分子标志物在高级别胶质瘤患者预后评估中的价值

2021-11-09 72 上传者：管理员

摘要：目的:探讨分子标志物在高级别胶质瘤患者预后评估中的价值。方法:收集2010年09月至2015年07月之间经我院收治的高级别胶质瘤患者31例,免疫组织化学染色检测患者肿瘤组织中Ki-67、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、表皮生长因子受体(EGFR)、p53和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;电话及门诊随访患者生存状况,分析上述分子标志物在高级别胶质瘤患者预后评估中的价值。结果:Ki-67和MGMT高表达患者的PFS明显低于低表达患者(P<0.05),但MMP-9、EGFR和p53表达水平与PFS间未见明显相关性(P> 0.05)。多因素分析发现Ki-67是影响PFS的独立预后因素(RR=5.19,P<0.05)。结论:Ki-67是影响高级别胶质瘤患者PFS的独立危险因素,在预后评估中可能具有潜在的应用价值。

关键词：
分子标志物
手术全切
无进展生存期
颅内原发性肿瘤
高级别胶质瘤
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胶质瘤是一种恶性程度高、具有浸润性的颅内原发性肿瘤，手术全切困难且术后易复发[1],风险分层对于患者预后评估至关重要[2]。目前将分子病理指标进行对比分析，评价其在高级别脑胶质瘤预后中的研究相对有限。因此，本研究将分别探讨Ki-67、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、p53和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达水平与高级别胶质瘤患者预后间的关系。

1、资料与方法

1.1一般资料

收集2010年09月至2015年07月间经手术及病理证实的高级别胶质瘤患者31例(男21例，女10例),平均年龄(55.4±15.76)岁。采取的术式均是全切，出院后病人均行普通放疗。

1.2免疫组化

患者肿瘤组织石蜡切片经脱蜡、抗原修复、3%过氧化氢封闭后，相应一抗(Ki-67、MMP-9、EGFR、突变型p53、MGMT)4℃抗过夜孵育后，采用MaxVisionTM试剂室温下孵育10～15分钟。经PBS冲洗后，配制DAB进行显色并适时中止[3]。苏木素对细胞核进行染色后，中性树胶封片。判读标准：在阳性细胞最密集区域计数1 000个肿瘤细胞，阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比即为标记指数(labelling index, LI),据其平均值得出各指标表达程度：+++(LI>60%)、++(30%≤LI≤60%)、+-(0≤LI<30%)。

1.3随访

结合电话与定期门诊随访，术后1年内每3个月做1次头部增强检查，1年后每6个月检查1次，若出现新的临床症状或体征及时行头部检查，以头部影像发现有肿瘤复发定为病情进展，时间从手术日期开始计算，随访截止日期至2015年07月30日，主要监测无进展生存时间(progression-free survival, PFS)。

1.4统计学方法

应用SPSS 19.0软件分析，P<0.05为差异有统计学意义。以患者PFS作为事件的观察终点。单因素使用Kaplan-Meier法计算生存率并采用对数秩(log-rank)检验；Cox比例风险模型用于多因素分析，采用逐步回归分析探索影响高级别胶质瘤患者预后的独立因素。

2、结果

2.1患者免疫组化指标表达情况与PFS间关系的单因素分析

免疫组化指标表达情况与PFS间关系的单因素Kaplan-Meier法分析结果见表1。在5种免疫组化指标中，Ki-67和MGMT表达差异与高级别胶质瘤患者PFS之间具有统计学差异(P<0.05), MMP-9、p53和EGFR表达差异与患者PFS之间无统计学差异(P>0.05)。其中，与Ki-67表达水平>+的患者PFS相比[(8.1±1.2)月],Ki-67表达水平≤+的患者具有更长的PFS[(12.7±1.8)月](P=0.022,图1);与MGMT表达水平>+的患者PFS相比[(7.9±1.2)月],MGMT表达水平≤+的患者具有更长的PFS[(13.0±1.7)月](P=0.013,图2)。

