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造血干细胞移植治疗黏多糖贮积症Ⅱ型代谢指标分析

2021-09-14 229 上传者：管理员

摘要：目的从实验室代谢指标探讨黏多糖贮积症Ⅱ型患儿造血干细胞移植治疗后的疗效。方法回顾分析23例男性黏多糖贮积症Ⅱ型患儿造血干细胞移植治疗年龄及治疗前后外周血白细胞艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)活性、尿黏多糖(GAG)定性和电泳结果变化。结果23例男性患儿,移植中位年龄为4.5岁(1.75～12岁)。移植前23例患儿IDS活性均显著低于正常值;移植后100天,90.9%(20/22)患儿IDS活性达到正常值;至移植后2年,100%(9/9)患儿IDS活性达到正常值;移植2年后,患儿IDS活性稳定于正常值范围。移植后2年内患儿IDS活性数值变化差异无统计学意义(P>0.05)。移植后100天即有53.3%(8/15)患儿尿GAG含量较移植前下降。截止到资料收集时间,75.0%(15/20)患儿移植后尿GAG含量较移植前下降,但仅2例(10.0%,2/20)患儿移植后尿GAG完全转阴。结论造血干细胞移植治疗可恢复黏多糖贮积症Ⅱ型患儿外周血白细胞IDS活性至正常值,但对于降低黏多糖贮积症Ⅱ型患儿尿GAG含量作用有限,其可在一定程度上降低尿GAG含量但大多未至正常水平。

关键词：
溶酶体贮积病
造血干细胞移植
隐性遗传性代谢病
黏多糖贮积症Ⅱ型;
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黏多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosisⅡ，MPSⅡ，Huntersyndrome)是一种X连锁的隐性遗传性代谢病，由位于X染色体上艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase，IDS)基因变异导致IDS功能缺陷，使其底物硫酸皮肤素(dermatansulfate，DS)和硫酸类肝素(heparansulfate，HS)在患儿体内异常贮积。因此，患儿出现外周血白细胞IDS活性下降，尿黏多糖(glycosaminoglycan，GAG)含量增加，肝脾肿大、关节僵硬、智力落后等临床表现[1,2]。MPSⅡ的治疗主要有酶替代疗法(enzymereplacementtherapy，ERT)和造血干细胞移植疗法(hematopoieticstemcelltransplantation，HSCT)，ERT因其较高的安全性成为国际上治疗MPSⅡ的主要方法，但费用昂贵且无改善中枢神经症状作用[3]。日本相关研究发现HSCT可部分改善MPSⅡ患儿中枢神经系统症状[4]，且较ERT费用低，在巴西[5]、日本[4]、中国[6]已开展治疗。本研究从实验室代谢指标探讨中国MPSⅡ患儿在HSCT治疗后的疗效，为中国MPSⅡ患儿治疗方式的选择提供参考。

1、对象与方法

1.1研究对象

本研究为回顾性病例分析。选取2010年1月至2020年12月就诊于上海交通大学附属新华医院儿童内分泌遗传代谢科确诊为MPSⅡ，并于外院接受HSCT治疗的23例患儿为研究对象。纳入标准：符合MPSⅡ诊断标准，且诊断后只接受HSCT治疗，未接受ERT治疗。

1.2方法

1.2.1临床资料收集

收集纳入患儿的移植年龄、移植前和移植后IDS活性、尿GAG定性和电泳结果。

1.2.2IDS活性检测

用荧光底物4-甲基伞型酮-a-艾杜糖-2-硫酸来测量外周血白细胞中IDS活性，方法参照文献[7]，正常值范围为16.5～83.0nmol/(mg蛋白·4h)-1[8]。

