首页 >
论文范文 >
医药卫生论文 >
内科论文 >
白血病论文 >
CAS在急性髓系白血病患者中的表达及临床意义
摘要：目的:探讨急性髓系白血病（AML）中的细胞凋亡易感蛋白（CAS）的表达及其与临床特征的相关性。方法:采用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测54例AML患者和24例非血液系统恶性疾病患者骨髓组织中CAS的表达，比较AML组和对照组CAS表达水平，并分析其在AML中的表达与性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白及血小板计数、骨髓原始细胞比例、ki-67指数、细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层、髓外浸润等临床特征的关系。结果:蛋白免疫印迹法结果显示，AML患者骨髓活检组织中的CAS蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）。免疫组化法检测结果显示，AML组和对照组CAS均主要定位于胞浆。54例AML患者中，CAS高表达者14例（25.9%），对照组24例患者中CAS全部低表达，AML组中CAS高表达率明显高于对照组（P<0.05）。AML患者中CAS高表达组和CAS低表达组之间，预后危险度分层及首次化疗缓解率有差异，且差异有统计学意义（P<0.05）。CAS高表达组的高危患者和首次化疗后未缓解的患者所占比例明显高于CAS低表达组（57.1%vs27.5%,30.8%vs7.9%），低危患者和首次化疗后完全缓解的患者所占比例明显低于CAS低表达组（14.3%vs37.5%,53.8%vs84.2%）。AML患者中，CAS高表达组患者骨髓组织中Ki-67指数高于CAS低表达组（60%vs50%）（P<0.05）。结论:CAS在AML和非血液系统恶性疾病中均定位于细胞浆，且在AML中表达量增加，并与患者细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层、首次化疗后缓解率及ki-67指数相关，提示CAS可能参与了AML的发生、发展。
加入收藏
急性髓系白血病（AML）是一种异质性血液系统恶性肿瘤，是成人最常见的急性白血病，其特点是骨髓原始幼稚细胞克隆性增殖并抑制正常造血[1,2]。尽管AML对化疗有很高的应答率，但许多患者仍由于对化疗方案耐药而复发，65岁以上的患者死亡率较高，并且近年来死亡率仍未明显下降[3,4,5]。因此，迫切需要找到更多新的生物标志物，以识别高危患者并成为治疗靶点。近年来，细胞凋亡易感蛋白（CAS）在多种实体肿瘤中触发肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭甚至转移的作用得到越来越多的关注，被证实与癌症进展有关[6,7,8,9]。然而，其在血液系统恶性肿瘤中的作用尚缺乏报道。本研究应用蛋白印迹法和免疫组织化学技术检测54例AML患者和24例非血液系统恶性疾病患者骨髓组织CAS的表达水平，并探讨CAS的表达与患者临床特征的关系。
1、资料与方法
1.1 入组患者
纳入2018年6月-2019年9月在山西医科大学第二医院初次确诊AML的患者骨髓组织标本54例，患者中位年龄55.5(12-78）岁，男性29例，女性25例，其中M11例，M220例，M36例，M413例，M514例。所有患者均通过细胞形态学、免疫学、遗传学、分子生物学分析确诊为AML，分子生物学及细胞遗传学危险度分层、髓外浸润表现参照《成人急性髓系白血病（非急性早幼粒细胞白血病）中国诊疗指南（2017年版）》[10]。通过查阅病历获得患者一般临床资料，包括性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例、ki-67指数、细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层、髓外浸润及首次化疗后缓解情况。另外选取同期入院的非血液系统恶性疾病患者骨髓组织标本24例。标本一部分用液氮冷冻保存，一部分制成石蜡切片保存。本研究获患者知情同意，并经医院伦理委员会批准。
