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梅毒螺旋体特异性IgG和IgM抗体在早期梅毒诊断和治疗的应用评价

2020-08-18 328 上传者：管理员

摘要：目的：探讨梅毒螺旋体特异性抗体(Tp47、Tp45、Tp17、Tp15IgG和IgM抗体)与梅毒血清甲苯胺红不加热血清试验滴度之间的相关性,分析治疗前后梅毒特异性抗体谱的特点,为临床诊断早期梅毒以及判定病情和疗效提供实验依据。方法：收集2015—2018年就诊于湖南省人民医院门诊或住院的梅毒早期患者166例为梅毒组,均满足早期梅毒临床表现(外阴有硬下疳或梅毒疹等)、TRUST和TPPA阳性,并以同期健康体检者166例为对照组。采用χ2检验分析四种IgG和IgM抗体与TRUST不同滴度之间的相关性;经苄星青霉素治疗后随诊12个月内进行免疫印记法检测梅毒特异性抗体的患者有41例,同时分析41例梅毒患者治疗前后血清各特异性抗体的表达变化情况。结果：梅毒组治疗前抗Tp47、Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体和抗Tp45、Tp17、Tp15IgM抗体阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)Tp47、Tp45、Tp15IgG抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8),差异有统计学意义(均P<0.05),而Tp17IgG抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)抗Tp45、Tp17IgM抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8),差异有统计学意义(均P<0.05),Tp47和Tp15IgM抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(均P>0.05)。41例患者治疗后的IgMTp45、Tp17抗体阳性表达率显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),四种IgG抗体及Tp47、Tp15IgM抗体阳性表达率治疗前后无统计学意义(均P>0.05)。结论：Tp47、Tp45、Tp17、Tp15四种特异性抗体IgG和IgM联合检测有助于早期梅毒诊断和病情严重程度判断,Tp45、Tp17IgM抗体有助于梅毒疗效的判断。

关键词：
免疫印迹法
早期梅毒
梅毒螺旋体特异性抗体
甲苯胺红不加热血清试验
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梅毒(syphilis)是由梅毒螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病,早期侵犯生殖器和皮肤,晚期侵犯全身各器官,并产生多种多样的症状和体征[1,2]。当人体被Tp感染后,一方面是梅毒螺旋体在破坏组织时释放的抗原性物质(心磷脂)刺激机体产生的有抗体性质的反应素(抗心磷脂抗体),另一方面可激发机体的细胞及体液免疫反应产生特异性抗体。关于血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白M抗体Tp47、Tp45、Tp17、Tp15出现的早晚及治疗后患者携带抗体情况已有相关报道[3,4,5,6]。非特异性抗体检测中,研究指出TRUST定量滴度与患者体内梅毒螺旋体数量呈正相关[7],常用于判断病情及疗效观察,当病情好转或治愈时,滴度便可下降或转阴。但其易受免疫力下降、自身免疫性疾病或肿瘤等多种因素影响，且存在血清固定现象。本研究拟分析早期梅毒患者治疗前后IgG和IgM型Tp47、Tp45、Tp17、Tp15抗体阳性率与血清甲苯胺红不加热血清试验不同滴度之间的相关性，探讨其对梅毒的早期诊断、治疗及预后的评价。

1、资料与方法

1.1资料来源

选取2015—2018年在湖南省人民医院门诊或住院就诊的早期梅毒患者166例为梅毒组(其中单独检测IgG抗体81例,单独检测IgM抗体12例,二者同时检测73例),并以同期健康体检者166例为对照组(其中单独检测IgG抗体67例,单独检测IgM抗体64例,二者同时检测35例)。梅毒组:男75例,女91例;年龄14～84岁,平均(38.24±16.08)岁;对照组:男80例,女86例;年龄15～89岁,平均(38.98±14.59)岁。两组在性别、年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。另追踪收集梅毒组中41例患者经苄星青霉素治疗[8]后随诊12个月内的资料。本研究经本院伦理委员会审核通过。

