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临床实验室血浆活化部分凝血活酶时间的参考范围

2020-08-18 335 上传者：管理员

摘要：目的：建立临床实验室血浆活化部分凝血活酶时间(aPTT)的参考范围。方法：选取昆明医科大学第二附属医院，体检中心2018年10月至2018年12月的244份健康汉族成人作为研究对象，用SysmexCS5100全自动血凝分析仪，APTTACTINFSL试剂，检测244例体检健康汉族成年人aPTT，建立参考区间。结果：男女比例1∶1，男性组年龄中位数44，女性组年龄中位数41。男性组均值25.99，标准差1.58，参考范围24.0s-30.4s;女性组均值25.90，标准差1.72，参考范围22.4s-30.4s，不同性别健康汉族成年人APTT均值没有统计学上的差异。aPTT的参考范围为23.2s-30.4s。结论：临床实验室APTTACTINFSL试剂建立的aPTT参考范围为23.2s-30.4s，不同临床实验室应根据自身情况建立合适的参考范围。

关键词：
APTTACTINFSL试剂
临床医学
参考区间
活化部分凝血活酶时间
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对于临床实验室活化部分凝血活酶时间参考范围的建立，不同实验室aPTT的参考范围可因健康人群、技术、方法、仪器及实际操作不同而不同。试剂的更换和升级是厂家为了提升产品品质的最有效方法，APTTACTINFSL试剂与APTTACTIN试剂相比，试剂的磷脂成分发生了变化，然而随着试剂成分发生了变化，往往会导致检验结果也随之改变。相应地，临床实验室需要建立合适的aPTT参考范围。

aPTT是一种通用筛查方法，主要用于内源性凝血途径异常的评价，也用以检测因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ或纤维蛋白原严重异常。aPTT还广泛用于肝素治疗监测，血液凝固时间延长与肝素水平成正比。在口服抗凝剂患者，血循环中因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ水平受抑制导致APTT延长。狼疮抗凝剂等非特异性抑制剂，能使aPTT延长，但此类影响是可变的，通常认为与所采用aPTT试剂性能有关。因此，aPTT是一项重要的临床筛查试验，广泛应用于诊断凝血障碍性疾病、出血、血栓性疾病治疗监测[1]。因此，每个实验室必须建立自身的aPTT参考范围，为临床医生对患者或健康普查者的检验结果做出准确判断，为临床的诊治提供参考依据。

1、材料与方法

1.1研究对象的选择

参照卫生行业标准WS/T405-2012《血细胞分析参考区间》中“A2.2参考个体的选择”[2]列举的条款，通过问卷调查、体格检查、实验室检查、影像检查(如胸部透视)等方式，筛选出2018年10月29日至2018年12月4日在本院体检的健康汉族成年人共244例，男女比为1∶1，年龄范围为18岁～79岁。选入标准:(1)自觉健康;(2)无血液系统疾病(贫血、白血病、血小板异常疾病等);(3)近期无剧烈运动和重体力劳动;(4)无高血压[收缩压≥140mmHg和(或)舒张压≥90mmHg];(5)近期未曾手术或服用药物;(6)近期未曾献血、输血或大量失血;(6)无消瘦(BMI<18.5kg/m2)、营养不良;(7)无酗酒(长期饮酒或2周内大量饮酒)、嗜烟(吸烟量>20/d);(8)无慢性理化损伤(如长期暴露于电离辐射环境)或长期接触化学物质(苯、铅等);(9)既往无心、肝、肾、肺等重要器官性疾病;(10)女性未处于月经期、妊娠或哺乳期，未口服避孕药，或用其它激素替代治疗。

1.2仪器与试剂

使用SysmexCS5100全自动血凝分析仪，APTTACTINFSL试剂。试剂的使用和储存参照试剂说明书。APTTACTINFSL试剂的各性能指标(如准确度、精密度、携带污染等)应评估达标。在测试前，至少使用2个浓度水平(包括正常和异常水平)的质控品，质控在控的情况下，才能开始检测标本。

1.3标本的采集及检测

采集研究对象清晨空腹静脉血(取坐位)，用浓度为109mmol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例要求是1∶9，充分混匀，用脱盖离心机1500g/15min离心，获得乏血小板血浆。排除不合格的标本(采血量不足，肉眼观察出现凝血、溶血、脂血等)。选择仪器的自动进样模式检测研究对象的APTT值，上述所有操作均在室温下2h内完成，整个检测过程须与为病人进行实际常规检测状态一致。

1.4

数据的分组按照性别，分为男性组(122例)和女性组(122例)两组，探讨是否需要建立单独的aPTT参考范围。对于二分类(男性和女性)来讲，男性组和女性组间均值差异的统计学意义应该通过标准差的一般公式(1)进行检测。统计的z数值必须同“危急值”z*相比较。Z*的计算公式(2)。

