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不同尿蛋白检测方法在IgA肾病患者的相关性和一致性分析

2021-06-08 205 上传者：管理员

摘要：目的分析IgA肾病（IgAN）患者的24h尿蛋白定量、随机尿微量白蛋白/肌酐比值和晨尿蛋白半定量水平,评价3种尿蛋白检测方法的相关性和一致性。方法IgAN患者84例,留取患者随机尿,检测随机尿微量白蛋白和尿肌酐,记录患者晨尿蛋白半定量和24h尿蛋白定量结果。采用Pearson和Spearman相关性分析不同尿蛋白检测方法的相关性,采用组内相关系数（ICC）评价不同尿蛋白检测方法的一致性。根据肾小球滤过率（eGFR）水平分为训练集组[eGFR<90mL/（min•1.73m2）]49例和验证集组[eGFR≥90mL/（min•1.73m2）]35例,比较2组临床资料;采用训练集组数据绘制ROC曲线,确定反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值,计算界值判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度和特异度;采用验证集组数据进行内部验证。结果IgAN患者随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量呈正相关（r=0.718,P<0.001）,具有较好一致性（ICC=0.356,P<0.001）;晨尿蛋白半定量与24h尿蛋白定量呈正相关（r=0.719,P<0.001）,一致性较差（ICC=0.051,P=0.185）。随机尿微量白蛋白/肌酐比值为314.62mg/g时,判定24h尿蛋白定量≥1g/d的AUC为0.863（95%CI:0.778～0.947,P<0.001）。以其近似值300mg/g为界值,随机尿微量白蛋白/肌酐≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为100.0%,特异度为78.6%。以验证集组数据进行内部验证,随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时,判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为82.4%,特异度为77.8%。结论IgAN患者24h尿蛋白定量与随机尿微量白蛋白/肌酐比值和晨尿蛋白半定量均呈正相关,其中随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量水平一致性较好;无论患者肾功能是否受损,随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g可一定程度提示IgAN患者24h尿蛋白定量水平≥1g/d。

关键词：
24h尿蛋白定量
IgA肾病
晨尿蛋白半定量
肌酐比值
随机尿微量白蛋白
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IgA肾病(IgAN)是常见的原发性肾小球疾病，也是终末期肾病的主要病因[1,2]。IgAN患者24h尿蛋白定量≥1g/d是进展至终末期肾病的独立危险因素，且肾小球滤过率(eGFR)下降速度与蛋白尿水平相关，eGFR降低和24h尿蛋白定量增高是发生肾间质纤维化的独立危险因素[3,4]。24h尿蛋白定量和肾功能均是IgAN临床重要的病情监测指标，24h尿蛋白定量<1g/d可作为IgAN的治疗目标之一[5]。但24h尿蛋白定量检测需留取24h全部尿液，并准确记量，其采集、保存及处理中干扰因素较多，研究[6]发现，采用尿微量白蛋白/肌酐、尿蛋白/肌酐等方法进行尿蛋白半定量检测，其结果与24h尿蛋白定量高度相关，与肾脏发生节段性肾小球硬化和/或球囊粘连、毛细血管外增生性病变均呈正相关。随着检测技术的发展与进步，随机尿微量白蛋白/肌酐检测已可实现定量检测。本研究评价不同尿蛋白检测方法在IgAN的相关性和一致性，探讨评价24h尿蛋白定量≥1g/d的简便方法，报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

2019年3—5月解放军总医院诊治的原发性IgAN患者84例，男48例，女36例；年龄(40.1±13.2)岁；肌酐90.0(77.2,134.8)μmol/L;eGFR(81.1±32.2)mL/(min·1.73m2);CKD分期1期35例，2期26例，3a期5例，3b期14例，4期4例。入选标准：(1)原发性IgAN诊断均经肾穿刺活检组织病理检查确诊；(2)年龄14～65岁，性别不限。排除标准：(1)继发性IgAN,如过敏性紫癜性肾炎、乙型肝炎相关性肾炎、肝硬化相关性肾病等者；(2)合并系统疾病如糖尿病、甲状腺功能紊乱、免疫性疾病、肿瘤等者；(3)合并其他肾脏疾病如膜性肾病等者；(4)终末期肾病或行肾脏替代治疗者；(5)伴急、慢性泌尿系感染者；(6)重复就诊的患者。本研究经中国人民解放军总医院伦理委员会审核通过(伦理批准文号：S2018-206-1),患者均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1临床资料及指标采集