1.2梅毒组纳入标准

患者有不同程度的硬下疳、皮疹、发热、淋巴结肿大等症状,疑似梅毒感染症状[9,10],符合中华人民共和国卫生行业标准指南共识:新版梅毒诊断标准(WS273-2018)关于梅毒的诊断标准。

1.3梅毒组排除标准

①严重心肝肾功能异常者;②肿瘤患者;③其他传染性疾病患者;④免疫性疾病患者[9]。

1.4仪器与试剂

梅毒螺旋体明胶凝集试验:由富士瑞必欧株式会社生产的梅毒螺旋体抗体检测试剂盒(凝集法)检测。梅毒甲苯胺红不加热血清试验:由上海荣盛公司生产的梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂盒检测。免疫印迹法(Westernblotting,WB):欧蒙公司生产的抗梅毒螺旋体、心磷脂抗体IgM检测试剂盒和梅毒螺旋体、心磷脂IgG抗体检测试剂盒,使用欧蒙公司的全自动免疫印迹仪(型号:EURoBlotMaster)进行自动化检测,均严格按照相关标准操作程序进行检测。

1.5观察指标

①比较治疗前梅毒组及对照组特异性IgG、IgM抗体阳性表达率。②分析早期梅毒患者治疗前TRUST滴度和梅毒螺旋体特异性抗体谱之间的关系。③追踪梅毒组41例患者治疗后12个月内血清IgG和IgM抗体阳性表达情况。

1.6统计学处理

研究所得数据均用SPSS22软件处理,计数资料以百分比表示,采用χ2检验比较组间差异;计量资料经正态检验后用(x±s)表示,用t检验比较组间差异,P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1两组特异性IgG、IgM抗体阳性率比较

梅毒组治疗前Tp47、Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体和抗Tp45、Tp17、Tp15IgM抗体阳性率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。梅毒组内IgG和IgM四种抗体阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体阳性率明显高于Tp47IgG抗体(P<0.05),Tp45、Tp17IgM抗体阳性率明显高于Tp47、Tp15IgM抗体(P<0.05),见表1、表2。

表1治疗前梅毒组和对照组血清特异性IgG抗体阳性率比较(n,%)

表2治疗前梅毒组和对照组血清特异性IgM抗体阳性率比较(n,%)

2.2治疗前梅毒组患者TRUST滴度和IgG、IgM特异性抗体之间的分析

2.2.1治疗前TRUST

高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)Tp47、Tp45、Tp15IgG抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8)(Tp47:χ2=23.309,P=0.000;Tp45:χ2=5.713,P=0.017;Tp15:χ2=6.383,P=0.012);Tp17抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(Tp17:χ2=0.012,P=0.915),见图1。

图1TRUST滴度组中IgG特异性抗体的阳性检出情况(%)

2.2.2治疗前TRUST

高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)抗Tp45、Tp17IgM抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8)(Tp45:χ2=20.732,P=0.000;Tp17:χ2=26.171,P=0.000);Tp47和Tp15抗体在二组中阳性率差异无统计学意义(Tp47:χ2=0.144,P=0.704;Tp15:χ2=3.521,P=0.061),见图2。

图2TRUST滴度组中IgM特异性抗体阳性检出情况(%)

2.3早期梅毒治疗前后IgG、IgM抗体变化情况

41例患者治疗后的Tp45、Tp17IgM抗体阳性表达率显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),四种IgG抗体及Tp47、Tp15IgM抗体阳性表达率治疗前后无统计学意义(P>0.05),见表3。

表3梅毒组治疗前后IgG、IgM抗体阳性率比较(n,%)

