带状疱疹（herpes zoster,HZ）是临床常见的一种由水痘-带状疱疹病毒引起的急性、传染性、自限性皮肤病，发病率高达10%～20%[1-2]。带状疱疹后遗神经痛（postherpetic neuralgia,PHN）是指HZ患者痊愈1个月后病灶部位仍存在顽固、剧烈、持续性疼痛的现象，是HZ常见的一类并发症[3]。HZ患者中约有10%～35%的患者会并发PHN，且发生率呈现逐渐上升的趋势[4]。PHN一旦发生，会给患者带来极大的痛苦，造成约50.5%患者失眠，同时PHN持续时间通常较长，会引起患者焦虑、抑郁等不良情绪，甚至导致自杀[5-6]。探索可准确预测PHN的生物指标并据此为患者实施针对性治疗具有重要的临床意义。微小核糖核酸（micro ribonucleic acid,miR）可结合靶向基因从而发挥基因调控作用，可通过参与神经炎症反应进而参与病理性神经痛的调控过程[7]。既往研究发现，mi R-199-3p可通过靶向调控甲基化Cp G结合蛋白2缓解炎症反应，减轻硫氧还蛋白诱导的小鼠PHN，推测mi R-199-3p在HZ病情进展中具有一定作用[8]。Huang等[9]报道，mi R-223-3p可通过靶向调控丝裂原活化蛋白激酶-细胞外调节蛋白激酶信号等方式缓解雄性小鼠三叉神经痛，推测mi R-223-3p在HZ病情发展中具有重要作用。目前，关于mi R-199-3p、mi R-223-3p在HZ患者血清中的表达情况如何、是否对PHN具有预测价值却尚无报道。鉴于此，本研究检测了HZ患者血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达情况，并探讨2者对HZ患者发生PHN的预测价值。

1、对象与方法

1.1研究对象

选取2020年2月至2022年11月衡水市人民医院收治的512例HZ患者为研究组，其中男240例，女272例；年龄27～75岁，平均（56.50±10.29）岁。纳入标准：①均满足《带状疱疹的诊断与治疗》[10]中HZ诊断标准，有明显的HZ症状，且均参照其中治疗标准进行治疗；②均在发病7 d内入院治疗；③入院前未进行相关治疗；④年龄>14岁；⑤患者或家属签订本研究知情同意书。排除标准：①合并其他类型皮肤病；②合并免疫系统、血液系统疾病或肿瘤；③合并其他类型严重的内外科疾病；④伴有其他原因导致的疼痛；⑤近半年有免疫抑制剂使用史；⑥合并精神与认知障碍性疾病者。另选取同时期本院接收的512例健康体检者为对照组，其中男243例，女269例；年龄26～76岁，平均（56.75±10.56）岁，体检结果正常，近3个月无用药史。2组的性别、年龄均衡，具有可比性。本研究通过了衡水市人民医院医学伦理委员会审核批准（批号:2020-01294）。

1.2方法

1.2.1临床资料收集

收集患者基本资料，包括性别、年龄、体质量指数（body mass index,BMI）、吸烟史、饮酒史、是否合并糖尿病、高血压、心脑血管疾病、高脂血症、皮损类型、急性期疼痛程度[由患者采用疼痛数字评分量表（numerical rating scale,NRS)[4]评价，根据自身疼痛程度在0～10分进行选择，轻度：NRS评分≤3分，中度：4分≤NRS评分≤6分，重度：7分≤NRS评分≤10分]、皮损面积、发病至治疗时间、是否前驱痛、C反应蛋白是否升高（血清C反应蛋白>10 mg/L为升高[11]）、红细胞沉降率是否升高（红细胞沉降率>30 mm/h为升高[11]）、是否使用糖皮质激素治疗、住院时间等。

