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苹果酸舒尼替尼胶囊在中国健康受试者中的生物等效性研究

2023-10-14 272 上传者：管理员

摘要：评估在空腹、餐后条件下健康受试者口服苹果酸舒尼替尼胶囊受试制剂与参比制剂的生物等效性。方法本试验采用随机、开放、单剂量、两周期、两序列、交叉的试验设计。空腹和餐后组各纳入24例健康受试者，分别在空腹或餐后状态下单剂量口服苹果酸舒尼替尼胶囊受试制剂或参比制剂50 mg。用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对血浆中舒尼替尼的浓度进行测定。用Phoenix WinNolin 6.4和SAS 9.4软件进行药代动力学参数的计算和生物等效性的评价。结果空腹组受试者口服受试制剂和参比制剂后主要药代动力学参数：Cmax分别为(34.58±8.12)和(33.41±6.41)ng·mL-1,tmax分别为7.00(4.00,10.00)和6.00(5.00,10.00)h, AUC0-72 h分别为(1 166.99±296.63)和(1 128.93±280.52)ng·h·mL-1,t1/2分别为(32.68±7.74)和(30.53±7.27)h。

关键词：
生物等效性
苹果酸舒尼替尼胶囊
药代动力学
酪氨酸激酶抑制药
食物影响
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舒尼替尼(sunitinib)是由美国辉瑞公司研发的一种吲哚酮类口服小分子多靶点酪氨酸激酶抑制药(tyrosine kinase inhibitors, TKI)。2016年首次获得美国食品药品管理局(Food and Drug Administration, FDA)批准上市，用于治疗甲磺酸伊马替尼治疗失败或不能耐受的胃肠间质瘤及不能手术的晚期肾细胞癌患者[1],并于2007年在中国上市。舒尼替尼作为一种治疗晚期实体瘤的新型酪氨酸激酶抑制药[2],已有临床试验证明其对肾细胞癌、肝细胞癌、乳腺癌等癌症具有良好的抗肿瘤活性[3]。本研究以齐鲁制药(海南)有限公司研制的苹果酸舒尼替尼胶囊为受试制剂，以辉瑞公司生产的苹果酸舒尼替尼为参比制剂，评价两种制剂在中国健康受试者中的生物等效性和安全性。

1、材料、对象与方法

1材料

药品与试剂受试制剂：苹果酸舒尼替尼胶囊，规格：每粒50 mg,含量：100.1%,批号：DE4A8001,齐鲁制药(海南)有限公司生产；参比制剂：苹果酸舒尼替尼胶囊(商品名Sutent®),规格：每粒50 mg,含量：99.4%,批号：038FB,意大利Pfizer Italia S.r.l.生产。内标：Sunitinib-d10,纯度：98%,批号：7-TMH-117-2,加拿大Toronto Research Chemicals公司生产。

仪器UFLC 30-AD超快速液相系统，日本岛津公司产品；AB Sciex Triple QuadTM API 5500质谱仪，美国应用生物系统公司产品。

2受试者选择

本研究经济南市中心医院医学伦理委员会批准(伦理批号：济中心伦理临审2018-099-01号；临床试验登记号：CTR20182541)。所有受试者均签署知情同意书。本研究共入组48例健康受试者，其中空腹试验24例，男20例、女4例，年龄(29.00±8.54)周岁，身高(168.98±8.15)cm,体质量(65.65±7.74)kg,体质量指数(22.99±2.38)kg·m-2;餐后试验24例，男21例，女3例，年龄(30.10±8.79)周岁，身高(168.23±8.16)cm,体质量(65.53±9.50)kg,体质量指数(23.12±2.53)kg·m-2。

入选标准①年龄为18～50岁受试者(含边界值);②男性受试者体质量不低于50 kg,女性受试者体质量不低于45 kg,体质量指数在18.0～28.0 kg·m-2(含临界值);③受试者(包括男性受试者)在研究结束后6个月内无妊娠计划且自愿采取有效避孕措施等。

排除标准①体格检查、生命体征检查、心电图或临床实验室检查等检查出现临床意义的异常情况；②有苹果酸舒尼替尼或其辅料过敏史、有影响药物吸收的胃肠道疾病史、酗酒史；③女性受试者正处在哺乳期或妊娠检查结果阳性；④乙型病毒性肝炎表面抗原阳性、丙型病毒性肝炎抗体阳性、人类免疫缺陷病毒抗体阳性或梅毒抗体阳性；⑤在服用研究药物前14天内服用了任何处方药等。

3分组、给药方法与血样采集

本研究按单中心、随机、开放、单剂量、两周期、两序列、交叉设计[4]。

本试验分为空腹组和餐后组。2组受试者在服药前空腹至少10 h。分别在空腹或高脂餐后交叉口服受试制剂或参比制剂50 mg,温水240 mL送服。给药前和给药后1 h内禁水，并在给药后4和10 h进食统一的午餐和晚餐，两周期间清洗期21 d。

