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GBE调节高脂血症大鼠模型血脂的有效剂量

2021-01-25 710 上传者：管理员

摘要：目的：探索银杏叶提取物（ginkgoleafextracts,GBE）调节高脂血症大鼠模型血脂的有效剂量。方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组、DBE(1.2、3.8、12.0、37.9、119.8、378.7mg/kg）组、非诺贝特（20mg/kg）组。除对照组，其余大鼠以高脂饲料饲养1周建立高脂血症大鼠模型。除对照组和模型组，其余各组大鼠ig相应药物，1次/d，连续6周。每2周检测大鼠血清中三酰甘油（triglycerides,TG）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C）水平。结果：给予GBE2、4、6周后对大鼠调血脂的最低有效剂量分别为37.9、12.0、3.8mg/kg；给予GBE(119.8、378.7mg/kg)4、6周后对大鼠的调血脂作用无显著差异。结论：GBE用于短期治疗高脂血症的有效剂量为37.9～119.8mg/kg（相当60kg成人每天用量为377.6～1193.3mg），用于预防或保健作用的最低剂量为3.8mg/kg（相当60kg成人每天用量为37.8mg）。

关键词：
三酰甘油
有效剂量
药剂学
银杏叶提取物
高脂血症
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银杏叶提取物（ginkgoleafextracts,GBE）作为食品补充剂，在美国连续多年处于销量前10名，2018年银杏叶制剂、保健食品和化妆品的全球市场总销售额超过70亿美元。文献报道[1]的GBE临床前药效学研究剂量和临床使用剂量范围极大，GBE调节大鼠血脂的最低剂量为4mg/kg，最高剂量为5000mg/kg。美国国立卫生研究院（NIH）数据库显示，GBE作为膳食补充剂每人的最小剂量为2.5mg/d，最大剂量为660mg/d。我国原国家药品食品监督管理局数据库显示，GBE作为药品的剂量为17.5～240mg/d，作为保健食品的剂量为20～190mg/d。GBE引发的不良反应如内出血等，提示应关注GBE临床使用的剂量和疗程，其不良反应与剂量和疗程呈正相关[2,3,4,5]。本研究对GBE调血脂作用剂量进行探索，旨在为其临床合理使用提供依据。

1、材料

1.1药品与试剂

GBE（棕褐色粉末，批号GBE-202-201401003）含总黄酮醇苷25.57%、萜类内酯6.62%、银杏总酸1.24×10-6，购自浙江绍兴东灵保健食品有限公司；非诺贝特（批号18862，规格200mg/粒）购自法国AbottLabratoriesLimited公司；三酰甘油（triglycerides,TG）测定试剂盒（批号07010/00000210）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）测定试剂盒（批号07014/00000267）、低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C）测定试剂盒（批号17411/00000152）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C）测定试剂盒（批号17410/00000156），购自德国DiaSysDiagnosticSystemsGmbH公司；高脂饲料（添加20.0%蔗糖、15.0%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠），购自浙江省实验动物中心。

1.2动物

清洁级SD雄性大鼠100只，7周龄，体质量190～240g，由浙江省实验动物中心提供，动物合格证号1609180003。动物饲养于SPS级动物实验室，温度20～26℃，相对湿度40%～70%，光照明暗交替各12h，通风每小时大于15次，自由摄食与饮水，动物实验设施条件合格证号SYXK（浙）2013-0188。动物实验操作遵循浙江省中药研究所实验动物管理和使用规定，符合3R原则。

1.3仪器

7020全自动生化分析仪（日本日立株式会社）；L-550离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

2、方法

2.1剂量设定依据

GBE临床用于调血脂的剂量中位数约为120mg/d，根据60kg成人体质量的体表面积折算，相当于200g大鼠的剂量为12mg/kg。以12mg/kg作为中间剂量，以3.16倍级间距向下设置2个剂量：3.8、1.2mg/kg；向上设置3个剂量：37.9、119.8、378.74mg/kg[6]。

2.2药物配制

称定0.12、0.38、1.20、3.79、11.98、37.87gGBE粉末，加1000mL蒸馏水，搅拌混匀，分别配制成质量浓度为0.12、0.38、1.20、3.79、11.98、37.87mg/mL的溶液，于4℃保存。称定2g非诺贝特，溶于1000mL蒸馏水，配制成质量浓度为2mg/mL的溶液，于4℃冰箱保存。

2.3高脂血症大鼠模型的建立、分组与给药

10只SD大鼠给予基础饲料作为对照组，其余大鼠给予高脂饲料1周后，眼内眦采血，4000r/min离心10min，分离血清，测定血清中TC、TG水平。剔除血清TG<3.0mmol/L、TC<2.0mmol/L的10只大鼠，将余下大鼠按TG、TC水平随机分成模型组，GBE(1.2、3.8、12.0、37.9、119.8、378.7mg/kg，按体表面积折算相当于60kg成人每天用量为12.0、37.8、119.5、377.6、1193.3、3770.9mg）组和非诺贝特（20mg/kg，相当于人用剂量的6倍）组，每组10只。分组后各给药组与模型组比较TC、TG水平均无显著性差异，与对照组比较TC、TG水平有显著差异，表明模型制备成功[7]。

