糖尿病的患病率呈持续上升态势，预计糖尿病年龄标化患病率在2030年和2045年分别为9.2%和9.6%[1]。糖尿病不仅严重危害人类健康，而且给家庭和社会带来极大的经济负担，因此降糖药的研发极其重要。由瑞士诺华有限公司研发的维格列汀可用于糖尿病患者的全程治疗，是国内适应证最广泛的二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4,DPP-4)抑制药之一[2]。2007-09-28,诺华公司宣布其研制开发的维格列汀(Vildagliptin, 商品名：佳维乐/GALVUS®)获得欧盟委员会批准，并在爱尔兰、27个欧盟国家及挪威上市，2011年8月在我国批准进口[3-4]。本研究通过比较餐后给药条件下维格列汀受试制剂(test, T)和参比制剂(reference, R)在健康成年人群中吸收程度和速度的差异，评价其人体生物等效性及安全性，以期为维格列汀片临床用药提供参考和依据。

一、材料、对象与方法

1 药品与仪器

T: 维格列汀片，规格：每片50 mg, 批号：203200501,山东威智百科药业有限公司生产；R:维格列汀片(商品名：佳维乐/ GALVUS®),规格：每片50 mg, 批号：BPF09,瑞士Novartis Europharm Ltd.生产。维格列汀，纯度：99.6%,批号：101002-200701,购自中国食品药品检定研究院；维格列汀-d7(内标),化学含量：98.2%,同位素含量：96.7%,批号：2203-082A4,购自加拿大TLC Pharmaceutical Standards。

LC-20A高效液相色谱仪，日本SHIMADZU公司产品；4000 Q TRAP三重四极杆液质联用仪，美国SCIEX公司产品。

2 受试者选择

本试验经广州中医药大学第一附属医院伦理委员会批准(伦理批号： ZYYEC【2020】033,临床试验备案号：202100095-01)。所有受试者均签署知情同意书。本试验共入组24例，其中男性20例、女性4例，平均年龄为(26.25±6.10)岁，平均身高为(167.96±8.68)cm, 平均体质量为(60.39±8.71)kg, 平均体质量指数(body mass index, BMI)为(21.32±1.52)kg·m-2。

入选标准①年龄为18周岁(含临界值)及以上的健康男性或女性受试者；②男性体质量≥50.00 kg, 女性体质量≥45.00 kg, BMI在19.00～26.00 kg·m-2(包括临界值);③3年内无心血管、肝、肾、胆道、呼吸、血液和淋巴、内分泌、免疫、精神、神经肌肉、胃肠道系统等慢性疾病史或严重疾病史；④生命体征(耳温、脉率及血压)检查、体格检查、临床实验室检查(血常规、尿常规、血生化、凝血四项)、12-导联心电图，结果显示正常或异常无临床意义者；⑤所有受试者在试验期间及试验结束后3个月内无生育计划并自愿采取有效避孕措施且无捐精、捐卵计划。

排除标准①特定过敏史(荨麻疹)或为过敏体质，或已知对维格列汀及其类似药以及相关辅料有既往过敏史者；②既往有肝炎等肝功能障碍病史、胰腺炎疾病史患者；③肌酸酐清除率<80 mL·min-1;④有大疱状或剥脱性皮肤损伤(包括大疱性类天疱疮)既往史患者，或体格检查有皮肤溃疡、脱皮者；⑤对乳糖不耐受或/和有罕见的遗传性半乳糖不耐受、Lapp乳糖酶缺陷或葡萄糖-半乳糖吸收不良者；⑥从事驾驶、操作重型机器、高空作业职业者；⑦既往有低血糖病史；筛选期空腹血糖低于3.9 mmol·L-1或大于6.1 mmol·L-1者；⑧女性血妊娠检测阳性者。

3 分组、给药方法与血样采集

本试验按单中心、开放、均衡、随机、单剂量、双周期、双交叉的生物等效性试验方法设计(清洗期为7 d)。

本研究将24例受试者随机分为2组，每组各12例，均于每周期试验前一天办理入住手续，统一进食晚餐后，禁食不禁水至少10 h。每周期给药当日，在室温条件下开始进食高脂餐的第30 min口服受试制剂1片(50 mg)或参比制剂1片(50 mg),用温开水240 mL送服，用餐前1 h及给药后1 h禁止饮水。高脂餐是根据《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[5]对高脂(提供食物中约50%的热量)高热量(约800～1 000 kCal)饮食的要求设计的标准餐，其中蛋白质约提供150 kCal热量，碳水化合物约提供250 kCal热量，脂肪约提供500～600 kCal热量。本研究所用的高脂餐方案总热量为939.58 kCal, 并确保每个周期的用餐计划保持一致。

