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女性体检人群高危型人乳头瘤病毒基因亚型在重庆地区分布特征分析

2020-09-11 192 上传者：管理员

摘要：目的：研究重庆地区女性体检人群高危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况，以及各基因亚型分布情况。方法：对2062例体检女性用实时荧光定量PCR方法检测高危型HPVDNA。结果：2062例体检女性的高危型HPV感染率14.21%(293/2062)，其中单一感染、二重感染和多重感染分别占全部感染人数的80.55%(236/293)、16.38%(48/293)和3.07%(9/293)。最常见的基因型别是HPV52(3.20%,66/2062)，其次是HPV16(2.09%,43/2062)、HPV58(1.94%,40/2062)、HPV51(1.50%,31/2062)。按不同年龄分组，20～<30岁的高危型HPV感染率最高，为17.89%(51/285)，其次是60～<70岁(15.09%,8/53)、50～<60岁(14.68%,48/327)、30～<40岁(13.64%,102/748)。另外，20～<30岁，30～<40岁，40～<50岁及50～<60岁这4个年龄段最常见的HPV感染型别均是HPV52型。结论：重庆地区女性体检人群中高危型HPV以单一感染为主，HPV52型别感染最为常见。不同年龄段的高危型HPV阳性率及亚型分布比较差异有统计学意义。

关键词：
基因分型
实时荧光定量PCR
宫颈癌
恶性肿瘤
高危型人乳头瘤病毒
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宫颈癌是最为常见的女性恶性肿瘤之一。研究发现，99.7%的宫颈癌是由高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染所致，它是宫颈癌发生的主要危险因素[1]。HPV感染普遍存在，有高危型和低危型之分。迄今为止，已鉴定出200多种不同的HPV基因型[2]，不同型别的致癌能力以及所引起的疾病不同。大部分基因型与生殖道疾病有关。低危型HPV感染一般不会导致宫颈癌或癌前病变，只有高危型HPV持续感染的患者才会有发生宫颈癌的风险。另外，高危型HPV的致癌能力也有强弱之分。

机体可以感染一种HPV或者同时感染多个型别，因此，根据HPV感染的不同状态，可分为单一感染和多重感染[3]。在HPV阳性女性中，有20%～40%的女性为多型别HPV感染[4,5]。关于多重感染与宫颈癌关系的研究存在争议[6]。有文献[7,8,9]报道HPV多重感染与宫颈病变之间存在着密切的关系，多重感染可促进宫颈病变和宫颈癌的发生发展。也有研究认为HPV的多重感染与宫颈癌不存在显著相关性[10,11,12,13]。因此，HPV分型检测对个体化评估、区分单一感染还是多重感染、宫颈癌风险预测、治疗效果的评估以及对各地区有针对性地使用疫苗等具有重要的意义。检测高危型HPV感染已成为预防宫颈癌的关键环节之一。本文采用实时荧光定量PCR方法对重庆地区2062例体检人群高危型HPV的感染情况、各基因亚型分布情况进行评价，为体检人群HPV感染的预防提供依据。

1、资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年4-12月在陆军特色医学中心体检的2062例女性的宫颈脱落细胞标本，年龄19～76岁，平均（46.08±15.15）岁。上述标本均来自健康体检中心，排除常见妇科疾病（如宫颈癌、卵巢癌、子宫肌瘤等）患者及妇科、产科等其他门诊患者。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

台式离心机（贝克曼，美国）；BIOER恒温金属浴（HB-100，中国）；超净工作台（赛默飞世尔科技，中国）；Bio-Rad扩增仪（AppliedBiosystems，美国）。

1.2.2 试剂

由上海之江生物科技股份有限公司提供的高危型人乳头瘤病毒（HPV）分型核酸测定试剂盒（实时荧光定量PCR法），货号Z-TD-0324-04-24。对生殖道分泌物及宫颈脱落细胞中的HPV16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、68型、66型、82型这15种高危型别的特异性DNA核酸片段进行荧光定量PCR分型定性检测。

1.3 方法

1.3.1 标本采集

用0.9%氯化钠溶液浸润的无菌棉球擦去宫颈外分泌物，用宫颈取样器刷取脱落细胞，将其置于含3mL细胞保存液的专用管（型号：MCS01，宁波市远江医疗用品有限公司）中，4℃保存备用，1周之内检测。

