[7]。基因引物合成由江苏百奥迈科生物技术有限公司提供。

1.2.2随访:

随访截止至2019年12月31日，以门诊复查、电话的形式记录患者预后情况，包括无进展生存期(progressionfreesurvival,PFS)和总生存期(overallsurvival,OS),PFS是指受试者入组到肿瘤发生恶化或死亡的时间，OS是指受试者入组到死亡的时间[8]。随访频率:术后第1年，1次/月;术后第2年，1次/3个月;术后第3年，1次/半年。

1.3统计学方法:

采取SPSS17.0软件进行统计学处理与分析，服从正态分布的计量数据以均数±标准差(x±s)表示，两组均数比较采用t检验，多组均数比较采用单因素方差分析;计数数据以例数或率(%)表示，采用χ2检验;以受试者工作特征(ROC)曲线描述lncRNACCHE1对肺腺癌的诊断价值，以曲线下面积(AUC)进行评价;采用Kaplan-Meier法分析生存率、中位PFS和中位OS，生存率比较采用Log-rankχ2法检验，Cox比例风险模型进行预后的多因素分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1lncRNACCHE1在肺腺癌组织及癌旁组织的表达:

肺腺癌组织中lncRNACCHE1的相对表达量为(65.26±5.84)，癌旁组织中为(21.34±1.68);肺腺癌组织中lncRNACCHE1的表达明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2lncRNACCHE1表达与患者临床病理特征的关系:

不同性别、年龄的肺腺癌患者lncRNACCHE1的表达情况，差异无统计学意义(P>0.05);而不同TNM分期、淋巴结转移及分化程度患者lncRNACCHE1的表达情况，差异有统计学意义(P<0.05)，高TNM分期、存在淋巴结转移及低分化程度的患者lncRNACCHE1表达量明显高于低TNM分期、无淋巴结转移及高分化程度者(P<0.05)，见表1。

表1不同临床病理特征患者lncRNACCHE1表达的比较

2.3lncRNACCHE1对肺腺癌的鉴别价值:

lncRNACCHE1诊断为肺腺癌的AUC为0.925(95%CI为0.876～0.974)，当lncRNACCHE1≥29.18时，敏感度为94.0%，特异度为89.2%，见图1。

2.4lncRNACCHE1表达与肺腺癌患者预后的关系:

截止2019年12月30日，入组病例死亡22例，存活61例;比较发现死亡者lncRNACCHE1表达为(73.15±8.45)，明显高于存活者(59.37±5.19)，差异有统计学意义(t=8.934,P<0.001)。

根据上述ROC分析结果，取其临界值(29.18)将患者区分为lncRNACCHE1高表达和低表达，分别有67例和16例。lncRNACCHE1高表达患者术后3年中位PFS为19.8个月，3年无进展生存率为32.84%(22/67)，总生存率为68.66%(46/67)。lncRNACCHE1低表达患者术后3年无进展生存率为81.25%(13/16)，总生存率为93.75%(15/16)。lncRNACCHE1高表达患者术后3年无进展生存率(Log-rankχ2=11.010,P<0.001)和总生存率(Log-rankχ2=3.899,P=0.048)明显低于lncRNACCHE1低表达者，差异有统计学意义(P<0.05)，见图2。

2.5肺腺癌患者术后生存时间的影响因素分析:

以患者预后结局为因变量，对自变量年龄(<60为1，≥60为2)、TNM分期(Ⅰ期为1，Ⅱ期为2，Ⅲ期为3，Ⅳ期为4)、淋巴结转移(无淋巴结转移为0，有淋巴结转移为1)、分化程度(高分化为1，中分化为2，低分化为3)及lncRNACCHE1水平(低表达为1，高表达为2)进行赋值，纳入Cox模型进行分析，结果显示TNM分期、淋巴结转移、分化程度及lncRNACCHE1水平是肺腺癌患者术后3年PFS和OS的独立影响因素，见表2。