本研究于每周期给药前0 h(1.00 h内)和给药后0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.25、2.50、2.75、3.00、3.50、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00、14.00、24.00 h, 共18个时间点采集上肢静脉血约4 mL,置于含肝素钠抗凝剂的真空采血管中。全血样品采集后2 h内，在4 ℃下，以2 790 r·min-1离心10 min后分离血浆。离心后血浆样品在室温条件下，取约0.8 mL加入待测样品管中，取约0.6 mL加入备份样品管中(待测样品管与备份样品管均约含5%的1.0 mol·L-1NaOH)。离心后2 h内所有血样均转移至超低温冰箱(温度范围：-60 ～ -90 ℃)储存，以用于药代动力学(pharmacokinetics, PK)检测。

4 测定方法

本研究参考《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[5]及《维格列汀片生物等效性研究技术指导原则》[6],确定其检测成分为维格列汀，维格列汀作为主要生物等效性评价指标。此外，本研究方法学的开发与验证以及生物样本的检测分析由苏州旭辉检测有限公司负责完成。

色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150.0 mm, 3.5 μm);流速：0.8 mL·min-1,流动相：0.1%甲酸水溶液含5 mmol·L-1乙酸铵(A)-乙腈(B);柱温：40 ℃;进样量：2.00 μL。梯度洗脱程序：0～0.80 min, 10%B;0.80～3.20 min, 10%～80%B;3.20～3.80 min, 80%B;3.80～3.81 min, 80%～10%B;3.81～5.50 min, 10%B;5.50 min停止。

质谱条件电喷雾离子源(electrospray ionization, ESI),正离子模式，多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)方式扫描；维格列汀离子对为m/z304.3→154.3,内标维格列汀-d7离子对为m/z311.3→161.3,维格列汀和内标维格列汀-d7碰撞能量分别为25和26 V。

血浆样品处理取样品50.0 μL加入10.0 ng·mL-1内标工作溶液450 μL,涡旋约1 min后，将上述样品板于4 ℃下，以1.30×104r·min-1离心10 min, 转移上清液150 μL至另一干净的96-孔聚丙烯板中，进样2 μL作液相色谱-质谱法(liquid chromatography /mass spectrometry, LC-MS/MS)分析。

5 方法学考察与评价

专属性取6个不同空白人的血浆，分别进行不加待测物、不加内标的空白样品测定和加入待测物标准溶液和内标溶液的添加实验，结果显示，维格列汀及内标的峰形良好，待测物及内标保留时间分别为3.62和3.61 min。空白血浆样品内源性物质不干扰待测物和内标的测定。结果见图1。

图1血浆中维格列汀的典型色谱图

表1用液相色谱-质谱(LC-MS/MS)法检测维格列汀在人血浆中的精密度和回收率

标准曲线与最低定量下限配制质量浓度分别为1.00、5.00、10.00、20.00、50.00、100.00、200.00、500.00 ng·mL-1的维格列汀血浆标准曲线样品，以分析物(维格列汀)与内标(维格列汀-d7)的色谱峰面积比为纵坐标，用加权1/x2,血浆中分析物的浓度(x)与峰面积比(y)进行线性回归，结果显示，维格列汀血药浓度在1.00～500.00 ng·mL-1,有良好的线性关系，其标准曲线为y=9.77×10-3x-9.70×10-4(r=0.999 6),定量下限为1.00 ng·mL-1。

精密度和回收率制备4个不同质量浓度的质控样品(维格列汀的质量浓度分别为1.00、2.00、80.00和400.00 ng·mL-1),每个质量浓度平行制备6份，独立分析3批，进行批内及批间准确度和精密度的考察，批内的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)<20%,批间的RSD<10%,符合生物样品接受标准。以待测物与内标的峰面积比计，得到低、中、高质量浓度(2.00、80.00、400.00 ng·mL-1)质控样品中分析物的平均提取回收率分别为98.01%、100.26%和100.10%,内标的提取回收率均值为99.65%,RSD均不大于15%,见表1。