记录患者性别、年龄、血肌酐水平，根据CKD-EPI公式[7]估算eGFR,留取晨尿和24h尿液分别行尿常规检查和尿蛋白定量检测，记录尿比重、晨尿蛋白半定量、晨尿沉渣红细胞、白细胞计数、24h尿蛋白定量等指标。根据尿沉渣中高倍镜下平均细胞计数评价尿红细胞和尿白细胞，无镜下血尿定义为尿沉渣镜检无红细胞或红细胞计数≤3个/高倍视野，每视野红细胞取极大值50个/高倍视野。

1.2.2随机尿微量白蛋白/肌酐定量检测

留取患者随机尿标本，以400×g离心5min,取上清，应用全自动特定蛋白分析仪(西班牙BiosystemsS.A.公司BA400型号)进行随机尿微量白蛋白、尿肌酐定量检测，计算随机尿微量白蛋白/肌酐比值。正常参考值为0～30mg/g。

1.2.3确定并验证反映24

h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值84例患者根据eGFR水平分为训练集组[eGFR<90mL/(min·1.73m2)]49例和验证集组[eGFR≥90mL/(min·1.73m2)]35例。比较2组患者临床资料。以24h尿蛋白定量检测为金标准，采用训练集组数据确定反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值，采用验证集组数据进行内部验证。

1.3统计学处理

应用SPSS17.0软件进行统计分析，正态分布的计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示，2组比较采用t检验；非正态分布的计量资料以中位数(四分位数)[M(Q1,Q3)]表示，比较采用秩和检验；计数资料比较采用χ2检验；不同尿蛋白检测方法的相关性采用Pearson或Spearman相关性分析；不同尿蛋白检测方法的一致性采用组内相关系数(intraclasscorrelationcoefficient,ICC)评价；采用训练集组数据绘制ROC曲线，确定反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值，判断界值判定24h尿蛋白定量≥1g/d的准确性，并采用验证集组数据进行内部验证；检验水准α=0.05。

2、结果

2.1IgAN患者尿液检测结果

84例IgAN患者24h尿蛋白定量为857.9(426.1,1625.5)mg/d,晨尿比重为1.015±0.011,晨尿红细胞计数为3(0,10)个/高倍视野，晨尿白细胞计数0个/高倍视野，晨尿蛋白半定量1000(300,2000)mg/L,随机尿白蛋白为409.3(181.8,951.0)mg/L,随机尿肌酐(11787.6±7182.5)μmol/L,随机尿微量白蛋白/肌酐比值421.4(169.7,852.7)mg/g。

2.2不同尿蛋白检测方法的相关性及一致性

Pearson相关性分析结果显示，随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量呈正相关(r=0.718,P<0.001);Spearman相关性分析显示，晨尿蛋白半定量与24h尿蛋白定量呈正相关(r=0.719,P<0.001)。组内相关系数分析结果显示，随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量具有较好一致性(ICC=0.356,P<0.001),晨尿蛋白半定量与24h尿蛋白定量一致性较差(ICC=0.051,P=0.185)。

2.3训练集组和验证集组患者临床特征比较

验证集组eGFR、晨尿比重高于训练集组(P<0.05),年龄、肌酐低于训练集组(P<0.05),性别比例、24h尿蛋白定量、晨尿红细胞计数、晨尿白细胞计数、晨尿蛋白半定量、随机尿白蛋白水平、随机尿肌酐水平、随机尿白蛋白/肌酐比值与训练集组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1训练集组和验证集组患者临床特征比较

2.4反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值

以训练集组数据24h尿蛋白定量≥1g/d为状态变量，随机尿微量白蛋白/肌酐比值为检验变量，绘制ROC曲线，以患者24h尿蛋白定量检测为金标准，分析可反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值，结果显示随机尿微量白蛋白/肌酐比值为314.62mg/g时，判定24h尿蛋白定量≥1g/d的AUC为0.863(95%CI:0.778～0.947,P<0.001)。取其近似值300mg/g为界值。

2.5随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度和特异度

在训练集组中，随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为100.0%,特异度为78.6%。以验证集组数据进行内部验证，随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时，判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为82.4%,特异度为77.8%。见表2-3。

