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HPV不同亚型感染状况及基因分型与胃癌病变、预后的相关性研究

2023-07-11 73 上传者：管理员

摘要：探讨胃癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)不同亚型感染状况及各基因分型与胃癌患者预后的关系。方法收集2015年2月—2017年10月于本院进行手术切除的246例胃癌患者的组织及临床资料，采用HPV基因分型PCR检测试剂盒进行定性检测；采用Kaplan-Meier法分析胃癌患者预后与HPV18、HPV16阳性的关系，并绘制生存曲线；采用多因素Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果 246例胃癌患者中，HPV感染阳性率为73.98%,共检测到8种高危型(HR)-HPV基因亚型和5种低危型(LR)-HPV基因亚型。HR-HPV基因亚型中HPV18(39.84%)和HPV16(19.51%)的阳性率最高，LR-HPV基因亚型中HPV42(3.25%)的阳性率最高。不同年龄、性别、Lauren分型、肿瘤直径、分化程度胃癌患者胃癌组织中HPV18及HPV16阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05);TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中HPV18及HPV16阳性率高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05)。HPV18阴性组5年内生存率高于HPV18阳性组(χ2=20.361,P<0.05),HPV16阴性组5年内生存率高于HPV16阳性组(χ2=11.648,P<0.05)。TNM分期、HPV18阳性是胃癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论 HPV18是胃癌患者中最常见的HPV基因亚型，且是影响胃癌患者预后的重要因素。

关键词：
人乳头瘤病毒
基因分型
恶性肿瘤
胃癌
预后
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胃癌是一种常见恶性肿瘤，目前相关报道中引起胃癌的因素有很多，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活、遗传、环境、化学及病原体感染等，其中病原体感染主要包括幽门螺杆菌、人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)等[1,2]。HPV是一组无包膜的嗜上皮组织双链DNA病毒，可引起人类黏膜和皮肤的增生性病变，进而形成良性乳头状瘤及疣[3]。而研究显示，胃癌的早期发展大部分是由正常黏膜在多种诱因刺激下演变为癌前病变，最终发展为癌[4]。HPV在宫颈癌及癌前病变中的作用机制目前已被人们所熟知，并根据其在宫颈癌中的致癌性高低不同将其分为高危型(high risk, HR)-HPV和低危型(low risk, LR)-HPV,其中HR-HPV感染是导致宫颈癌及癌前病变发生的重要危险因素[5,6]。然而目前关于HPV在其他癌症中的研究相对较少。因此，本研究通过对112例胃癌患者进行HPV基因分型检测，分析胃癌患者中HPV不同亚型感染状况以及HPV基因分型与胃癌预后的关系，进而为胃癌的预防和治疗提供理论参考。

1、资料与方法

1.1资料

收集2015年2月—2017年10月于本院进行手术切除的246例胃癌患者的组织及临床资料，患者平均年龄为(60.87±11.45)岁，女性104例，男性142例；Lauren分型为肠型116例，弥漫型130例；肿瘤直径<5 cm 129例，≥5 cm 117例；高/中分化118例，低分化128例；无淋巴结转移146例，有淋巴结转移100例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期143例，Ⅲ+Ⅳ期103例。纳入标准：(1)符合国家卫生健康委员会制定的《胃癌诊疗规范》[7],且经组织病理检查证实；(2)均为首次确诊，临床资料齐全者；(3)入组前未接受过放疗、化疗或其他辅助治疗者；(4)患者本人知情同意，试验符合伦理学标准并经临床研究伦理委员会批准(批准号：CZY2015021)。排除标准：(1)标本质量较差者；(2)伴有其他恶性肿瘤疾病者；(3)伴有免疫缺陷疾病者；(4)标本采集前1周内使用过抗炎、抗生素、胃黏膜保护剂者。

1.2方法

1.2.1 HPV不同基因分型检测

收集胃癌患者组织标本，液氮中速冻，采用研钵将胃癌组织研磨至粉末状，采用基因组提取试剂盒(中国北京康为世纪生物科技有限公司)提取基因组DNA。采用HPV基因分型PCR检测试剂盒(中国深圳亚能生物技术有限公司)进行定性检测。严格按照试剂盒说明提供的方法操作。246例胃癌患者中，共检测到8种HR-HPV基因亚型和5种LR-HPV基因亚型。

1.2.2随访

246例胃癌患者术后5年内均获随访，术后第1个月随访1次，此后第1年～3年平均每3个月随访1次，4年～5年每6个月随访1次。其生存期从手术之日起计算，随访截止至2022年10月。

1.3统计学处理

所有统计数据均采用SPSS 23.0软件进行统计分析，计数资料以例(%)表示，组间比较采用卡方检验；采用Kaplan-Meier法分析胃癌患者预后与HPV18、HPV16阳性的关系，并绘制生存曲线；采用多因素Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1胃癌患者HPV感染情况

246例胃癌患者中，HPV感染阳性182例，阳性率为73.98%,HR-HPV阳性率为73.98%(182/246),LR-HPV阳性率为8.13%(20/246)。

2.2 HR-HPV和LR-HPV各基因亚型在胃癌患者中的分布情况

HR-HPV基因亚型中HPV18(39.84%)和HPV16(19.51%)的阳性率最高。LR-HPV基因亚型中HPV42(3.25%)的阳性率最高。见表1、表2。

表1 HR-HPV各基因亚型在胃癌患者中的分布情况[例(%)]

表2 LR-HPV各基因亚型在胃癌患者中的分布情况[例(%)]