基质效应在低、中、高3个质控浓度水平配制一组含基质样品，即向基质(6个不同来源)的空白提取物中分别加入待测物和内标的溶液，另一组样品是对应相同浓度水平的待测物和内标的不含基质的溶液样品(n=6)。计算含基质样品及不含基质溶液样品中待测物峰面积与内标峰面积的比值，得到低、中、高质量浓度水平下内标归一化基质效应因子分别为1.03±0.07、0.97±0.01和0.96±0.02;变异系数分别为6.3%、1.0%和2.1%,变异系数均低于15%,无基质效应。

稳定性待测物(人全血)在室温白光下放置2 h, 待测物(人血浆)在室温黄光下放置26 h, 待测物(人血浆)在室温白光下放置4 h; 待测物(人血浆)储备液在-15～-35 ℃储存5 d, 待测物(人血浆)储备液在-60～-90 ℃储存90 d; 待测物(人血浆中经处理后)在自动进样器(4 ℃)放置48 h, 待测物(人血浆中经处理后)在室温黄光下放置24 h, 待测物(人血浆中经处理后)在-15～-35 ℃储存3 d; 待测物(人血浆)经过5次冻融循环(-60～-90 ℃/室温黄光),以上条件下均稳定。

6 统计学处理

本研究PK参数的计算和生物等效性评价用Phoenix WinNonlin软件(Pharsight Corporation, 8.2版本)进行估算。受试者的人口学和基线特征及安全性分析用SAS(版本号：9.4)软件编程分析。将主要PK参数(Cmax,AUC)对数转换后进行方差分析(ANOVA),方差分析模型中顺序、药物、周期作为固定效应，受试者(顺序)作为随机效应。计算主要指标的几何均值比率(受试制剂/参比制剂)的90%置信区间，如在等效区间内(80.00%～125.00%),则判断为生物等效。同时，tmax进行两配对样本的非参数Wilcoxon符号秩和检验。

二、结果

1 血药浓度-时间曲线

本试验共筛选78例受试者，排除了54例受试者，最终随机入组24例合格受试者，试验中T-R组有1例受试者于第一周期给药前自愿退出试验，1例受试者于第二周期给药前自愿退出试验，其余受试者均按要求完成两周期试验。

健康受试者餐后口服受试制剂、参比制剂维格列汀50 mg后的平均血药浓度-时间曲线见图2。由图可见，在餐后条件下，受试者服药后2种维格列汀的平均血药浓度-时间曲线变化趋势基本一致。

图2维格列汀的平均血药浓度-时间曲线

2 PK参数

健康受试者餐后口服受试制剂、参比制剂维格列汀50 mg后的主要PK参数，见表2。

3 生物等效性评价

本试验中，健康受试者餐后口服50 mg的维格列汀片受试制剂和参比制剂Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比值和其90%置信区间依次为110.51%(98.63%～123.81%)、103.93%(101.60%～106.30%)和104.01%(101.79%～106.27%)。上述结果均完全落在方案规定的可接受的生物等效范围内(80.00%～125.00%),表明两制剂在餐后给药时吸收速度和吸收程度上具有生物等效性。

4 安全性评价

本研究有23例受试者参与安全性评估，受试者餐后口服受试制剂后，5例数受试者(21.7%)发生7例次轻度(1级)的不良事件，即血脂异常(1例，4.3%)、白细胞计数升高(1例，4.3%)、谷丙转氨酶升高(2例，8.7%)、尿潜血(1例，4.3%)、血胆红素升高(1例，4.3%),中性粒细胞百分比升高(1例，4.3%)。其中3例数3例次不良事件与试验药物“可能有关”,计为药物不良反应，药物不良反应发生率为13.0%,主要为2例数2例次谷丙转氨酶升高、1例数1例次血胆红素升高。未见受试者餐后口服参比制剂后发生不良事件/药物不良反应。试验过程中未发生严重不良事件，未出现因不良事件退出的受试者。该安全性数据表明，中国健康受试者单次餐后服用维格列汀片50 mg受试制剂的安全性和耐受性良好。