表1患者免疫组化指标表达情况与PFS间关系的单因素分析

图1 Ki-67表达与患者PFS的关系

Fig.1 The relationship between Ki-67 and PFS

图2 MGMT表达与患者PFS的关系

Fig.2 The relationship between MGMT and PFS

2.2患者免疫组化指标表达情况与PFS间关系的多因素分析

多因素Cox比例风险模型分析中，Ki-67(RR=5.19,95%CI:1.087～24.773;P=0.039)是影响PFS的独立变量。相对危险度(RR)>1时为危险因素，RR<1时为保护因素，Ki-67为危险因素。

3、讨论

分子病理学通过免疫组化标志物、染色体标志物、基因标志物，在基因与蛋白质水平上对肿瘤细胞的受体、生长因子、抑癌基因、癌基因变化进行检测，依据这些指标的变化判断某一具体肿瘤细胞的生物学行为，对其预后作出判断，设计最佳治疗方案。胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，组织学分级是评价患者预后的主要指标之一，病理级别越高预后越差[4]。随着精准医学发展，早期识别分子遗传学改变可以有助于疾病的诊断、预后分层以及个体化治疗[5]。

本研究通过免疫组织化学法检测了Ki-67、MGMT、EGFR、p53、MMP-9在高级别胶质瘤患者中的表达，评估上述分子标志物表达水平与患者预后间的相关性，发现Ki-67和MGMT表达水平与高级别胶质瘤患者PFS有关，MMP-9、EGFR及p53与PFS无关。多因素Cox比例风险模型分析发现，Ki-67是影响PFS的独立预后因素。Ki-67是一种用于检测肿瘤细胞增殖的标志物[6],在低级别胶质瘤中，Ki-67的表达程度与患者预后明显相关[7]。HSU等人[8]研究发现，当调整为相同的随访时间时，Ki-67指数预测5年生存率的能力优于组织病理分级。早期研究认为Ki-67高表达程度与胶质瘤患者不良预后相关[9],近期研究发现，当Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)以及磁共振三项联合检测时，不仅能准确判断肿瘤恶性程度，还能更好地进行预后评估[9]。本研究中，我们将Ki-67和其他分子标记物表达水平进行对比，同样发现Ki-67与患者PFS有显著相关性，与之前结果相类似。

MGMT作为参与胶质瘤烷化类化疗药物耐药的关键基因，已被证实与胶质瘤患者预后有关[10,11],其启动子甲基化已经被认为是胶质瘤预后评估的一个潜在生物标志物[12,13,14]。尽管本研究中，单因素分析发现MGMT表达水平与患者PFS相关，但Cox多因素分析发现MGMT并不是评价高级别胶质瘤患者预后的独立因素，Ki-67才是是影响高级别胶质瘤患者预后的独立危险因素。

由于胶质瘤具有异质性，术中切除或穿刺活检所得的组织样本不能很准确地评价肿瘤级别，故本研究存在一些局限性。首先，样本量较少、随访时间有限、无法进行分层研究。其次，以组织标本中Ki-67进行高级别胶质瘤患者预后评估，不能排除肿瘤异质性产生的影响。最后，多模式MR图像引导下的胶质瘤活检已经表现出较好的实用价值，可提高胶质瘤诊断准确率，特别是与分子标志物联合检测可能会在胶质瘤的诊治过程中起到重要作用，但结果尚需进一步验证[15]。总之，在今后的研究中，我们应充分结合世界卫生组织(WHO)肿瘤分类中基因表达变化对肿瘤的影响综合分析影响高级别胶质瘤患者预后的危险因素。

参考文献：

[11]魏明豪,谢坚,王磊,等.表观弥散系数在胶质瘤分级中的应用及其与分子标志物的相关性研究[J].北京医学, 2019,41(05):340-343.

文章来源：吴静,陈绪珠,马强,曲冰杰,梁俊福.分子标志物在高级别胶质瘤患者预后评估中的价值[J].现代肿瘤医学,2021,29(24):4309-4311.