2.3 HPV18、HPV16阳性与胃癌患者临床病理特征的关系

选取胃癌患者中阳性率最高的HPV18、HPV16进行进一步探究。结果显示，不同年龄、性别、Lauren分型、肿瘤直径、分化程度胃癌患者胃癌组织中HPV18及HPV16阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05),TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中HPV18及HPV16阳性率高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05),见表3。

表3 HPV18、HPV16阳性与胃癌患者临床病理特征的关系

2.4胃癌患者预后与HPV18、HPV16阳性的关系

Kaplan-Meier法分析HPV18、HPV16阳性与胃癌患者5年生存率的关系，结果显示，HPV18阴性组5年内生存率(77.70%,115/148)高于HPV18阳性组(50.00%,49/98)(χ2=20.361,P<0.05),HPV16阴性组5年内生存率(71.72%,142/198)高于HPV16阳性组(45.83%,22/48)(χ2=11.648,P<0.05)。见图1、图2。

图1 HPV18阳性及阴性胃癌患者生存曲线

图2 HPV16阳性及阴性胃癌患者生存曲线

2.5影响胃癌患者预后的多因素Cox回归分析

将胃癌患者是否死亡作为因变量，以Lauren分型、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期及HPV18、HPV16阳性为自变量进行多因素Cox回归分析，结果显示，TNM分期、HPV18阳性是胃癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)(表4)。

表4影响胃癌患者预后的多因素Cox回归分析

3、讨论

胃癌在消化道肿瘤中十分常见，因起病隐匿，目前缺乏较敏感的早期分子诊断标记物，许多患者一旦出现症状前来就诊，往往已是进展期[8]。尽管近年来胃癌的诊断及治疗技术在不断发展，但其5年生存率仍相对较低、临床预后仍不理想[9]。因此，早期明确其发生、进展机制及相关致病因素，可能对提高胃癌患者5年生存率有重要意义。研究显示，肿瘤病毒DNA、蛋白质可能通过结合某些与细胞凋亡相关的基因DNA片段，干扰其参与的复制、转录及信息传递，进而使细胞无法按正常程序死亡，最终向恶性化方向发展，导致癌症的发生[10,11]。

HPV是世界公认的可引起多种良、恶性肿瘤的主要病原体之一，其基因组主要编码包括E6、E7在内的6种早期蛋白及2种晚期蛋白(L1和L2),而E6、E7是HR-HPV致癌的根本所在[12,13]。近年来，消化道肿瘤与HPV感染的相关性已日益受到关注。左灵妮等[14]报道显示，结直肠癌患者中HPV16、HPV18感染较常见，80例患者病灶感染率分别为33.8%和37.5%。Li等[15]研究表明HPV18持续感染在食管上皮细胞恶性转化及癌变中发挥作用。但HPV不同亚型感染与胃癌相关性的报道相对较少，且国内外现有研究结论差异较大，因此目前尚无定论[16,17]。郭丹等[18]结果显示，72例胃癌患者HPV16/18阳性率为56.94%,本研究中HPV感染阳性率(73.98%,182/246)高于其报道中HPV16/18阳性率。其可能是由于本研究纳入病例数相对较多，且本研究检测的HPV基因亚型不仅限于HPV16/18。此外，检测结果的差异也可能是由检测手段、试剂盒(不同厂家)等造成，有待进一步扩大样本量，探究不同检测方法在检出HPV时的差异。既往报道表明，不同HPV基因亚型的致病力不同，其导致的病变类型、临床症状等均可能有差异。而本研究发现TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中HPV18及HPV16阳性率较高。结合HPV在癌症中的具体作用机制分析推测，机体感染HPV18和HPV16后，二者的DNA结合到与细胞凋亡相关的基因DNA片段中，使凋亡相关蛋白降解，进而造成细胞周期阻滞减弱，细胞无法正常程序性死亡，造成细胞的恶性转变增加，最终造成胃癌疾病进展。生存分析结果及多因素分析结果提示HPV18、HPV16检测有利于评估胃癌患者疾病进展，同时可辅助治疗、预测预后。

综上所述，本研究112例胃癌患者中，HPV18和HPV16的阳性率最高。HPV18和HPV16阳性与胃癌淋巴结转移、TNM分期及预后均有重要的联系。然而本研究纳入病例数不多且为单中心研究，入组胃癌患者均为本院手术患者，然而不同地区患者卫生状况、生活习惯等不同，这可能造成检测结果无法完全反映出更多胃癌患者中存在的HPV感染状况，且对最终分析结果同样造成一定程度的影响。

参考文献:

[3]杨与柔,柳欣林,王大宁,等.人乳头/病毒中和表位及抗体中和作用机制的研究进展[J].病毒学报,2019,35(1):168-174.

[5]孔艳青,张雁瑞,陈莹莹,等.2193例HPV感染类型与宫颈病变关系的相关研究[J].重庆医学,2020,49(3):409-412.

[7]国家卫生健康委员会.胃癌诊疗规范(2018年版)[J].中华消化病与影像杂志(电子版),2019,9(3):118-144.

[10]李涛,吕加令.非小细胞肺癌患者HPV感染与RACK1蛋白表达的相关性研究[U].中华医院感染学杂志,2019,29(18);2767-2770.

基金资助:湖北省卫生健康委科研项目(WJ2019Q030);

文章来源:卢冬冬,程小河,戴梦姗等.HPV不同亚型感染状况及基因分型与胃癌病变､预后的相关性研究[J].中国卫生检验杂志,2023,33(13):1588-1591+1596.