1.2 CAS的免疫印迹法检测
配制分离胶后，将测定浓度并进行变性了的蛋白质加入浓缩胶中，行SDS-PAGE凝胶电泳，电泳结束后进行湿法转膜，转膜后的PVDF膜使用5%脱脂奶粉在室温条件下进行封闭，然后加入CAS一抗（1︰1000,Bioss公司）于4℃条件下孵育过夜，1×TBST洗膜3次，每次5min，加入用1%脱脂奶粉配制的1︰5000稀释的二抗并常温孵育1h，再用1×TBST洗膜3次，加入ECL显色液，于化学发光显色系统曝光拍照。
1.3 CAS的免疫组织化学方法检测
按试剂说明设立阳性对照和空白对照。石蜡切片置于60℃烘箱中2h，置于二甲苯中脱蜡，脱蜡后将玻片依次经过梯度酒精水化，用PBS冲洗3次，每次5min，在3%双氧水中放置20min消化内源性过氧化物酶，在枸橼酸缓冲液中煮沸修复抗原，晾至室温，用PBS冲洗。用正常山羊血清封闭（37℃20min,Bioss公司），吸取多余液体，每张切片滴加70μl稀释的CAS一抗（1︰150,Bioss公司），置于湿盒中，4℃孵育过夜。取出湿盒，室温复温10min,PBS冲洗，吸去组织周围多余PBS，每张切片加70μl相应种属二抗（北京中杉金桥），37℃孵育40min,PBS冲洗，吸去组织周围多余PBS，加入DAB显色液（北京中杉金桥），显微镜下观察结果，适时终止。将苏木素滴加在切片组织上，3min后用自来水冲洗。在1%盐酸酒精溶液中分化15s，自来水冲洗切片。切片经梯度酒精脱水，二甲苯透明，后用中性树胶封片，晾干，显微镜下观察。
1.4 免疫组织化学方法结果的判定
高倍镜下(×400)随机选10个视野，每个视野计数100个细胞。CAS以胞浆出现棕色颗粒为阳性，阳性细胞数<5%为0分，5%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，>75%为4分；阳性强度分为浅棕色1分，棕黄色2分，深褐色3分，两者相乘得出总分值（0-12），分值≥6为CAS高表达，<6为CAS低表达[11]。
1.5 统计学分析
采用SPSS21.0软件进行数据分析，两独立样本间计数资料比较用χ2检验或Fisher's确切概率法；等级资料比较用秩和检验；两独立样本的定量资料若符合正态分布，以均数±标准差（x±SD）表示，采用t检验；不符合正态分布以中位数（P25-P75）表示，采用非参数检验。P<0.05为差异有统计学意义。采用ImageJ分析Westernblot条带灰度。
2、结果
2.1 CAS在AML中的表达
分别提取AML和对照组骨髓活检组织中的CAS蛋白，采用免疫印迹的方法检测发现，AML患者骨髓活检组织中的CAS蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）（图1-2）；采用免疫组化方法检测发现，AML组和对照组CAS均主要定位于胞浆，散在或成灶性分布（图3）。54例AML患者中CAS高表达者14例，高表达率为25.9%，其中M11例，M27例，M31例，M42例，M53例。对照组中CAS全部低表达（100%),AML组CAS高表达率明显高于对照组，两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。
2.2 CAS的表达对AML患者临床特征的影响
在AML中，CAS表达与患者年龄、性别、髓外浸润无显著相关性（P>0.05）。细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层、首次化疗缓解率在CAS低表达组和CAS高表达组两组间差异有统计学意义（P<0.05）。CAS高表达组预后危险度分层中，高危患者比例明显高于CAS低表达组，低危患者比例明显低于CAS低表达组。有3例患者确诊后未化疗自动出院，其余51例患者首次化疗后39例完全缓解，5例部分缓解，7例未缓解。CAS高表达组中，首次化疗完全缓解的患者所占比例明显低于CAS低表达组，未缓解的患者所占比例明显高于CAS低表达组（表1，图4-5）。