1.2.3尿GAG定性试验

采用甲苯胺蓝斑点试验[8]。若5µL晨尿出现明显的紫斑点，则为阳性；若边缘出现紫色，则为弱阳性；若无紫色出现，则为阴性。尿GAG定性试验阴性结果为正常。

1.2.4尿GAG电泳检测

采用尿GAG电泳的方法检测[8]。将处理过的5mL晨尿点样于醋酸纤维素膜上电泳，可出现两个条带，迁移率较快位于前面的为硫酸软骨素(chondroitinsulfate，CS)条带，迁移率较慢位于后面的为DS条带。尿GAG电泳正常为无条带，部分正常人有CS条带。尿GAG定性及电泳结果较之前由阳性转变为弱阳性或阴性，弱阳性转变为阴性，或DS区带消失即认定为尿GAG含量减少。

1.3 统计学分析

采用SPSS22.0统计软件进行数据处理。非正态分布计量资料以中位数(四分位数范围)表示，组间比较采用秩和检验。计数资料以例数(百分比)表示。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1一般情况

23例患儿全部为男性，移植年龄中位数为4.5岁(1.75～12岁)。

2.2外周血白细胞IDS活性

HSCT治疗前，23例患儿中位IDS活性为0.23(0～1.39)nmol·(mg蛋白·4h)-1，显著低于正常值。移植后100天、1年和2年有IDS活性记录的患儿分别为22例、21例和9例。

移植后100天的中位IDS活性为41.2(23.6～74.6)nmol·(mg蛋白·4h)-1，20例(90.9%)患儿IDS活性达到正常，2例仍低于正常。移植后1年的中位IDS活性为55.4(29.1～74.7)nmol·(mg蛋白·4h)-1，19例(90.5%)患儿IDS活性达到正常，2例仍低于正常。移植后2年的中位IDS活性为39.3(26.9～47.8)nmol·(mg蛋白·4h)-1，全部患儿IDS活性均达到正常。上述4次IDS活性异常值出现于3例患儿中，1例患儿在移植后1年、2例患儿移植后2年，IDS活性才恢复至正常。仅1例患儿随访时间长达7年，此患儿移植后IDS活性均在正常值范围内。患儿IDS活性记录见图1。比较移植后2年内患儿IDS活性值变化结果，差异无统计学意义(H=1.52，P=0.468)。患儿IDS活性数值箱型图见图2。

图123例MPSⅡ患儿移植前、后酶活性

实线为患儿酶活性，虚线为正常酶活性最低值16.5nmol·(mg蛋白·4h)-1

图223例MPSⅡ患者移植前及移植后2年酶活性箱形图

2.3尿GAG定性及电泳结果

23例患儿移植前尿GAG定性及电泳结果均为阳性(DS、CS条带)。23例患儿中，移植后100天、1年和2年，有尿GAG定性及电泳结果记录的患儿分别为15例、19例和6例。与移植前相比，移植后100天有53.3%(8/15)患儿尿GAG含量减少(阳性，DS、CS条带7例；阳性，CS条带3例；弱阳性，CS条带4例；阴性，无条带1例)。移植后1年，78.9%(15/19)患儿的尿GAG含量减少(阳性，DS、CS条带3例；阳性，CS条带5例；弱阳性，CS、DS条带2例；弱阳性，CS条带6例；阴性，CS条带1例；阴性，无条带2例)。移植后2年，66.7%(4/6)患儿的尿GAG含量减少(阳性，DS、CS条带2例；阳性，CS条带2例；弱阳性，CS条带2例)。

截止到资料收集时间，20例患儿有移植后尿GAG定性及电泳结果记录，其中15例(75.0%，15/20)患儿移植后尿GAG含量较移植前下降，仅2例(10%，2/20)患儿移植后尿GAG含量正常(阴性，无条带)，该2例患儿的移植年龄均≤2岁。3例(15.0%，3/20)患儿移植后尿GAG含量较移植前无变化。1例患儿移植后尿GAG定性结果转阴后复阳。1例患儿移植后尿GAG定性结果不稳定，弱阳性转阳性后又转弱阳性。