空腹和餐后试验均分别在每周期给药前0 h(服药前1 h内)和服药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、16、24、36、48和72 h共20个时间点采集上肢静脉血至含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管中，每个时间点采集4 mL血液。并在2～8℃下，以1 700×g离心10 min后在冰浴下将血浆样品分成2份，储存于-80℃冰箱，用于药代动力学参数测定。

4测定方法与血浆样品预处理

色谱条件色谱柱：ACE Excel 3 C18-AR(2.1 mm×50.0 mm, 3μm);流动相：水含0.4%甲酸(A)-乙腈(B);流速0.5 mL·min-1,运行时间3 min;柱温40℃;进样量：5μL。梯度洗脱程序：0.0～1.1 min, 35% B;1.1～1.2 min, 35%→100% B;1.2～1.4 min, 100% B;1.4～1.5 min, 100%→5% B;1.5～1.7 min, 5% B;1.7～1.8 min, 5%→100% B;1.8～2.0 min, 100%→10% B;2.0～2.1 min, 10%→35% B;2.1～3.0 min, 35% B。

质谱条件离子化方式：电喷雾离子化(正离子模式);扫描模式：多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM);离子源温度：500℃;碰撞气压力：62.05 kPa;气帘气压力：137.89 kPa;离子源气体1压力：344.74 kPa;离子源气体2压力：344.74 kPa;离子源喷雾电压：5 000 V;入口电压：10 V;出口电压：13 V;采集时间：3.0 min;舒尼替尼和内标的检测离子对分别为m/z 399.30→283.20和m/z 409.30→283.10。

血浆样品预处理样品完全融化后，涡旋混匀30 s左右。移取样品(空白样品和内标空白样品取空白人血浆)50μL至96孔板(Plate-1)中。加入10 ng·mL-1内标工作液20μL,混匀。加入乙腈600μL,加盖96孔板盖涡旋3 min;在4℃下，以3 200×g离心5 min。取上清液100μL至96孔板(Plate-2)中，40℃氮气流吹干。加入复溶液(1%三氟乙酸水溶液-乙腈=70∶30, v/v)200μL,涡旋3 min,进行LC-MS/MS分析。

5方法学考察

专属性取6例未混合样品的人空白血浆，按照“血浆样品预处理”项下进行操作，分别进行不加入内标的空白样品检测和最低定量下限状态的检测，待测物的空白基质和定量下限保留时间分别为1.65和0.99 min,内标的空白基质和定量下限保留时间分别为1.69和0.97 min。结果表明血浆内源性物质不会对待测物和内标造成影响，色谱结果见图1。

标准曲线与定量下限用“血浆样品预处理”项下进行操作，空白血浆制备质量浓度为0.20、0.40、1.00、5.00、10.00、50.00和100.00 ng·mL-1的标准曲线样品，测得舒尼替尼的定量下限为0.20 ng·mL-1,线性范围0.20～100.00 ng·mL-1。以舒尼替尼峰面积与内标峰面积之比对浓度进行线性回归，选取权重因子为1/x2,舒尼替尼回归方程为y=1.32×10-1x-0.14×10-2(R2=0.997 2)。

精密度与回收率配制定量下限、低、中、高(0.20、0.60、8.00、80.00 ng·mL-1)4个质量浓度的舒尼替尼的质控样品，每种浓度测定3个批次。按照“血浆样品预处理”项下操作，以当日测得的浓度计算日内、日间精密度(relative standard deviation, RSD)。用低、中、高种质量浓度水平的质控样本(0.60、8.00、80.00 ng·mL-1)测得的人血浆样品加内标的峰面积比，与空白人血浆样品加待测物和内标后测得的峰面积比进行比较，计算回收率，结果见表1。

表1用液相色谱-串联质谱检测舒尼替尼在血浆中的精密度和回收率(n=6)

基质效应取6个批次空白人血浆，分别考察，低、中、高3种质量浓度(0.60、8.00、80.00 ng·mL-1)的舒尼替尼在血浆基质中存在与否时色谱峰响应比值。内标归一化基质效应因子是待测物基质效应与内标基质效应之比。结果显示，舒尼替尼内标归一化的基质效应均为101.00%,变异系数均不超过1.41%。

稳定性血浆样品在室温条件下24 h内稳定；人血浆-80℃条件下3次反复冻融稳定；舒尼替尼储备液在室温遮光条件下放置7 h,在-10～-35℃条件下储存41 d均稳定；舒尼替尼工作液在室温遮光条件下放置6 h,在-10～-35℃条件下储存41 d均稳定。

6统计学处理

血药浓度数据用Phoenix WinNolin软件(V6.4版本)进行非房室模型药代动力学参数的计算分析，包括：Cmax、tmax、AUC0～72 h、t1/2、λz等。用SAS V9.4统计软件用双单侧t检验及置信区间法对药代动力学参数展开生物等效性评价。

2、结果

1血药浓度-时间曲线

空腹和餐后试验同时筛选，共筛选102例受试者，共入组48例受试者。空腹试验入组24例受试者，餐后试验入组24例受试者。餐后试验中1例受试者(RT组)随机后未给药，没有继续进行试验；2012受试者(TR组)、2015受试者(TR组)第二周期给药前退出试验；2015在退出试验后因失访未进行安全性检查。所有受试者空腹或餐后状态下口服苹果酸舒尼替尼的参比制剂和受试制剂50 mg,服药后的平均血药浓度-时间曲线见图2。

