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三阴性乳腺癌中KPNA2、snail、twist的表达及临床病理意义

2023-11-01 130 上传者：管理员

摘要：目的本研究旨在探讨KPNA2、snail、twist在三阴性乳腺癌中的表达状况及临床病理意义。方法将研究对象分为对照组和实验组，各46例。采用免疫组织化学方法检测研究对象组织中KPNA2、snail、twist的表达情况，并分析KPNA2、snail、twist与三阴性乳腺癌临床病理参数及预后的关系。结果 KPNA2在三阴性乳腺癌中高表达率为54.3%，在非三阴性乳腺癌中表达率为19.6%。KPNA2在三阴性乳腺癌中的表达明显高于非三阴性乳腺癌，差异有统计学意义(P=0.001)。KPNA2高表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、Ki-67指数高密切相关，差异有统计学意义(P <0.05)。Snail在三阴性乳腺癌中高表达率为43.5%，在非三阴性乳腺癌中表达率为17.4%。Snail在三阴性乳腺癌中的表达明显高于非三阴性乳腺癌，差异有统计学意义(P=0.010)。Snail高表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、Ki-67指数高密切相关，差异有统计学意义(P <0.05)。Twist在三阴性乳腺癌中高表达率为50%，在非三阴性乳腺癌中表达率为23.9%。Twist在三阴性乳腺癌中的表达明显高于非三阴性乳腺癌，差异有统计学意义(P=0.020)。Twist高表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、Ki-67指数高密切相关，差异有统计学意义(P <0.05)。KPNA2的表达与snail、twist的表达分别呈正相关，KPNA2高表达的三阴性乳腺癌患者预后差。结论 KPNA2是评估三阴性乳腺癌预后的重要生物学标记，可用于临床预后指导。KPNA2在三阴性乳腺癌的表达与snail、twist的表达分别呈正相关。

关键词：
Ki-67
KPNA2
Snail
Twist
三阴性乳腺癌
预后
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就发病率而言，乳腺癌是影响女性健康的主要癌症之一。近十年来，乳腺癌发病率仍呈上升趋势，但死亡率并未有明显的增加，筛查和早期诊断仍然是重点[1]。45岁以上乳腺癌占所有乳腺癌病例的69.75%,45岁以后发病率随年龄的增长而增高[2]。三阴性乳腺癌作为乳腺癌的一种亚型，有着特殊的生物学特性和临床病理特征，内分泌治疗及针对Her-2的靶向药物对其治疗无效。全身化疗是该亚型患者的主要治疗模式，但是远期疗效不佳，预后较差[3,4]。在恶性肿瘤细胞的发生、发展过程中，调控蛋白分子进入细胞核对于改变细胞表型有着极为重要的作用，在癌细胞中经常会出现核胞质转运功能紊乱。核转运功能的异常会导致肿瘤抑制因子、原癌基因和其他大分子的生理水平和状态的改变，进而影响肿瘤的发生过程和药物敏感性。核转运受体除了在分裂间期具有核转运功能外，在有丝分裂和维持染色体完整性方面也有重要作用。因此，核转运受体的表达或功能的改变可能会对肿瘤的发生发展产生实质性的影响。细胞质和细胞核之间蛋白分子的转运主要是通过核转运蛋白(karyopherins)介导的[5]。KPNA2作为核转运蛋白家族成员之一，通过核浆运输功能调节多种蛋白的核转位，并参与细胞分化、增殖、凋亡、转录、免疫反应和病毒感染等多种生命活动[6]。近几年研究[7,8,9,10]发现KPNA2在多种癌症中出现异常表达，例如肝细胞肝癌、胶质细胞瘤、结直肠癌、卵巢癌等，与肿瘤的发生发展有密切相关性。但是KPNA2、snail、twist在三阴性乳腺癌中的表达及其与各临床病理参数之间的关系在国内外研究中较少。本研究通过免疫组化方法检测三阴性乳腺癌KPNA2、snail、twist等三种蛋白的表达情况，并探讨KPNA2、snail、twist和各临床病理参数之间的关系，为今后三阴性乳腺癌患者的治疗和预后提供可靠的理论依据。

