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胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白表达变化分析

2023-07-13 107 上传者：管理员

摘要：探讨胃癌患者血清长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA MALAT1)、GM2神经鞘脂激活蛋白(GM2AP)、铁蛋白表达的变化及意义.方法选取84例胃癌患者为胃癌组，56例胃良性病变患者为胃良性病变组，健康志愿者50名为健康对照组.采集空腹肘静脉血分离血清，实时荧光定量PCR检测血清lncRNA MALAT1水平，酶联免疫吸附法测定血清GM2AP水平，免疫比浊法测定血清铁蛋白水平.收集胃癌患者的分化程度、肿瘤直径、TNM分期、浸润程度、血管侵犯情况、神经浸润情况，出院后进行1 a随访，记录不良预后情况.结果胃癌组患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显高于胃良性病变组和健康对照组(P<0.05);血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平在胃良性病变组与健康对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).浸润程度黏膜下、有血管侵犯、有神经浸润的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显升高(P>0.05);

关键词：
GM2神经鞘脂激活蛋白
临床症状
胃癌
铁蛋白
长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1
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我国是胃癌的高发地区，胃癌发病率居全球第二位[1].胃癌发病早期患者临床症状不明显，诊断率较低，死亡率较高[2],因此，准确评估胃癌患者病情的严重程度和预后水平对治疗方案的合理制定具有重要意义.胃镜是目前胃癌诊断的主要手段，但胃镜检查对操作人员技术要求较高[3],因此，探索高敏感性和特异性的血清肿瘤标志物对提高胃癌诊断率和病情评估水平具有重要意义.长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA MALAT1)可通过调控细胞周期和细胞凋亡参与多种恶性肿瘤的发生与发展[4],但其在胃癌中的研究仍十分少见.GM2神经鞘脂激活蛋白(GM2AP)是糖蛋白的一种，参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭等过程[5];铁蛋白分布于人体肝脏、骨髓等脏器中，与肿瘤术后复发可能存在关系[6].本研究探讨了胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平表达变化及意义.

1、对象与方法

1.1研究对象

选取2020年3月—2021年7月哈尔滨医科大学附属第四医院收治的胃癌患者84例为胃癌组，其中，男44例，女40例；年龄41～73岁，平均(56.94±6.08)岁.收集胃良性病变患者56例为胃良性病变组，均经胃镜检查确诊为胃良性病变，其中男30例，女26例；年龄43～70岁，平均(57.31±5.79)岁.收集同期健康志愿者50名为健康对照组，均无典型慢性病史，重要系统和脏器功能正常，其中男27名，女23名；年龄41～70岁，平均(56.68±6.52)岁.性别、年龄在3组间比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性.本研究经医院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书.

入选标准：诊断标准参考《胃癌诊疗规范(2011版)》,经胃镜和组织病理学检查确诊为胃癌；符合手术适应证，术前无放化疗等抗肿瘤治疗史；能够正常沟通，配合完成随访.

排除标准：有肝、肾等重要脏器功能异常者；存在严重感染性疾病者；合并其他类型恶性肿瘤者.

1.2主要试剂与仪器

RNA提取试剂盒(miScript SYBR Green Mix,北京安诺伦生物科技有限公司);GM2AP酶联免疫检测试剂盒(江苏美正生物科技有限公司);铁蛋白免疫比浊检测试剂盒(浙江康特生物科技有限公司);实时荧光定量PCR(赛默飞世尔科技公司);ER-504型多功能酶标仪(江苏英诺华医疗技术有限公司).

1.3方法

1.3.1标本采集与处理

胃癌组和胃良性病变组患者纳入本研究次日采集空腹肘静脉血5 mL,置于肝素抗凝管中，室温静置20 min, 3 000 r/min 4℃恒温离心10 min,离心半径设定为13.5 cm,收集上层血清转移到EP管中，-80℃保存待测.

1.3.2实时荧光定量PCR检测血清lncRNA MALAT1水平

使用RNA提取试剂盒提取3组受试者血清标本的总RNA,反转录为cDNA.实时荧光定量PCR仪扩增lncRNA MALAT1,反应体系共20μL:cDNA按1∶1稀释后取其中2μL,miScript SYBR Green Mix 10μL,上下游引物各1μL,双蒸馏水6μL.lncRNA MALAT1上游引物5′-AAAGACCCAGGAC AATTCATT-3′,下游引物5′-TTTACCTAGTTTCCT CAGCAC-3′;内参GAPDH上游引物5′-GGTTTCAC TGGTCCCCTGCCAAG-3′,下游引物5′-TTAAGTTA GGTCCGTCCGGAGGC-3′.相对定量法测定lncRNA MALAT1表达水平.

1.3.3血清GM2AP、铁蛋白水平检测

取3组受试者的血清标本，应用酶联免疫吸附法测定血清GM2AP水平，应用酶标仪读取450 nm处各检测孔的吸光度值，用绘制的标准曲线计算GM2AP含量；应用免疫比浊法测定血清铁蛋白水平.

1.3.4资料收集与随访

使用自制调查问卷收集3组受试者的人口学特征及胃癌患者的分化程度、肿瘤直径、TNM分期、浸润程度、血管侵犯情况、神经浸润情况.出院后对胃癌患者进行1 a随访，记录不良预后情况，包括肿瘤转移扩散、死亡等，分为预后不良组和预后良好组.