3、讨论

人体在感染梅毒螺旋体后,机体对梅毒螺旋体特异性抗原(Tp47、Tp45、Tp17、Tp15)发生体液免疫应答,分别在感染梅毒螺旋体2周和4周后产生IgM和IgG。IgM是临床上常用于梅毒早期感染并活动的血清学标志物之一;IgG是体液免疫应答产生的主要抗体[7]。Tp47、Tp45、Tp17、Tp15是抗原性较强的Tp蛋白,其中Tp47膜脂蛋白在Tp膜蛋白中含量较高,基因全长1302bp,相对分子质量为47kDa,具有特异的强免疫原性,为梅毒的早期诊断指标之一。Tp45是梅毒螺旋体的特异性抗原,与人类肠道螺旋体、疏螺旋体、钩端螺旋体以及其它密螺旋体抗原成份不发生交叉反应,其与Tp15同为活动期梅毒标志性抗体。Tp15在内膜中含量相对较少,其基因全长426bp,相对分子质量为15kDa。有研究显示,Tp15在各期梅毒中阳性检出率较低,其引起的早期体液免疫反应有限。Tp17蛋白抗原在内膜中含量丰富,基因全长468bp,相对分子质量为17kDa,早期便可引起较强的体液免疫反应,在各期梅毒中Tp17的阳性检出率最高[6,11,12,13]。本研究中,梅毒组治疗前Tp47、Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体和Tp45、Tp17、Tp15IgM抗体阳性率均明显高于对照组,且分别比较梅毒组内IgG和IgM四种抗体阳性率,其中Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体阳性率明显高于Tp47IgG抗体,Tp45、Tp17IgM抗体阳性率明显高于Tp47、Tp15IgM抗体,说明早期梅毒患者体内Tp47、Tp45、Tp17、Tp15IgG和IgM抗体阳性表达率高于正常水平,且梅毒组中Tp45、Tp17、Tp15IgG抗体和Tp45、Tp17IgM抗体呈高阳性检出率,这表示在机体感染梅毒后,会引起特异性体液反应,从而导致机体出现梅毒免疫反应增强的现象。

本研究治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)抗Tp47、Tp45、TP15IgG抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8),提示Tp47、Tp45、Tp15IgG抗体与病情严重程度相关,病情越严重,梅毒特异性抗体表达越高。Tp17IgG抗体在各TRUST滴度组中阳性率分布无明显差异,均呈高阳性检出率,这与相关文献报道相符[5,14,15],提示Tp17IgG抗体在感染早期升高,但与病情严重程度无关。

Tp-IgM检测对早期确诊梅毒具有重要的意义,有研究指出[16],梅毒螺旋体特异性IgM抗体可作为梅毒感染并活动的指标之一,其对梅毒血清固定患者判愈更有意义。本研究显示,治疗前TRUST高滴度组(TRUST滴度≥1∶8)抗Tp45、Tp17IgM抗体阳性检出率明显高于TRUST低滴度组(TRUST滴度<1∶8),提示这两个抗体与病情严重程度相关。Tp47和Tp15抗体在二组中阳性率差异无统计学意义,与杨帆等[17]报道一致。可能与Tp45和Tp17具有强免疫原性相关。

Tp蛋白免疫反应是一个持续性的过程,本研究中41例梅毒患者经有效治疗后,IgG各特异性抗体与治疗前无明显变化,表明IgG抗体在治疗后仍然有较高表达。与白顺等[18]观点一致,提示IgG抗体阳性表达不能作为治疗疗效判定指标,仅表示患者已经被Tp感染过。但赵玉磊等[6]报道治疗10年以上的老年梅毒患者IgGTp17和Tp47抗体表达显著下降,考虑赵玉磊等[6]选用的梅毒患者年龄均≥60岁,且跟踪至治疗后10年以上,可能与本研究年龄跨度较大、随访时间较短且数据病例数少等有关。治疗后Tp45和Tp17IgM抗体阳性表达率明显低于治疗前,这与白顺等[18]报道一致,这可能与早期梅毒患者治疗后体内梅毒螺旋体含量降低,且体液免疫反应减弱有关,提示Tp45和Tp17IgM抗体有作为治疗效果的监测潜能。而治疗后早期梅毒患者体内Tp47和Tp15IgM抗体阳性表达率与治疗前相比无明显变化,提示梅毒螺旋体在治疗后可能并未完全清除,也可能与本研究样本量少和检测时间短、抗体还未完全消失有关。

综上所述,Tp47、Tp45、Tp17、Tp15四种特异性抗体IgG和IgM联合检测有助于早期梅毒诊断和病情严重程度判断，Tp45、Tp17IgM抗体有助于梅毒疗效的判断。

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