1、材料与方法

1.1 材料

选取山东省昌邑市妇幼保健院病理科2008年1月至2018年12月间未经放化疗的三阴性乳腺癌标本46例作为实验组，均为女性，平均年龄(53.26±9.25)岁。同时随机选取同一时间段的46例非三阴性乳腺癌组织作为对照组，均为女性，平均年龄(56.44±6.72)岁。两组基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

免疫组化，所有标本采用福尔马林固定，KPNA2、snail、twist1兔抗人多克隆抗体(工作浓度1∶100)(武汉三鹰生物技术有限公司)。ER、PR、HER2、Ki-67即用型抗体(福建迈新生物技术有限公司)。所有乳腺癌蜡块标本均经两个高年资病理医师确诊。常规石蜡4μm切片。实验组及对照组均采用SP法。PBS液替代一抗可作为阴性对照。

1.3 结果判定

免疫组化，依据美国临床肿瘤学会ASCO分级对KPNA2、snail、twist1、ER、PR、HER-2、Ki-67进行结果判读。KPNA2阳性：呈棕黄色颗粒定位于细胞核。实行半定量评分。染色阳性的肿瘤细胞面积<5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%，分别计数0、1、2、3、4分。肿瘤细胞着色强度分别标记-、+、++、+++，各计数0、1、2、3分。两数分别相乘，<6分判定为低表达，≥6分判定为高表达(见图1)。

图1 乳腺癌免疫组化表达(HE×400)

1.4 统计学方法

收集以上实验结果，并对所有数据采用SPSS 1.0统计学软件进行分析，对于计数资料以%表示，可用χ2检验；计量资料用表示，组间对比用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

2.1 KPNA2与临床病理参数之间的关系

KPNA2在三阴性乳腺癌中高表达率为54.3%，在非三阴性乳腺癌中表达率为19.6%。KPNA2在三阴性乳腺癌中的表达高于非三阴性乳腺癌(P=0.001)。KPNA2高表达与肿瘤TNM分期(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.020)、Ki-67指数高(P=0.010)密切相关，但与肿瘤大小、年龄无关(见表1)，差异有统计学意义。KPNA2高表达患者预后不良。通过TCGA数据库可以看出KPNA2在三阴性乳腺癌中表达高于正常乳腺组织和非三阴乳腺癌组织(见图2)。

2.2 Snail与临床病理参数之间的关系

Snail在三阴性乳腺癌中高表达率为43.5%，在非三阴性乳腺癌中表达率为17.4%。Snail在三阴性乳腺癌中的表达高于非三阴性乳腺癌(P=0.010)。Snail高表达与肿瘤TNM分期(P=0.010)、淋巴结转移(P=0.040)、Ki-67指数高(P=0.001)密切相关，但与肿瘤大小、年龄无关(见表1)，差异有统计学意义。

2.3 Twist与临床病理参数之间的关系

Twist在三阴性乳腺癌中高表达率为50.0%，在非三阴性乳腺癌中表达率为23.9%。Twist在三阴性乳腺癌中的表达高于非三阴性乳腺癌(P=0.020)。Twist高表达与肿瘤TNM分期(P=0.037)、淋巴结转移(P=0.003)、Ki-67指数高(P=0.007)密切相关，但与肿瘤大小、年龄无关(见表1)，差异有统计学意义。

2.4 KPNA2与snail、twist的关系

KPNA2与snail呈正相关，r=0.390,(P=0.007)。KPNA2与twist呈正相关，r=0.310,(P=0.028)(见图3)，差异有统计学意义。