表2肺腺癌患者术后预后的影响因素分析

图1lncRNACCHE1对肺腺癌的鉴别价值

图2肺腺癌患者不同lncRNACCHE1水平的生存曲线

3、讨论

肺腺癌已成为肺癌最常见的病理类型，占所有肺癌的30%左右，主要起源于支气管腺体或上皮。临床表现以干咳、胸痛、气急等胸部症状为主，影像学检查可见圆形或椭圆形肿块[9]。但其早期症状缺乏特异性，容易被忽视，而且早期肺腺癌有血行转移的风险。因此，早发现、早诊断、早治疗对改善患者预后有重大的临床意义，可有效提高患者5年生存率。另外，不同类型的肺癌治疗方法不同，准确判断肿瘤病理分型也是治疗的关键。

随着分子技术的发展，分子靶向治疗为失去手术指征的晚期肺腺癌患者带来了新的治疗希望。人类全基因组中但仅有不足2%的基因组编码蛋白，而90%以上的基因转录本均为非编码RNAs，参与高级真核生物表观遗传学的调控。根据非编码RNAs的长度，将大于200个核苷酸的非编码RNAs定义为lncRNAs。研究发现[10],lncRNAs可参与肿瘤的生物学调控，对于肿瘤的诊断、治疗及预后极具价值。lncRNACCHE1最初在宫颈癌组织发现，位于第10号染色体基因间区。据报道[11],lncRNACCHE1在宫颈癌组织中异常高表达，而且与患者肿瘤大小、FIGO分期及预后密切相关。随后，lncRNACCHE1被报道在肝癌、非小细胞肺癌和胃癌中具有促癌作用[12]。机制研究方面，lncRNACCHE1可通过PCNA、活化ERK/MAPK等途径促进宫颈癌细胞的增殖。上述研究表明，lncRNACCHE1在体内可能具有某种促癌作用，但国内尚无lncRNACCHE1与肺腺癌的相关报道。

本研究结果显示，肺腺癌组织中lncRNACCHE1水平明显高于癌旁组织。进一步分析其水平与患者临床病理特征关系发现，高TNM分期、存在淋巴结转移及低分化程度患者lncRNACCHE1表达更高。上述结果表明，lncRNACCHE1在肺腺癌中可能存在某种调控机制，与其发生发展密切相关。ROC曲线分析结果显示，lncRNACCHE1水平对于肺腺癌有较高的诊断价值，提示lncRNACCHE1水平可辅助用于临床肺腺癌的早期诊断，但本研究属于单一中心、小样本量研究，后续还需要开展多中心研究，深入研究lncRNACCHE1诊断肺腺癌的临界值。Kaplan-Meier生存分析结果表明，LncRNACCHE1高表达患者术后3年PFS生存率和OS生存率明显低于LncRNACCHE1低表达者。Cox模型分析结果显示，LncRNACCHE1高表达也是肺腺癌患者预后不良的独立影响因素。上述结果表明，LncRNACCHE1可能作为判断肺腺癌患者预后的潜在分子标志物。

由于肺癌的恶性程度高，病情进展迅速，肺癌的早期诊断仍存在较大的困难。临床数据显示，约有40%的患者确诊时，已发生远处转移，而错过最佳治疗时机[13]。本研究初步揭示了LncRNACCHE1在肺腺癌中呈高表达，且与患者临床病理特征及预后关系密切，但其具体的生物学功能和相应的分子机制还需要深入分析。本研究后期将以LncRNACCHE1为靶点，尝试探索潜在的治疗途径，为肺腺癌的治疗提供新方向。

参考文献：

[1]孙可欣,郑荣寿,曾红梅,等.2014年中国肺癌发病和死亡分析[J].中华肿瘤杂志,2018,40(11):805~811.

[5]杨小林.非小细胞肺癌患者埃兹蛋白､血管抑制蛋白1的表达与微血管密度的相关性研究[J].标记免疫分析与临床,2019,26(2):259~263.

[9]单文莉,周围,孔丹,等.肺腺癌CT征象与病理组织学亚型及分化程度的对照研究[J].临床放射学杂志,2019,38(12):2312~2316.

[13]陈晓,魏立,李基伟,等.异源肺癌细胞微小RNA-21差异性表达促进肺癌转移[J].中华实验外科杂志,2019,36(7):1229~1231.

唐荣彬,王刚.lncRNACCHE1与肺腺癌临床特征及预后的关系研究[J].河北医学,2020,26(10):1715-1720.