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Oct4与EGFR在右半结肠癌组织中表达的相关性及临床价值

2021-12-07 119 上传者：管理员

摘要：目的:探讨Oct4与EGFR在右半结肠癌组织中表达的相关性及临床价值。方法:应用免疫组织化学法检测120例右半结肠癌组织中Oct4与EGFR的表达,并与病理参数进行相关性分析;结合GEPIA数据库结果确认两者相关性。结果:免疫组化染色结果显示,Oct4表达与组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关(P<0.05),EGFR与肿瘤直径大小、组织学分级以及TNM分期呈正相关(P<0.01)。根据免疫组化评分结果可见,Oct4阳性表达中,EGFR阳性表达率为50.0%(26/52),Oct4阴性表达中,EGFR阳性表达率仅为29.41%(20/68),结合GEPIA数据库分析确认Oct4与EGFR表达呈正相关。另外,Oct4与EGFR双阳性者26例,与肿瘤直径大小、组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关(P<0.05)。结论:Oct4和EGFR在右半结肠癌组织中的表达呈正相关,两者联合检测能够弥补临床病理学诊断的缺陷,为探索右半结肠癌靶向治疗提供新的理论依据。

关键词：
EGFR
Oct4
临床价值
免疫组织化学法
右半结肠癌
相关性
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作为全球最常见癌症之一的肠癌，已经受到整个公共卫生系统的密切关注[1,2]。前期研究发现，右半结肠癌(RCC)预后明显差于左半结肠癌(LCC)[3]。发掘新的肿瘤标志物对右半结肠癌早期筛查、诊疗及靶向治疗有着重要意义。八聚体结合转录因子4(Oct4)是胚胎干细胞维持自我更新及分化的重要转录因子[4]。前期研究发现，在右半结肠癌患者中Oct4可作为有效的预后指标[3]。表皮生长因子受体(EGFR)是目前研究较广并已应用到临床的靶向基因之一[5]。有文献表明，Oct4在肺癌细胞对吉非替尼耐药性方面起到重要作用，而吉非替尼正是EGFR的靶向药物[6]。然而，对于Oct4与EGFR两者在右半结肠癌中作用的关系鲜有报道。本研究旨在通过数据库分析Oct4与EGFR的相关性，并利用免疫组织化学法确认两者在右半结肠癌中表达上的相关性，分析两者在右半结肠癌中的临床价值。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年01月至2019年06月于我院普外科行右半结肠癌切除术的120例标本，其中男性54例，女性66例，平均年龄为(58.17±16.03)岁。所有患者术前均未接受任何放化疗，并且术后病理结果均经两名以上病理医师确认。所有患者签署知情同意书，并具有完整的临床病例资料。

1.2 主要试剂

小鼠抗人GAPDH单克隆抗体、BCA蛋白测定试剂盒、上样缓冲液、曝光液及裂解液等购自碧云天生物技术研究所；兔抗人Oct4和兔抗人EGFR多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；SPRabbit&MouseHRPKit购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.3 免疫组织化学法

本实验采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)检测，兔抗人Oct4和兔抗人EGFR多克隆抗体稀释度为1∶100(一抗工作液)。具体步骤：①切片脱蜡、水化、抗原修复；②封闭、淋洗；③滴加适量一抗工作液孵育；④滴加适量生物素标记羊抗兔/鼠二抗工作液，室温孵育10分钟后，滴加HRP标记的链霉亲和素，继续孵育10分钟，PBS充分淋洗；⑤DAB显色，镜下观察。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。本实验结果判定：先按染色强度记分：染色强度分级评分：0级，无着色；1级，弱染色；2级，中等染色；3级，强染色。再利用ImageJ软件计算阳性细胞所占百分比：1%～100%=1～100分。染色强度评分和阳性细胞计数评分相乘结果为免疫染色评分分数(immunoreactivescore,IRS),以平均数为截断值，大于平均数为阳性。

1.4 数据库应用及统计学方法

应用GEPIA数据库分析Oct4与EGFR相关性。组内变量采用配对χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。所有结果分析均采用SPSS20.0和Graphpad6.0软件进行统计学分析。

2、结果

2.1 Oct4及EGFR在右半结肠癌组织中的表达

免疫组化染色结果可见Oct4主要表达在胞核，平均IRS为(85.00±56.40),而EGFR表达在胞浆及胞膜，平均IRS为(81.95±60.23)(图1)。

2.2 Oct4与EGFR表达与右半结肠癌临床病理参数的关系

根据IRS结果，定义Oct4的IRS>85为阳性，EGFR的IRS>82为阳性，故Oct4阳性者52例，EGFR阳性者46例。癌组织中Oct4表达与组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关(P<0.05),而与年龄、性别以及肿瘤大小无关(P>0.05);EGFR与肿瘤直径大小、组织学分级以及TNM分期呈正相关(P<0.01),而与年龄、性别及淋巴结转移无关(P>0.05,表1)。

2.3 Oct4与EGFR表达相关性分析

GEPIA数据库分析可见，Oct4与EGFR表达呈正相关(图2)。根据免疫组化评分结果可见，Oct4阳性表达中，EGFR阳性表达率为50.0%(26/52),Oct4阴性表达中，EGFR阳性表达率仅为29.41%(20/68),数据比较具有明显的差异性(P<0.05),具有统计学意义，提示两者之间呈正相关(表2,图3)。