2.3 CAS的表达与AML患者临床指标的关系
在AML患者中CAS高表达组与CAS低表达组患者外周血白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例差异无统计学意义（P>0.05），而CAS高表达组患者骨髓组织中Ki-67指数高于CAS低表达组，比较差异有统计学意义（P<0.05）（表2，图6）。
3、讨论
CAS又称染色体分离1-样蛋白（CSE1L）、Exportin-2，是酵母染色体分离蛋白CSE1的人类同源物，编码971个氨基酸组成的蛋白质，编码基因位于染色体20q13，这一区域在肿瘤中经常被扩增，并且含有几个可能的癌基因[12,13,14]。CAS在细胞应激反应中合成，定位于细胞质和细胞核，是一种多功能蛋白质，参与细胞凋亡、Importin-α的核质重组，染色体安装，微管相关的细胞增殖，癌细胞的迁移和侵袭，还参与了几种增殖激活蛋白、转录因子、癌基因和肿瘤抑制基因产物的核运输，如p53[8,14,15,16,17]。目前已证明CAS在多种癌症中高表达，并与癌症进展密切相关。
在多数癌症中，CAS发挥着抗肿瘤细胞凋亡、促进侵袭的作用，并与肿瘤分期分级和不良预后有关。有研究发现，CAS除了参与p53凋亡的调控，还参与了肿瘤坏死因子相关配体（TRAIL）诱导的细胞凋亡[18]。CAS可通过转录抑制促凋亡基因RASSF来保护卵巢癌细胞免于死亡[19]。在乳腺癌MCF-7细胞中，CAS通过上调与细胞增殖、凋亡有关的CYP24A1的表达，下调细胞周期信号蛋白CyclinD1表达，在细胞周期中发挥重要作用[6]。有文献报道，CAS与MMP-2共存于细胞膜附近的细胞质区域和侵袭足，CAS过表达促进了MMP-2的分泌，增强了癌细胞的侵袭能力[20]。
CAS也可通过干扰微泡的产生，从而调节黑色素瘤细胞和结直肠癌细胞中MMP-9和MMP-2的表达来影响肿瘤细胞的侵袭性[7,14]。在结肠腺癌中，细胞质CAS与肿瘤分期、肿瘤浸润深度和淋巴结转移相关[21]。Jiang等[9]研究发现，CAS的胞浆定位似乎预示着Barrett食管的恶性转化，并可能作为Barrett食管患者治疗的预后标志物。此外，胞浆CAS高表达还与肝细胞癌的大血管浸润、喉癌颈腋窝淋巴结转移相关[8,22]。虽然近年来关于CAS的研究日益增多，但大多是实体瘤的体外研究或实验动物模型，其在血液系统恶性肿瘤中的临床研究尚缺乏。
本研究结果显示，AML患者骨髓活检组织中的CAS蛋白表达显著高于对照组，这与先前研究发现的CAS在多种肿瘤，如结直肠癌、黑色素瘤和口腔癌等中表达升高的结果一致[14,21,23]，提示CAS的升高在AML中起重要作用。进一步研究发现，CAS在AML和非血液系统恶性疾病患者骨髓组织中定位于细胞浆，并发现54例AML中CAS高表达率为25.9%，低表达率为74.1%，而24例对照组中CAS全部低表达，并且在AML中，CAS表达与细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层有关，CAS高表达组高危患者所占比例明显高于CAS低表达组，而低危患者所占比例明显低于CAS低表达组，这表明，CAS可能参与AML的发生、发展。此前有研究表明，CAS参与了几种增殖激活蛋白、转录因子、癌基因和肿瘤抑制基因产物的核运输，如p53[17]，推测CAS可能通过调控相关癌基因参与AML的进展。本研究观察到CAS高表达组骨髓组织ki-67指数，即核分裂像数高于CAS低表达组，证实了CAS在骨髓细胞增生中起重要作用。
