牙、骨等硬组织酸脱钙标本苏木素-伊红(HE)染色前处理方法

2020-05-30 766 上传者：管理员

摘要：目的：研究牙、骨等硬组织酸脱钙标本苏木素-伊红(HE)染色前处理方法,改善硬组织因酸脱钙后pH变化而引起的切片质量欠佳及HE染色组织结构不清的现象。方法：20例含硬组织的口腔病理标本硝酸脱钙后分别进行常规处理、浓氨水浸泡处理、饱和碳酸锂溶液浸泡处理,比较不同处理方法下切片质量及HE染色效果。结果：与常规处理相比,饱和碳酸锂溶液处理标本切片完整,苏木素着色强、胞核染色清晰,胞浆染色鲜艳。结论：酸脱钙标本在脱水包埋之前,经饱和碳酸锂溶液浸泡处理能中和脱钙组织酸性环境,切片质量及HE染色效果较好,适用于口腔病理酸脱钙组织样本的苏木素-伊红染色前处理。

关键词：
口腔
浓氨水
苏木素-伊红染色
酸脱钙标本
饱和碳酸锂溶液
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口腔颌面部由于解剖结构的特殊性,送检标本中通常会含有牙、骨组织、骨肿瘤及钙化病灶,因此,在病理制片前需用脱钙剂去除骨组织中的钙盐再进行切片。目前,使用较多的脱钙剂有以硝酸为主的酸性脱钙剂和以乙二胺四乙酸二钠为代表的螯合脱钙液。EDTA较温和,染色效果较好,但组织渗透性差,脱钙耗时长,影响其应用及推广[1]。因此,人们开始尝试使用方便、耗时短的酸类脱钙剂,其中硝酸是病理工作中使用最广的酸类脱钙剂[2]。硝酸脱钙迅速,得到临床医生认可。但硝酸是强酸,对组织有酸化作用,致使常规苏木素-伊红染色后胞浆着色浓、胞核着色浅,组织细胞显微结构模糊,切片效果差。本研究旨在探究牙、骨等硬组织酸脱钙标本HE染色前处理方法,改善硬组织因酸脱钙后pH变化而引起的切片质量欠佳及HE染色组织结构不清的现象。

1、材料和方法

1.1标本来源

随机选取2015年1—6月四川大学华西口腔医院病理科手术送检的口腔颌面部来源的含硬组织标本20例。

1.2处理方法

10%硝酸脱钙液对硬组织标本进行脱钙,脱钙完成判断标准如下。1)物理方法:用手触及标本柔软、不刺手或大头针无阻力刺入组织标本[3]。2)化学方法:5%氢氧化铵储存液和5%草酸铵储存液配制检测工作液,与脱钙液混合,若无沉淀则脱钙完全。3)射线法:X线看组织内是否仍有钙质[4]。

脱钙后根据以下3种处理方式分组观察。1)常规处理组:酸脱钙后将样本经流水冲洗3h以上。2)浓氨水处理组:酸脱钙后将样本经流水冲洗30min以上,25%浓氨水浸泡1～2h。3)饱和碳酸锂处理组:酸脱钙后将样本经流水冲洗30min以上,饱和碳酸锂溶液(100mL双蒸水+1.5g碳酸锂)浸泡1～2h。

1.3染色切片质量评判

1.3.1切片质量评价

组织切片外观完整,无脱片、卷片,镜下组织结构完整,无掉片缺损,对后续透明封片工作无影响,判定为良好,否则视为欠佳。

1.3.2HE染色评价

细胞形态完好,胞核、胞质着色明显,核仁清晰,胞浆染色鲜艳,判定为良好,否则视为欠佳。

1.3.3制片效果满意度

每一例标本均由3位病理医师评阅,其中2位或3位病理医师满意则记为良好,否则记为欠佳。

1.4统计学方法

采用Prism6.0进行统计学分析,P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

3组HE染色图见图1、2。

图1典型图例1HE染色

图2典型图例2HE染色

与常规处理组(图1上、图2上)相比,饱和碳酸锂处理组(图1中、图2中)在切片质量、HE染色效果方面具有明显优势,具体表现为:HE染色着色强,胞核染色清晰,核仁明显;胞浆染色鲜艳;切片完整,无明显脱片、卷片,对后续透明封片工作无影响,病理医师对切片满意度高(P<0.05)(表1)。浓氨水处理组(图1下、图2下)在切片质量、HE染色效果及病理医师满意度方面优势均不明显,镜下组织结构层次不清晰,HE着色较弱,胞核清晰度欠佳,胞核与胞浆对比度差。

表1脱钙后3种处理方法切片的质量、HE染色效果及医师满意度比较

3、讨论

针对硝酸脱钙造成组织“过酸”这一弊端,本实验在硝酸脱钙后通过浓氨水或饱和碳酸锂溶液处理标本,以期缓解组织“过酸”,提高切片质量。结果显示:与常规方法相比,硝酸脱钙后经浓氨水或饱和碳酸锂溶液处理后组织切片质量及HE染色效果更具有优势,尽管浓氨水与常规处理相比无统计学差异。其可能机制为:氨水和饱和碳酸锂溶液为碱性溶液,可渗透到硝酸脱钙后的组织细胞内并除酸或使酸中和,使组织切片对苏木素嗜染性更强、更稳定,从而提高了苏木素着色能力,减少伊红过着色,胞核与胞质对比度好。另外,氨水和饱和碳酸锂溶液处理经硝酸脱钙的标本,缩短了传统方法硝酸脱钙后流水冲洗标本时间、操作方便,便于实施及推广[5,6]。但浓氨水处理硝酸脱钙后标本,切片质量及HE染色效果均不及饱和碳酸锂溶液,此现象是否与浓氨水作用时间不足或浓氨水作用缓慢等因素有关有待进一步研究。

参考文献：

[1]谢燕,黄晓楠,陈红.Rapidcal.Immuno在骨髓脱钙中的应用[J].诊断病理学杂志,2012,19(5):399.

[2]王珏,朱礼国,张健.影响骨组织切片质量的原因分析[J].江西医学检验,2007,25(2):175.

[3]刘洋,刘亚丽.骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究[J].临床与实验病理学杂志,2005,21(6):764.

[4]范军振,吕亚莉,宋欣,等.骨组织脱钙技术应用进展[J].诊断病理学杂志,2017,24(5):382-383,385.

[5]郏自明,郑艳华,杨文祥.毒理试验中骨髓组织切片制作方法的对比[J].公共卫生与预防医学,2013,24(2):99-100.

[6]张云莎,李薇,汤捷,等.骨髓活检标本的免疫组化染色[J].诊断病理学杂志,2010,17(3):240.

姚莉洪,张美,黄美畅,万梓欣,张伟龙,杨肖,杨名仲,陈宇,汤亚玲.酸脱钙组织苏木素-伊红染色前处理改良方案[J].华西口腔医学杂志,2020,38(03):301-304.