2药代动力学参数

健康受试者空腹或餐后状态下单次口服苹果酸舒尼替尼胶囊受试制剂和参比制剂，血浆中舒尼替尼的主要药代动力学参数见表2。

3生物等效性评价

空腹试验和餐后试验中受试制剂和参比制剂的Cmax和AUC0～72 h在药物之间和服药周期之间差异均无统计学意义(均P>0.05)。空腹组Cmax和AUC0～72 h的几何均值比的90%置信区间分别为97.95%～107.31%和98.09%～107.90%;餐后组Cmax和AUC0～72 h几何均值比的90%置信区间分别为96.56%～104.42%和96.11%～100.96%。2种制剂均在80.00%～125.00%,且把握度均>0.8,2种制剂具有生物等效性。

4安全性评价

空腹试验纳入安全性分析数据集的24例受试者中，共有8例受试者发生11次不良事件，不良事件发生率是33.33%。其中服用受试制剂后7例受试者共发生7次不良事件，不良事件发生率为29.16%;服用参比制剂后3例受试者共发生4次不良事件，发生率为12.50%。空腹试验无导致受试者退出的不良事件，生命体征、心电图及体格检查均无异常有临床意义结果报告。所有不良事件均随访至转归正常。

餐后试验中纳入安全性分析数据集的23例受试者中，有13例受试者共发生22次不良事件，不良事件发生率为56.52%。其中服药前有1例受试者发生1次不良事件(严重程度为Ⅱ级，为上呼吸道感染);服用受试制剂后8例受试者共发生13次不良事件，不良事件发生率为34.78%,有1例受试者发生导致退出的不良事件，发生率为4.34%,有2例受试者发生2次严重程度为Ⅱ级的不良事件(为慢性胃炎，腹泻),其余不良事件的严重程度均为Ⅰ级；服用参比制剂后4例受试者共发生8次不良事件，发生率为17.39%,不良事件严重程度均Ⅰ级，无导致退出的不良事件。试验中未发生严重不良事件，所有不良事件的严重程度均为Ⅰ级到Ⅱ级，所有不良事件均随访至转归正常。

3、讨论

以往研究显示，舒尼替尼的Cmax和AUC个体内变异率在5.1%～9.8%[5]。本研究结果表明，舒尼替尼的Cmax和AUC个体内变异率在4.6%～9.6%内，与文献报道较一致。

以50 mg剂量给药时，AUC0-72 h约为12.5 mg给药剂量时的4～6倍，表明舒尼替尼的血药浓度与其给药剂量呈正相关性。国外一项对于舒尼替尼的临床试验研究结果表明，当服用剂量为50 mg·d-1时，药物不良反应较轻，且舒尼替尼具有更好的疗效[1]。本研究以舒尼替尼50 mg作为给药剂量，可以在保证安全性的前提下更大程度上获得舒尼替尼的最佳药物浓度，达到最佳治疗效果。

本研究结果表明，在空腹和餐后状态下口服舒尼替尼，参比制剂和受试制剂有相似的吸收速度和程度，舒尼替尼的达峰时间和半衰期与既往关于舒尼替尼的药代动力学研究是相似的。从药代动力学参数来看，食物对于舒尼替尼的药代动力学参数略有影响，这与BELLO等[7]关于食物对舒尼替尼影响的研究相似，但这种影响不会对舒尼替尼的生物等效性造成偏差。此外，有研究认为，受试者的年龄、体质量、性别对舒尼替尼的药代动力学没有影响[8]。一项对于舒尼替尼药物不良反应的临床研究表明，舒尼替尼最常见的药物不良反应为皮肤系统与消化道系统疾病，本研究中慢性胃病与腹泻的药物不良反应与之相吻合[9]。有报道指出舒尼替尼可能存在软组织肉瘤患者异常子宫出血的风险[10],但本研究中未观察到发生此类不良事件。2种制剂具有生物等效性，安全性良好，这能为仿制药的一致性评价提供更好依据。

参考文献:

[4]国家药品监督管理局药品审评中心.以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则[EBIOLJ.2016-03-08 [2023-05-20].

[5]买佳佳，张雪媛，张洪，等.苹果酸舒尼替尼胶囊在中国健康受试者的生物等效性研究及食物对其药代动力学影响[J].中国新药杂志，2020,29(17):1987-1992.

[6]杨梅，汤致强.苹果酸舒尼替尼胶囊[J].中国新药杂志，2009,18(4):283-285.

[10]孟慧杰，席庆，胡永芳.舒尼替尼致软组织肉瘤患者异常子宫出血病例分析[J].中国临床药理学杂志，2020,36(11):1580-1582.

文章来源:宋元明,姜雨,顾兴丽等.苹果酸舒尼替尼胶囊在中国健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2023,39(19):2824-2828.