1.4统计学分析

应用SPSS 25.0对数据进行处理与统计学分析.符合正态分布的计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；两组间样本均数比较采用两独立样本t检验；胃癌患者预后影响因素进行逐步多因素Logistic回归分析，将单因素统计中P<0.05的变量纳入到多因素logistics回归分析；术前血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白对胃癌患者预后的预测价值进行ROC曲线分析.P<0.05为差异具有统计学意义.

2、结果

2.1各组血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

本研究结果显示，胃癌组患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显高于胃良性病变组和健康对照组(P<0.05);血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平在胃良性病变组与健康对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).见表1.

2.2不同临床病理特征的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

本研究结果显示，血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平在不同分化程度、TNM分期、浸润程度、血管侵犯、神经浸润的胃癌患者之间比较差异均具有统计学意义(P<0.01);浸润程度黏膜下、有血管侵犯、有神经浸润的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显升高(P<0.01);随着分化程度的降低、TNM分期的增加，血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显升高(P<0.01).见表2.

2.3不同预后水平的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

随访1 a期间，84例胃癌患者中预后不良25例(29.76%),预后良好59例(70.24%).预后不良组胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显高于预后良好组胃癌患者(P<0.01).见表3.

表1各组血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

表2不同临床病理特征的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

表3不同预后水平的胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平

2.4胃癌患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析

以胃癌患者预后水平为因变量(良好=1,不良=0),以分化程度、TNM分期、浸润程度、血管侵犯以及lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平为自变量，赋值见表4.进行多因素Logistic回归分析显示，TNM分期、浸润程度以及lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平是胃癌患者预后的独立影响因素.见表5.

表4自变量赋值情况

表5胃癌患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析

2.5术前血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平对胃癌患者预后的预测价值

以血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白预测胃癌患者预后的敏感度为纵坐标，以1-特异度为横坐标，构建ROC曲线，结果显示，血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平对胃癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05).将上述指标纳入Logistic回归模型，通过回归系数显示各指标联合检测的预测价值最高(AUC=0.936),敏感度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测(P<0.05).见图1、表6.

图1术前血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平对胃癌患者预后预测价值的ROC曲线

表6术前血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平对胃癌患者预后的预测价值

3、讨论

胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤，发病早期临床症状不明显，误诊率较高，致使患者错失最佳治疗时机，这是不良预后的主要原因之一[7],早发现并准确评估病情是改善疗效、降低死亡率的关键[8].

手术是治疗胃癌最有效的手段，术前准确评估患者的病情和预后对治疗方案的合理制定具有积极的指导意义[9].临床上主要通过胃镜检查诊断胃癌，并评估病变严重程度，但胃镜检查对操作人员技术要求较高[3].血清肿瘤标志物具有检查费用低、操作方便、易重复等优点，但目前临床常用的胃癌血清肿瘤标志物的敏感度和特异度均不够理想，仍需进一步探索新的血清肿瘤标志物[10].lncRNA属于非编码RNA,虽然不参与编码蛋白质，但能够调控恶性肿瘤的发生与发展[11].lncRNA MALAT1最先发现于非小细胞肺癌，具有高度保守性，在乳腺癌、肺癌、宫颈癌等多种恶性肿瘤中高表达[12,13],但在胃癌中表达特点及作用的研究仍十分少见.GM2AP属于GM2辅助因子家族，与溶酶体作用能够产生GM3,与肿瘤细胞表面的神经节苷脂功能障碍密切相关[14].铁蛋白是广泛存在于人体肝、肾、脾等多种脏器中的含铁蛋白质，其中以肝脏、脾脏含量最多[15].血清铁蛋白水平升高是铁蛋白合成增加或清除障碍所致，在肺癌、肝癌、肝癌等恶性肿瘤细胞中合成的铁蛋白增加，使血清中铁蛋白水平升高[16].

本研究结果显示，胃癌组患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显升高，且与分化程度、TNM分期、浸润程度、血管侵犯、神经浸润密切相关.提示胃癌患者中lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白高表达，且与临床病理指标密切相关.有研究[17]使用shRNA转染非小细胞肺癌A549细胞下调MALAT1表达，结果显示，凋亡抑制基因Bcl-xL、Bcl-2表达水平出现不同程度的下降，促细胞凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达水平出现不同程度的升高，提示MALAT1在非小细胞肺癌中发挥抗凋亡作用，但其在胃癌中作用的分子机制仍需进一步深入研究.GM2AP能够水解血小板活化后产生的细胞因子，发挥免疫抑制作用，造成肿瘤细胞的免疫逃逸[18].近年来研究[19]发现，GM2AP可通过下调胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路相关因子的活性，抑制人体正常细胞对糖的摄取和消化，促进肿瘤细胞糖的供给，为肿瘤复发供能.铁蛋白水平升高可抑制PHA诱发的混合淋巴细胞作用，是重要的免疫抑制细胞因子[20].进一步分析显示，预后不良组胃癌患者血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平明显高于预后良好组(P<0.01),TNM分期、浸润程度以及lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白水平是胃癌患者预后的独立影响因素.

综上，术前血清lncRNA MALAT1、GM2AP、铁蛋白联合检测对胃癌患者预后具有较高的预测价值，可作为参考指标用于手术方案的选择和术后综合治疗方案的制定，以提高胃癌患者的预后水平.

参考文献:

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