CAS已被发现在多种肿瘤中促进癌细胞的迁移、浸润，如结直肠癌、卵巢癌、喉癌等[8,19,21]。然而，本研究尚未发现CAS与AML髓外浸润相关，可能原因一是本研究的AML患者病例数较少，后期需扩大病例数进一步验证；二是也有一些研究认为，CAS在某些肿瘤中对肿瘤细胞的迁移与侵袭能力并无影响，如睾丸生殖细胞、骨肉瘤等[24,25]，因此，可能存在CAS对不同部位肿瘤作用的异质性，还需继续深入研究。此外，本研究结果显示，CAS高表达组首次化疗后完全缓解的患者所占比例显著低于CAS低表达组，表明CAS高表达可能预示AML预后不良。曾有研究发现，抗磷酸化CAS抗体可检测抗肿瘤药物索拉非尼作用的肿瘤细胞中CAS水平降低[26]，有助于检测靶向药的治疗反应，但在白血病中尚缺乏相关研究。CAS与AML预后危险度分层和首次化疗缓解率有关，有可能成为评估AML预后的重要因子。
综上所述，本研究结果显示，CAS在AML中的表达量和高表达率高于非血液系统恶性肿瘤患者，且在AML中与ki-67指数、细胞遗传学和分子生物学预后危险度分层和首次化疗缓解率相关，提示CAS参与了AML的发生、发展，可能成为评估AML预后的重要因子，有望为疾病的防治提供一种新思路。
参考文献:
[10]魏辉.成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)中国诊疗指南(2017年版)[J].中华血波学杂志2017,38()-177-182.
[1]臧红,赵景民,纪冬,等.CAS基因在原发性肝癌组织中的表达及其与HBV感染的关系[J].中华实验和临床病毒学杂志,2012,26(4):285-287.
[24]刘见妮,王鑫,张涵,等.细胞凋亡易感蛋白在睾丸癌中的表达及其对NT.2细胞增殖的影响[J].中国生物制品学杂志,2019,32(11):1234-1238.
文章来源：郭浩然,王鑫,张涵,关坤萍.CAS在急性髓系白血病患者中的表达及临床意义[J].中国实验血液学杂志,2022,30(03):744-749.
分享：
急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia, AML-M5)属于急性髓细胞白血病中的M5型，以鼻、牙龈与皮肤出血为主要临床特征，具有缓解率低、易复发等特点[1,2]。目前，该病发病机制较为复杂，临床通常认为可能与遗传、化学等因素联系紧密[3,4]。针对AML-M5患者，临床多以化疗方案为主，且近些年伴随化疗方案的不断改进，使得AML-M5的临床疗效得到明显提升。
2024-04-12
急性髓系白血病(AML)是髓系造血/干祖细胞恶性克隆性增殖性疾病,儿童AML占儿童急性白血病的20%。随着多药联合化疗方案及异基因造血干细胞移植技术不断改进、新型靶向药物的不断研发，儿童AML总体诱导缓解率约为85%-95%,5年总生存(OS)率可达65%-75%,但仍低于儿童急性淋巴细胞白血病。
2024-04-07
急性髓系白血病是一种异质性恶性疾病，尽管诱导治疗、大剂量化疗效果得到提升，但患者的总生存率仅30%-40%，复发率仍较高[1]。因此，仍然需要探究更优越的治疗方案。沙利度胺可抑制血管生成，单药治疗急性髓系白血病可改善输血依赖，但有效率不足30%[2]。姜黄素是草本植物的产物，具有抗癌、抗氧化、抗炎作用，既往研究表明其可抑制细胞浸润、逆转耐药，还可上调凋亡蛋白表达，诱导急性髓系白血病KG-1细胞凋亡[3]。
2024-04-03
微小RNA(miR)是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码单链小RNA,在机体中发挥着重要作用，既可以调节mRNA的翻译和稳定性，也参与控制与细胞周期相关的基因，如细胞增殖或凋亡[1]。在多种肿瘤发现miR上调或低表达展现出miR作为肿瘤抑制因子或致癌因子发挥作用。
2024-04-03