2.4 Oct4与EGFR共表达与右半结肠癌临床病理参数的关系

Oct4与EGFR双阳性者26例，与肿瘤直径大小、组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关(P<0.05),而与年龄及性别无关(P>0.05,表3)。

3、讨论

结肠癌是指肠黏膜上皮组织因自身遗传、外界环境等因素而发生的一种恶性病变，根据解剖主要分为左半和右半结肠癌[7]。前期研究发现，右半结肠癌预后明显差于左半结肠癌[3]。这可能与右半结肠癌患者发现较晚，常伴有贫血、恶病质等情况，严重影响预后[8]。因此，挖掘新的有效的肿瘤标志物的开发与临床应用对右半结肠癌提高肠癌的存活率有着重要意义。

Oct4基因被认为是维持肿瘤干细胞样转录因子，是诱导恶变的关键[9]。前期研究发现，由于左、右半结肠癌组织起源不同，Oct4在左、右半结肠癌中起着明显不同的作用，其在右半结肠癌患者中有预后意义，而在左半结肠癌中意义不大[10]。本研究在扩大样本量后发现，Oct4与右半结肠癌组织学分级、淋巴结转移情况以及TNM分期等密切相关，因此，Oct4或将成为一种新型的肿瘤标志物。

EGFR是目前研究较广的靶向基因，然而，随着临床应用的推广，其耐药现象不断涌现[11,12,13]。如何评估和预防耐药的发生，则成了提升疗效的关键。有文献表明，Oct4在肺癌细胞对EGFR的靶向药物吉非替尼耐药性方面起到重要作用[6]。然而，在结肠癌的研究中鲜有报道。因此，本研究通过免疫组化技术，结合GEPIA数据库结果，初步确认Oct4与EGFR在表达上存在正相关。右半结肠癌中，Oct4表达与组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关，EGFR与组织学分级、肿瘤直径大小以及TNM分期呈正相关，与淋巴结转移无相关。两者表达双阳性则与肿瘤直径大小、组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期均呈正相关。因此，Oct4和EGFR的联合检测能够有效弥补仅单纯检测某一种的诊断缺陷。由此推测，Oct4与EGFR的共表达对于右半结肠癌的生长、发展及转移具有重要的推动作用。

本研究结果将为进一步了解、研究结肠癌的发生发展机制提供重要的临床基础，为右半结肠癌的早期诊断、预后评估及靶向治疗提供新思路。未来将通过体内外实验，深入研究Oct4与EGFR相互作用及耐药机制。另外，本研究中仍有不足之处，由于取样时未能保证所有切片为连续切片，在Oct4与EGFR免疫组化染色中，无法通过同一位置对比观察两者的共阳性表达分布与程度情况，故缺乏直观性，也是未来实验研究中需要改进的。前期研究中已经发现，右半结肠癌组织中Oct4表达明显高于癌旁组织，而EGFR已被证明在肠癌组织中高表达，癌旁组织中表达较低，故在本研究中，为了扩大样本量，部分肠癌组织没有对应的对照癌旁组织，因此，我们没有统计Oct4与EGFR在癌组织和对照癌旁组织中的表达差异[14,15,16]。

综上，Oct4和EGFR在右半结肠癌组织中的表达呈正相关，两者联合检测能够弥补临床病理学诊断的缺陷，将为患者提供更优质的综合治疗，具有广阔的临床应用前景，为进一步研究耐药机制提供临床依据，为精准治疗提供新思路。

参考文献:

[1]林锦源,杨建伟,高炜,等.不同原发部位结肠癌根治术后辅助化疗的预后和安全性比较[J].实用肿瘤杂志,2019,34(06)486-491.

[3]程杰,史春桃,陈超波,等.Oct4蛋白在左右半结肠癌中表达的比较及预后分析[J].中国肿瘤临床,2017.44(18)909-914.

[4]张子怡,林泉任,叶春雨,等.结肠癌干细胞标志物和信号通路的研究进展[J].生命科学,2019,31(08)802-811.

[5]王璐,孙小虎,白静慧,等Tem-1和EGFR在结肠癌组织中表达及意义[J].中西医结合心血管病电子杂志,2018,6(31)3-6.

[6]李彬Oct⒁4在非小细胞肺癌中的表达及对吉非替尼耐药性的影响[D].济南:山东大学,2017.

[7]胡雪娥,史丽芸,孟春玲,等.左右半结肠癌生物学特征的差异及常用病理标志的临床意义[J].中国临床研究,2018,31(12)1669-1673.

[8]邓婷,巴一.左右半结肠癌差异性研究进展[J].中国肿瘤临床,2015,42(13)684-68.

[9]李伶俐,朱蓉,陈小燕,等.0ct4与结肠瘤发生发展关系的研究进展[J].世界华人消化杂志,2015.23(33)5325-5332.

文章来源：程杰,史春桃,陈超波,韩玮,王庆华.Oct4与EGFR在右半结肠癌组织中表达的相关性及临床价值[J].现代肿瘤医学,2022,30(01):94-97.