对照组大鼠给予维持饲料，其余各组给予高脂饲料。每天上、下午，各给药组ig相应药物（5mL/kg），模型组与对照组ig等体积生理盐水，连续6周，每周测定并记录大鼠体质量。实验结束，麻醉后脱颈椎处死。

2.4大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平的检测

每2周测定1次大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。给药1h后，各组大鼠眼内眦采血，4000r/min离心10min，分离血清，采用全自动生化分析仪测定血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。

2.5统计分析

采用SPSS16.0软件进行数据统计分析。采用方差分析（One-wayANOVA），方差齐时，用LSD检验；方差不齐，用Dunnettt检验。统计结果用s表示。

3、结果

3.1GBE对高脂血症大鼠体质量的影响

如表1所示，各组大鼠体质量无显著性差异，表明GBE对大鼠体质量无明显影响。

3.2GBE对高脂血症大鼠血清中TG和TC水平的影响

如图1、2所示，与对照组比较，模型组大鼠血清TG、TC水平显著升高（P<0.001）。与模型组比较，非诺贝特组第2、4、6周TG、TC水平均显著降低（P<0.01、0.001);GBE(37.9、119.8、378.7mg/kg）组自第2周血清TG、TC水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001），呈剂量相关性，但第4、著降低（P<0.01、0.001);GBE(37.9、119.8、378.7mg/kg）组自第2周血清TG、TC水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001），呈剂量相关性，但第4、6周无明显剂量相关性；GBE(12mg/kg）组自第4周TG、TC水平均显著降低（P<0.05、0.01、0.001);GBE(3.8mg/kg）组自第6周TG、TC水平均显著降低（P<0.05、0.01）。

表1GBE对高脂血症大鼠体质量的影响

图1GBE对高脂血症大鼠血清TC水平的影响

图2GBE对高脂血症大鼠血清TG水平的影响

3.3GBE对高脂血症大鼠血清HDL-C、LDL-C水平的影响

如图3、4所示，与对照组比较，模型组大鼠血清HDL-C水平显著降低（P<0.05),LDL-C水平显著升高（P<0.001）。与模型组比较，非诺贝特组第6周HDL-C水平显著升高（P<0.01），第4、6周LDL-C显著降低（P<0.001）。GBE(119.8、378.7mg/kg）组自第2周血清HDL-C水平显著升高（P<0.01、0.001),LDL-C水平显著降低（P<0.01、0.001);GBE(37.9mg/kg）组第4周血清HDL-C水平显著升高（P<0.05、0.01），自第2周LDL-C水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001);GBE(12mg/kg）组第6周血清HDL-C水平显著升高（P<0.05),LDL-C水平显著降低（P<0.01）。

图3GBE对高脂血症大鼠血清HDL-C水平的影响

图4GBE对高脂血症大鼠血清LDL-C水平的影响

4、讨论

本研究结果表明，给药第2周，GBE(37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低，GBE(119.8、378.7mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，呈剂量相关性。给药第4周，GBE(12.0、37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清TG、TC水平显著降低，GBE(37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，血清LDL-C水平显著降低。给药第6周，GBE(3.8、12.0、37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清TG、TC水平显著降低，GBE(37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清HDL-C水平显著升高，GBE(12.0、37.9、119.8、378.7mg/kg）组血清LDL-C水平显著降低。给药第4、6周，GBE(119.8、378.7mg/kg）组血清TG、TC水平与剂量无明显相关性。以上结果表明，GBE用药时间对药效影响较大，用药时间越长，药效越明显。用药2周GBE的最低有效剂量为37.9mg/kg，用药4周GBE的最低有效剂量为12.0mg/kg，用药6周GBE的最低有效剂量为3.8mg/kg。当疗程大于4周，且剂量大于119.8mg/kg时，提高剂量并不能增强疗效。

GBE组和非诺贝特组大鼠血清TC、TG水平未恢复到正常水平，可能与模型大鼠用药过程给予高脂饲料有关，提示适当控制饮食有益于调血脂。Drago等[8]研究结果显示，与每日1次口服80mgGBE比较，成人每日2次口服40mgGBE，血药浓度与时间曲线下面积（AUC）、半衰期（t1/2）和平均滞留时间（meanresidencetime,MRT）均明显提高，表明每日2次比每日1次给药更有利于发挥药效。本研究的最低有效剂量为3.8mg/kg，低于文献报道的最低有效剂量[9,10,11,12,13]，可能与每日给药2次且给药时间较长有关。

GBE的临床不良反应涉及全身各系统，如出血（严重颅内出血、严重蛛网膜下腔血、自发性前房出血、严重双侧硬膜下血肿），过敏反应，高血压，粒细胞减少，血管红肿，癫痫发作，中枢神经兴奋，急性肠胃炎等[13]。因此，GBE用于临床治疗时剂量不宜大于119.8mg/kg（根据60kg成人体质量的体表面积折算，每日用量为1193.3mg），用于预防和保健时用量可低至3.8mg/kg（根据60kg成人体质量的体表面积折算，每日用量为37.8mg）。

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