急性髓系白血病(AML)是髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病，是成人最常见的白血病类型[1]。据美国国家癌症研究所的数据显示，2023年美国预计将有20 380例新增AML患者，2013-2019年AML患者的5年生存率仅为31.7%。随着对该疾病的深入研究，目前的治疗手段在阿糖胞苷联合柔红霉素的“7+3”传统方案基础上，辅之以各类分子靶向药物、造血干细胞移植(allo-HSCT)等新技术，使该疾病的治疗取得了较为满意的结果。
2024-04-03
急性髓系白血病(AML)是一种髓系恶性疾病，其特征是髓系造血干祖细胞不受控制的克隆增殖[1],AML在基因水平上具有高度异质性，且存在多种与AML预后相关的异常基因表达及突变。近年来，随着人们对AML的突变和表观遗传学基因的深入研究，为精准医学的生物学靶点奠定了基础，其中值得关注的发现是识别异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因中的突变热点，IDH基因的体细胞突变在胶质瘤、结肠癌、软骨肉瘤等实体瘤和血液系统恶性肿瘤中都有描述。
2024-04-03
早幼粒细胞白血病是髓系白血病的一种类型，其主要特征是15号和17号染色体之间的特征性平衡染色体易位，导致PML与RARA基因融合，产生PML-RARA融合蛋白，PML-RARA融合蛋白通过调控下游基因使白血病细胞分化阻滞在早幼粒阶段，同时抑制白血病细胞的凋亡[1]。自噬是控制各种生理过程的主要细胞分解代谢途径之一，包括参与自我更新、分化和死亡的过程。
2024-04-03
急性髓系白血病（AML）是一组造血系统的髓系原始细胞恶性克隆性疾病，约占成人急性白血病的80%，具有高度异质性，不同患者在疾病病程及预后方面具有广泛的差异[1]。随着二代测序（nextgeneration sequencing,NGS）技术的蓬勃发展，AXSL1、RUNX1、TP53等许多基因突变为疾病的精准分层、预后评估以及治疗指导提供了有效的参考[2,3]。
2024-04-02
急性髓系白血病(AML)是一组具有高度异质性的克隆性疾病。尽管大多数AML患者在诱导治疗后达到缓解，然而高频的复发使患者长期生存的可能性降低。因此，预测复发风险、评估预后危险度分层对于疾病的个体化治疗至关重要。虽然基于MICM的分型能够对大多数患者进行危险度评价并指导个体化的治疗选择，但不能完全预测患者的长期生存。作为白血病缓解深度重要指标的微小残留病(measurable residual disease, MRD)与基于MICM的风险分层结合可能会改善AML的预后[1]。
2024-04-02
急性髓系白血病(AML)是造血系统最常见的恶性肿瘤，其特点是高度异质的造血干细胞和前体细胞的恶性克隆增殖，约占成人急性白血病的70%[1,2]。虽然随着临床诊断和治疗方法的不断改进，AML的预后已得到明显改善，但仍有约70%的患者确诊后生存不超过5年[3]。因此，寻找与AML的发生、发展及预后相关的生物标志物对AML患者的治疗具有重要意义。
2024-04-02
人气：18212
人气：16726
人气：14118
人气：14018
人气：13199
我要评论
期刊名称：白血病•淋巴瘤
期刊人气：1420
主管单位：国家卫生健康委员会
主办单位：中华医学会,山西省肿瘤研究所,陕西省肿瘤医院
出版地方：山西
专业分类：医学
国际刊号：1009-9921
国内刊号：11-5356/R
邮发代号：22-107
创刊时间：1992年
发行周期：月刊
期刊开本：大16开
见刊时间：7-9个月
影响因子：1.474
影响因子：2.876
影响因子：0.899
影响因子：0.000
影响因子：2.153
学术期刊咨询、科普杂志阅读、专利申请方案、课题研究设计、专著挂名咨询、论文下载、文献查询、原创文章检测、SCI实验设计方案等多项服务。
服务热线
您的论文已提交，我们会尽快联系您，请耐心等待！
你的密码已发送到您的邮箱，请查看！
2022-06-02
92
上传者：管理员