1.2.2 miR-199-3p、miR-223-3p表达水平测定

研究组于入院当天（对照组于体检当天）抽取静脉血5 m L，分离血清，并置于-80℃超低温条件下保存待检。采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平：(1)采用mir Vana RNA分离试剂盒（购自美国Applied Biosystem公司）提取总RNA;(2)使用逆转录试剂盒（购自南京诺唯赞生物科技有限公司）合成c DNA;(3)配置扩增体系：c DNA 1μL+2×Cham Q SYBR q PCR Master Mix（购自南京诺唯赞生物科技有限公司）5μL+目标基因及内参基因上下游引物（10μmol/L）各0.2μL+dd H2O，按说明书配置反应体系。(4)通过PCR仪（购自美国BIO-RAD公司）进行mi R-199-3p、mi R-223-3p扩增。mi R-199-3p、mi R-223-3p均以U6为内参，反应条件为：95℃预热1 min，然后95℃15 s,60℃15 s,72℃45 s,40个循环。以2-ΔΔCt法计算血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达量。引物序列见表1。

表1引物序列

1.2.3随访

患者痊愈后，采用微信或到院复查的方式对患者进行1个月以上的随访，依据《带状疱疹后神经痛诊疗中国专家共识》[12]中PHN的诊断标准判断PHN发生情况：将疼痛持续1个月的患者视为并发PHN，归为PHN组，将疼痛持续时间不足1个月的视为未并发PHN，归为非PHN组。

1.3统计学处理

采用SPSS 25.0对本研究数据进行统计学处理。计量资料均满足正态分布规律，以表示，t检验比较组间差异；计数资料以；例（%）表示，χ2检验比较组间差异。采用Logistic回归分析模型分析HZ患者并发PHN的影响因素；受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平对HZ患者并发PHN的预测价值。P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

2.1研究组与对照组血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平比较

与对照组相比，研究组的血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平均显著下调（P<0.05），见表2。

表2研究组与对照组带状疱疹患者血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平比较（)

2.2 PHN组与非PHN组患者一般资料比较

PHN组与非PHN组性别、BMI、吸烟、饮酒史、住院时间相比,差异无统计学意义（P均>0.05);PHN组年龄≥50岁、皮损类型为坏疽、皮损面积>5%、发病至治疗时间>3 d患者比例均高于非PHN组（P均<0.05），皮损类型为典型的比例以及血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平均低于非PHN组（P均<0.05），见表3。

2.3 Logistics回归分析HZ患者并发PHN的影响因素

以HZ患者是否并发PHN为因变量，表3中有统计学差异的因素为自变量，行Logistic回归分析。结果表示，年龄≥50岁、皮损类型、皮损面积、发病至治疗时间、血清mi R-199-3p、mi R-223-3p均为HZ患者并发PHN影响因素（P<0.05）。见表4。

2.4血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平对HZ患者并发PHN的预测价值

经二元Logistic回归分析的预测概率，联合预测概率=-8.053×miR-199-3p-10.585×mi R-223-3p+10.926。ROC分析结果显示，血清mi R-199-3p、mi R-223-3p联合预测HZ患者并发PHN的敏感度为91.80%，高于单独预测（χ2=6.960,P=0.008；χ2=9.055,P=0.003）；特异度为79.82%，而单独预测比较差异无统计学意义（χ2=0.028,P=0.868；χ2=0.347,P=0.556);2者联合预测的ROC曲线下面积（area under curve,AUC）大于2者单独预测（z=3.862、2.923,P=0.001）。见表5、图1。

表3 PHN组与非PHN组患者一般资料比较

表4多因素Logistics回归分析影响HZ患者并发PHN的影响因素

表5血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平对HZ患者并发PHN的预测价值

图1血清miR-199-3p、miR-223-3p表达对HZ患者并发PHN的ROC曲线

3、讨论

PHN是临床常见的一种以神经病理性病变为基础的病理性神经痛，临床主要表现出自发性、持续性灼痛或刀割样刺痛、瘙痒等，极易反复发作，患者难以忍受，威胁患者健康[13-14]。目前关于PHN的发病机制并不明确，故分析、筛选可能导致HZ患者PHN的因素并及时进行防治非常必要。