1.5参考值处理和参考范围的建立

利用直方图评估数据的分布。采用1/3规则剔除实验结果的离群值，保证研究对象的均质性，男性31.9s的最大值并不违反1/3规则的极值[(31.9-31.6)/10.3小于1/3]，女性21.6s的最小值也不违反1/3规则的极值[(21.8-21.6)/10.3小于1/3]。用非参数方法估计参考限的上限和下限。即最低的参考限r1(第2.5个百分位数)作为相应的观测值r=0.025(n+1)，和最高参考限r2(第97.5个百分位数)作为相应的观测值r=0.975(n+1)，获得aPTT95%的参考区间。

2、结果

2.1数据的评估(图1、图2)

244例健康汉族成年人，男122例，女122例，CS5100全自动血凝仪aPTT值检测结果可见，男性组和女性组的aPTT值分布大致呈正态分布，且不存在离群值。

图1男性组aPTT直方图

图2女性组aPTT直方图

2.2244例研究对象有性别差异的aPTT的频数分布(表1)

表中n表示观测的参考值数量，这组参考数据是用来计算95%的参考区间。观测值首先按次序排列好(按大小排序)。用r代表观测值的级别(排列最小值为r=1;最大值为r=n)。当n=122时，r1和r2分别接近3和120。而当n=244时，r1和r2分别接近6和239。使用这些受试参考人群的排序值来估计最高和最低参考限，获得APTT95%参考区间。本实验男性24.0s-30.4s，女性22.4s-30.4s,aPTT的参考范围为23.2s-30.4s。

表1244例研究对象有性别差异的aPTT的频数分布

2.3数据的分组验证(表2)

aPTT男性稍高于女性，但是否需要分组，需进行z检验，以验证aPTT同年龄组的男性和女性之间均值的差异有无统计学意义。统计结果显示:z值为0.21,z*为3.02，即z值<z*，这意味着不需要考虑性别差异而建立两个参考区间。所以，对于实验室SysmexCS5100全自动血凝分析仪ACTINFSLAPTT试剂建立aPTT参考范围来说，可以只提供23.2s-30.4s的单一参考区间。

表2244例健康成人aPTT结果(s)

3、讨论

同一份标本用两种不同的试剂来检测aPTT，所得到的aPTT值有非常显著的差异，说明用不同试剂检测同一份标本不适宜用同一正常参考值来衡量其临床意义。主要是因试剂中所含的主要成分不同，其中激活剂或磷脂不同，对检测结果会有很大的影响[3]。对于aPTT试剂的更换，需要对新试剂进行验证和全面的评估，其中也包括参考范围的建立和验证。第4版《全国临床检验操作规程》(以下简称“规程”)，仅提供了手工法检测的成人凝血项目的参考区间。其中男性(37±3.3)s(31.5～一43.5s);女性(37.5±2.8)s(32～43s)。对于全自动仪器法的参考区间，“规程”也建议因不同品牌仪器及试剂间结果差异较大，需由实验室自行建立。

针对于临床实验室aPTT参考区间的建立，除去上述实验中所用到的非参数法，还可尝试用以下方法[4]。将收集到的参考值用SPSS17.0统计软件分析，Dixon法剔除离群值后，用Kolmogorov-Smimov方法对数据进行正态性检验，符合正态分布的数据以两组间比较用独立样本t检验，看两组间是否有统计学上的差异。

经统计分析得到，男性和女性的数据分布均为正态性分布，符合正态分布的数据以(±s)表示。不同性别的同年龄组的aPTT值没有统计学上的差异。运用正态分布法，由此所得到的aPTT的参考区间为22.7s～29.2s。与非参数方法求得的参考范围相比，范围更小。在很多文献中，aPTT的参考范围所采用的都是均值±1.96标准差表示。若真要比较这两种方法间的差异，还需要进一步的探讨[5]。

对于SysmexCS5100全自动血凝分析仪ACTINFSLAPTT试剂aPTT参考范围的建立，我们需要严格按照CLSIC28-A2《临床实验室如何确定和建立生物参考区间》核准指南[6]操作。在整个建立过程中，影响aPTT值的因素有很多，如样本采集后，没有及时的进行检测，就会影响检测结果的准确性。这次所建立的参考区间不可以应用于其他的试剂或仪器，只有针对性的参考区间才可为临床提供更准确的参考依据。

参考文献：

[1]尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2015:96-98.

[2]中华人民共和国卫生部.血细胞分析参考区间[S].北京:中国标准出版社,2013

[3]褚静英,程大卫,邹静娟,等.对两种APTT试剂正常参考值的评估[J].中国血液流变学杂志.2002.12(1).

[4]乌丽,张月巧,杜水果,等.实验室内PT和APTT正常范围值的确立方法[J].血栓与止血学,2003(3):135.

[5]王洪亚,张捷.建立检验项目参考区间的探讨[J].临床检验杂志,2011,29(7):548-550.

程霞,王卓,杨丹,王玉明,胡莹,马润,路明亮.临床实验室APTTACTINFSL试剂建立活化部分凝血活酶时间参考范围[J].血栓与止血学,2020,26(04):579-581+584.