表2餐后试验维格列汀的主要药代动力学参数

三、讨论

近年来，国家组织开展以带量采购机制为核心的药品集中采购工作，又称“国家集采药品”,其是由国家医疗保障局在保障药品质量的前提下从通过质量和疗效一致性评价的药品中遴选品种，做到“量价挂钩、以量换价”,使得药品的价格大幅有效降低，这是国家医疗保障局深化医疗改革的重大举措之一[7]。仿制药品涵盖了心脑血管疾病、呼吸道疾病、抗感染、肿瘤、精神疾病、糖尿病等多种常见病、慢性病用药，在保证用药安全的同时切实降低了老百姓的购药成本，显著减轻了慢性病患者的就医负担[8]。糖尿病作为一种终身性疾病，其医疗费用是我国医疗卫生总支出的重要组成部分之一[9]。糖尿病易引发多种并发症，对人体的心血管系统、呼吸系统等全身器官均可造成损害，不仅直接造成个人生活质量降低的负面影响，而且导致社会经济负担沉重[10-11]。

维格列汀是一种高效的选择性DPP-4抑制药，在有效降低2型糖尿病患者血糖的同时，无重度低血糖风险，且对患者体质量无显著影响，不易引起消化道不适等症状[12-13]。

本研究参考《生物样品定量分析方法验证指导原则(9012)》[14]、《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[5]、《化学药物临床药代动力学研究技术指导原则》[15]等设计、实施。本研究排除标准设计在项目实施过程中具有普适性。本研究所得维格列汀的主要PK参数Cmax分别为(230.00±73.90)和(203.00±44.00)ng·mL-1,tmax的中位数及最小值，最大值分别为2.00(0.50,6.00)和2.00(1.00,4.00)h, 其与文献[3]报道的结果[Cmax分别为(242±59)和(235±59)ng·mL-1,tmax的中位数及最小值，最大值分别为2.00(1.00,6.00)和2.00(0.67,3.50)h]相似。

本试验的健康受试者餐后口服50 mg的维格列汀片受试制剂和参比制剂Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比的90%置信区间均完全落在80.00%～125.00%内，表明餐后状态下，口服50 mg的维格列汀片受试制剂与参比制剂具有生物等效性。另外，本试验过程中未出现严重不良事件、合并用药和非药物治疗情况，无受试者因不良事件退出试验，这说明维格列汀片总体上安全性和耐受性良好。

参考文献:

[2]李琳玉,李强.维格列汀的研发及糖尿病治疗中的应用[J].中国糖尿病杂志,2020,28(9):717—720.

[3]江思艳.维格列汀片人体生物等效性研究[D].安徽合肥:安徽医科大学,2018.

[4]赵琪.诺华公司处方药佳维乐营销策略改进研究[D].甘肃兰州:兰州大学,2020.

[5]国家药品监督管理局.以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则[EB/OL].2016-03-18 [2024-01-04].

[6]国家药品监督管理总局.维格列汀片生物等效性研究技术指导原则[EB/OL].2021-01-26 [2024-01-01].

[7]饶惠珍,计成,李俐.维格列汀片仿制药品与原研药品治疗2型糖尿病的临床疗效及安全性比较[J].中国临床药学杂志,2023,32(1):13—17.

[8]文小桐,赵秋玲,刘雨欣,等.不同等级医疗机构对集采药品采购量变化的贡献率差异比较[J].中国医疗保险,2023,(11):122—128.

[9]郭立新.2021年糖尿病领域年度重大进展回顾[J].中华糖尿病杂志,2022,14(1):1—8.

[12]汪云,吴金伶,李敬,等.维格列汀片在健康受试者中的生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2022,38(17):2070—2074.

[13]刘颖.维格列汀联合格列美脲治疗难治性2型糖尿病的临床研究[J].中国临床药理学杂志,2019,35(18):2019—2022.

[14]中华人民共和国药典.生物样品定量分析方法验证指导原则(2020年版,四部)[EB/OL].2020-07-02 [2023-10-18].

[15] 国家药品监督管理局.化学药物临床药代动力学研究技术指导原则[EB/OL].2005-03-18 [2024-01-05].

基金资助:广东省中医药局科研基金资助项目(20233011);广东省药品监督管理局-中药人用经验临床评价技术重点实验室建设项目(2022ZDB06);广州市科技局市校(院)联合资助项目(202201020543,2024A03J0355);

文章来源:汤慧敏,杨忠奇,唐雅琴,等.维格列汀片在中国健康受试者的餐后生物等效性研究[J].中国临床药理学杂志,2024,40(21):3147-3152.