表1 三阴性乳腺癌中KPNA2、snail、twist高表达与临床病理特征的关系

图2 TCGA数据库资料及KPNA2不同表达三阴性乳腺癌患者生存曲线

图3 KPNA2与snail、twist的关系

3、讨论

核蛋白α2(KPNA2)是核蛋白α家族的7个成员之一，在核质运输系统中起着重要作用。KPNA2与核球蛋白β1(KPNB1)形成异二聚体。在这个运输复合体中，KPNA2通过其核定位信号识别货物蛋白，并充当一个适配器的作用，货物蛋白通过核孔结合和转运物质[6,11,12,13,14,15,16]。核质转运系统通过协同促进E2F1、E2F7、P53、BRCA1等癌相关蛋白的转运，在肿瘤发生发展过程中发挥重要的作用[17,18,19]。通过这种方式，KPNA2间接地参与了一些生物学过程，如增殖、细胞生长、迁移、侵袭和肿瘤形成[20,21,22]。在肝细胞肝癌、结直肠癌、卵巢癌中，KPNA2高表达患者提示预后不良[7,9,10]。在本次实验中，通过免疫组化方式阐明KPNA2在三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于非三阴性乳腺癌，并且KPNA2的高表达与三阴性乳腺癌的高侵袭性临床病理参数相关，表明KPNA2与三阴性乳腺癌的发生发展关系密切。这与近期文献报道[7,10,11]的KPNA2高表达与肿瘤侵袭性相关相吻合。

核蛋白snail、twist是已知的上皮间充质转化过程中重要的转录因子[23,24]。KPNA2在卵巢癌中发现与EMT过程相关[21]，但KPNA2在三阴性乳腺癌中的发生发展机制研究甚少。本研究通过蛋白水平发现在三阴性乳腺癌中KPNA2与snail、twist的表达呈正相关，说明KPNA2在三阴性乳腺癌的发生发展过程中与snail、twist的作用机制有一定关联。但由于实验室条件限制，未能在细胞水平验证。

三阴性乳腺癌因为其特殊表型，在治疗过程中比较困难，并且预后极差。早期发现和治疗对提高三阴性乳腺癌患者的预后尤其重要。因此寻找新的用于三阴性乳腺癌早期治疗和影响预后的生物学指标是研究的主要方向。本研究通过免疫组化方法检测46例三阴性乳腺癌中KPNA2蛋白表达状态，并将其与临床病理参数相联系，发现KPNA2在三阴性乳腺癌中的高表达，并且通过TCGA数据库得到验证。KPNA2蛋白高表达与肿瘤的侵袭性行为相关，并且与snail、twist的表达呈正相关，提示KPNA2在三阴性乳腺癌的发生发展、浸润、转移过程中发挥了重要的作用，并且其作用机制与snail、twist的作用有关。但是KPNA2在三阴性乳腺癌中的具体作用机制尚待进一步的研究。

4、结论

KPNA2在三阴性乳腺癌中表达升高，并可能成为一种新的预后因子。已知的KPNA2与EMT在卵巢癌发病机制中具有重要意义，且KPNA2与MYC、P53、E2F1等蛋白作用相关，因此研究KPNA2在三阴性乳腺中的转运和作用机制是今后研究的重要课题，以期更好地了解KPNA2表达升高与三阴性乳腺癌迁移、侵袭和肿瘤形成等生物学过程改变之间的关系。构建KPNA2参与细胞信号的完整通路，为肿瘤的预防和治疗提供新的研究方向。

参考文献:

[2]宋宛芝,高晋南,杨海波.乳腺癌的流行状况及发病特征[J].中国药物与临床,2017,17(2):228-229.

基金资助:潍坊市卫生健康委科研项目(WFWSJK-2023-296)KPNA2联合β-catenin､snail､twist在乳腺癌中的表达及临床病理意义;

文章来源:魏丽丽,郝瑞卿,王华瑛.三阴性乳腺癌中KPNA2､snail､twist的表达及临床病理意义[J].临床研究,2023,31(11):4-8.