近年来，研究报道miRNA可通过调控神经元功能、调节脊髓损伤诱发的炎症等方式参与神经性疼痛的发生、发展进程[15-16]。徐海峰等[17]研究结果显示，miRNA可调控病毒转录后的基因表达，抑制其信使RNA翻译，促进其信使RNA降解，在PHN患者血清中异常表达。研究发现，mi R-199-3p是炎症反应中的重要调节因子，其在骨关节炎中发挥关键作用，可通过调控白细胞介素-1β等炎性因子的水平，抑制DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A）的表达，从而抑制膝关节炎症反应[18]。Cui等[19]研究结果显示，miR-199-3p可直接作用于DNMT3A的信使RNA，抑制其表达，同时上调转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3）表达，降低其甲基化水平，形成miR-199-3p-DNMT3A-STAT3信号通路，参与小鼠过敏性皮炎过程，上调miR-199-3p会明显缓解小鼠过敏性皮炎症状。肖佑等[20]研究结果显示，溃疡性结肠炎大鼠的结肠组织miR-199-3p表达水平下降，而miR-199-3p上调可抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白信号通路的激活，达到改善溃疡性结肠炎的效果。miR-223-3p是在炎症性疾病中发挥重要作用的负向调控因子，其可靶向作用于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3，抑制被苍白球感染的内皮细胞的炎症小体激活和细胞焦亡[21]。樊军等[22]研究结果显示，miR-223-3p可通过介导趋化因子表达参与炎症反应，调控神经功能。Zou等[23]研究结果显示，上调miR-223-3p表达可抑制PHN引发的神经元细胞自噬现象。Tang等[24]研究结果显示，在角膜炎患者中，mi R-223-3p可通过负向调控自噬相关基因16L1的表达抑制镰刀菌诱导的自噬和炎症反应。与上述研究报道相似，本研究发现，HZ患者血清miR-199-3p、miR-223-3p表达水平均低于健康体检者，且HZ并PHN患者血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平均下调，推测血清mi R-199-3p、mi R-223-3 p表达水平均可通过抑制促炎因子表达、调控信号通路等方式抑制水痘-带状疱疹病毒导致的炎症反应，抑制神经元细胞的自噬与细胞焦亡，发挥降低PHN发生风险的作用。本研究HZ患者并发PHN的发生率为11.91%，略低于Hu等[25]报道的15.6%，此可能是由于样本数量、地区差异、样本差异等因素所致。单因素分析，PHN组年龄≥50岁、皮损类型为坏疽、皮损面积>5%、发病至治疗时间>3 d患者比例均高于非PHN组，皮损类型为典型比例以及血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平均低于非PHN组，进一步多因素Logistic回归分析，结果显示，年龄≥50岁、皮损类型、皮损面积、发病至治疗时间、血清mi R-199-3p、mi R-223-3p均为HZ患者并发PHN影响因素。ROC分析结果表明，血清mi R-199-3p、mi R-223-3p联合预测HZ患者并发PHN的AUC与敏感度均大于单独预测，而特异度与单独预测无差异。这表明血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达水平均对HZ患者发生PHN有一定预测价值，且联合预测效果更好。这提示临床需提高对HZ患者这些指标的关注度，及早为其实施PHN预防治疗，并提示HZ发病患者及早就医，以降低PHN发生风险。

综上，HZ并PHN患者血清mi R-199-3p、mi R-223-3p表达均下调，2者均可作为预测HZ患者并发PHN的临床指标，且联合应用的预测价值更高，值得在临床推广应用。但本研究未深入研究mi R-199-3p、mi R-223-3p参与PHN的具体机制，还需后期研究进一步探讨。

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基金资助:河北省2023年度医学科学研究课题计划(20232176);

文章来源:温晓依,谷海钘,高谦,等.带状疱疹患者血清miR-199-3p和miR-223-3p表达对带状疱疹后遗神经痛的预测价值[J].传染病信息,2024,37(06):536-540.