3、讨论

黏多糖贮积症是由于GAG水解酶基因变异导致其对应的水解酶缺乏而使GAG在患者身体各个器官贮积的一类疾病。根据所缺乏GAG水解酶的不同，MPS可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ和Ⅶ类型，不同类型MPS又可据其临床表现分为不同亚型。目前MPS治疗方法主要有ERT和HSCT。ERT治疗原理是将重组的正常功能的GAG水解酶经静脉输入于患者体内，以替代患者体内功能异常的GAG水解酶。ERT对降低患者尿GAG含量，缩小肝脾体积疗效确切，安全性高，但重组酶不可通过血脑屏障，对中枢神经系统无疗效。现ERT已批准应用于MPSⅠ、Ⅱ、ⅣA、Ⅵ、Ⅶ患者的治疗[9,10]。

HSCT是将来自健康供体的干细胞移植入患者体内使患者获得产酶能力。移植后部分单核/巨噬细胞可穿过血脑屏障到达中枢神经系统，从而在一定程度上纠正中枢神经系统IDS活性的降低[11]。HSCT可不同程度降低患者尿GAG含量，日本Tanaka等[4]证实HSCT可有效改善MPSⅡ患者中枢和心脏系统症状。在2000年前出版的文献中强调了HSCT治疗MPS患者的高死亡率，HSCT治疗后的高死亡率可能由于严重的全身器官衰竭，移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)等[5]。但近年来由于移植方案的优化和供体细胞的优化选择，生存率明显提高，移植后MPSⅠ患者生存率达74.0%[12]，中国一项研究显示HSCT治疗后MPSⅡ患者的生存率达100%[6]。目前，HSCT是治疗MPSⅠ严重型的首选治疗方法，同时也是治疗MPSⅡ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ患者的一种选择[9]。

本研究中，23例MPSⅡ患儿移植前酶活性均显著低于正常值；移植后100天，90.9%(20/22)的患儿IDS活性达到正常值；至移植后2年，100%(9/9)的患儿IDS活性达到正常值；移植2年后，患儿IDS活性稳定于正常值范围。上述结果肯定了HSCT对于MPSⅡ患儿外周血白细胞IDS活性的恢复作用。然而，也有研究表明，HSCT治疗后患儿白细胞酶活性正常但血浆IDS活性仍然低于正常值[13]。大多数患儿(90%，20/22)移植后100天酶活性即达到正常值，但1例患儿在移植后1年、2例患儿移植后2年酶活性才恢复至正常值。推测上述3例患儿酶活性升高速度较其他患儿缓慢的原因，可能是HSCT的细胞来源于HLA半相合的供体，半相合移植存在骨髓造血缓慢的现象[14]。中国HSCT治疗黏多糖贮积症儿科专家共识推荐首选全相合非携带者同胞供体，其次为非血缘全相合脐血，再次为非血缘全相合供体[15]。

以往研究表明，HSCT治疗可显著降低患儿尿GAG含量但未降至正常值[3,5]，这与本研究结果相一致。本研究中，截止到随访时间，75.0%(15/20)患儿移植后尿GAG含量较移植前下降但未降至正常。值得注意的是，2例(10%，2/20)患儿移植后尿GAG定性实验结果完全转阴，推测这一结果与患儿较小的移植年龄相关，上述2例患儿的移植年龄分别为1.75岁和2岁，为本研究最小年龄。

本研究的局限在于，①由于技术受限，未能用质谱法进行尿液GAG的精确分型和定量；②酶活性不是同一批次检测，时间跨度较长，推测不同时间批次的试剂对检测值有一定影响。

综上所述，HSCT可恢复MPSⅡ型患儿外周血白细胞IDS活性至正常值，但对于降低MPSⅡ患儿尿GAG含量作用有限，其可在一定程度上降低尿GAG含量但大多未至正常水平。本研究结果对MPSⅡ型患儿治疗方案的选择有一定参考意义。该方法疗效的局限性也提示针对MPSⅡ型急需疗效更好的治疗方案。

文章来源：仲琳,高晓岚,张惠文,邱文娟,叶军,韩连书,顾学范.造血干细胞移植治疗黏多糖贮积症Ⅱ型代谢指标分析[J].临床儿科杂志,2021,39(09):673-676.