表2训练集组随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度和特异度

表3验证集组随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度和特异度

3、讨论

尿蛋白定量是IgAN临床重要的病情监测指标，24h尿蛋白定量<1g/d可作为IgAN的治疗目标之一[8]。尿蛋白定量检测方法有多种，如尿蛋白干化学定性、免疫比浊法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法等[9],由于检测范围多在800mg/L以内，对尿蛋白总量较高的患者，无法准确评价患者的尿蛋白水平。因此，寻找一种高效、灵敏的尿蛋白检测指标有一定临床意义。

24h尿蛋白定量亦称为24h尿蛋白排泄率，需收集24h的全部尿液，准确记量，多采用邻苯三酚红钼法测定其中的蛋白质浓度，进而计算24h尿蛋白总量，由于其可准确定量检测尿蛋白，一直是指南推荐的IgAN重要的监测指标[10]。但其采集、保存及处理等过程繁琐，在采集和保存尿标本的过程中易受温度、防腐剂、留取方法、放置时间、环境因素、药物代谢产物、尿液中色素等多种因素影响[11]。尿常规中尿蛋白定性检测多采用尿蛋白干化学定性的方法，主要检测尿白蛋白水平，方便快捷，检测范围在300mg/L内，属半定量检测。本研究结果显示，晨尿蛋白半定量与24h尿蛋白定量呈正相关，但一致性较差；考虑主要受其检测范围影响，也与IgAN患者肾小球损伤后，免疫球蛋白等多种中、大分子质量蛋白也可滤过，影响尿蛋白干化学检测有关[12]。

随机尿微量白蛋白/肌酐比值，即用尿肌酐水平校正肾功能、尿量等影响因素后，定量检测尿微量白蛋白水平，由于其检测方便快捷，灵敏度高，结果相对稳定，美国肾脏病协会在2002年推荐将其作为尿蛋白排泄的检测指标[13],有研究结果[14,15]显示，随机尿微量白蛋白/肌酐比值可评估高血压患者肾脏亚临床靶器官损伤，是监测原发性高血压患者疾病进展的关键因素，对原发性高血压早期肾损伤有重要的诊断价值。本研究结果显示，随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量呈正相关，具有较好一致性；说明随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量水平相关性和一致性均高。由于既往尿微量白蛋白检测在尿蛋白>800mg/L时无法实现定量检测，尿微量白蛋白/肌酐比值受尿肌酐排泄量的影响，其在尿蛋白较多及肾功能明显受损患者中的研究较少。

本研究根据患者eGFR水平分为训练集组和验证集组，训练集组数据ROC曲线分析结果显示，可反映24h尿蛋白定量≥1g/d的随机尿微量白蛋白/肌酐比值的界值为300mg/g;训练集组随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为100.0%,特异度为78.6%。以验证集组数据进行内部验证，结果显示随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g时，判定24h尿蛋白定量≥1g/d的灵敏度为82.4%,特异度为77.8%;本研究在采用免疫比浊法检测尿微量白蛋白定量的基础上，通过成比例稀释尿液，将尿白蛋白的检测范围扩大到<160000mg/L,实现了在尿蛋白总量较高的患者中定量检测随机尿微量白蛋白/肌酐。根据患者eGFR水平分为训练集组和验证集组，结果显示无论IgAN患者肾功能是否受损，随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量水平的相关性和一致性均高，随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g可一定程度提示IgAN患者24h尿蛋白定量水平≥1g/d,与患者肾功能是否受损无关。

本研究结果提示，在IgAN中，晨尿蛋白半定量、随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量有高度的相关性，随机尿微量白蛋白/肌酐比值与24h尿蛋白定量水平一致性高。无论患者肾功能是否受损，随机尿微量白蛋白/肌酐比值≥300mg/g可一定程度提示IgAN患者24h尿蛋白定量水平≥1g/d。此外，尿液采集因素也可影响临床尿液检验结果的准确性，保持尿道口清洁、干净，规范留取尿标本，是保证尿蛋白检测准确性的重要因素；由于本研究纳入样本量较少，研究结果仍有待进一步扩大样本量证实。

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文章来源：崔少远,段姝伟,张岩,汪鹏,朱晗玉,蔡广研,陈香美.不同尿蛋白检测方法在IgA肾病患者的相关性和一致性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志,2021,35(06):621-624.

基金：北京市科技计划课题(D181100000118004,D181100000118002);国家重点实验室专项(2011DAV00088)