1.3.2 DNA提取

将标本转移至1.5mL离心管中，13000r/min离心5min。弃上清，用1mL0.9%氯化钠溶液洗涤沉淀，混匀，13000r/min离心5min。小心弃净上清，沉淀加入100μL核酸提取液后充分震荡混匀，沸水浴10min,13000r/min离心5min。所得上清即为PCR反应模板。

1.3.3 试剂配制

反应体系为36μLPCR反应液，0.4μLTaq酶，加入4μLDNA模板，混匀数秒。

1.3.4 PCR扩增

反应管置于实时荧光定量PCR仪上，反应条件为94℃2min，再按93℃10s→62℃31s，循环40次。在62℃时检测单点荧光。1.3.5结果判断本试剂盒引入了内参基因，用于对标本质量进行监控。根据扩增曲线的阈值循环数（Ct）判断阴阳性。若内参基因的Ct值≤32，且扩增曲线呈典型的S型，其他各通道Ct值>40或无Ct值，结果判为阴性；若内参基因的Ct值≤32，其他各通道Ct值≤38，且扩增曲线均呈典型的S型，结果判为阳性；若内参基因的Ct值≤32，且扩增曲线呈典型的S型，待测标本其余通道Ct值为38～40，则需要重复测定。

1.4 统计学方法

采用SPSS22.0统计学软件进行分析，计量资料以表示；计数资料以例数或百分比形式表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 高危型HPV的感染情况

在2062例体检人群中，检测出高危型HPV293例，感染率为14.21%(293/2062）。以单一感染为主，占高危型HPV感染的80.55%(236/293）。双重感染48例，占高危型HPV总感染数的16.38%(48/293）。将同时感染三种及以上高危型HPV型别定义为多重感染，占高危型HPV总感染数的3.07%(9/293）。

表1体检人群高危型HPV亚型感染情况

2.2 体检人群高危型HPV亚型感染情况

在收集的2062例体检人群标本中，单一感染HPV52最为常见，有60例，感染率最高，占体检人群的2.91%(60/2062）。其次分别为HPV58(1.79%,37/2062）、HPV51(1.16%,24/2062）、HPV16(1.07%,22/2062）。HPV52总感染率最高，为3.20%(66/2062）。其次，分别为HPV16(2.09%,43/2062）、HPV58(1.94%,40/2062）、HPV51(1.50%,31/2062）。见表1。

2.3 高危型HPV感染与年龄的相关性分析

对2062例体检人群进行年龄分层，分析高危型HPV感染情况。每个年龄段高危型HPV均为单一感染感染率最高。另外，高危型HPV感染的高发年龄为20～<30岁，总感染率为17.89%(51/285），其次是60～<70岁（15.09%,8/53）、50～<60岁（14.68%,48/327）、30～<40岁（13.64%,102/748）。整体呈现“M”型分布。本研究中<20岁和≥70岁人群纳入的例数较少，暂不做分析。其余各年龄组之间高危型HPV总感染率比较差异无统计学意义（χ2=3.11,P=0.54）。见表2。

表2不同年龄段体检女性高危型HPV感染率

2.4 不同年龄段高危型HPV单一感染亚型分布

对重庆地区2062例体检人群按不同年龄段进行分层分析发现，20～<30岁、30～<40岁、40～<50岁及50～<60岁这4个年龄段最常见的均是HPV52型感染。见表3。

表3不同年龄段高危型HPV单一感染亚型分布（n)

3、讨论

HPV是20面体球形DNA病毒，广泛存在，具有宿主及组织特异性，易感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，能够引起人类皮肤的多种乳头状瘤或疣以及黏膜生殖道上皮增生性损伤[14]。80%以上女性一生中至少感染过一种型别的HPV病毒。80%～90%HPV感染者可以通过自身免疫清除该病毒。根据致癌危险性大小不同可将HPV病毒分为高危型和低危型[15]。高危型HPV持续感染与宫颈癌的发生密切相关。长期或反复HPV感染可能诱发宫颈癌[16]。HPV与宫颈癌的关系明确，成为目前唯一明确病因、可以早期预防和治疗并且彻底根除的癌症。HPV疫苗的上市使得宫颈癌的预防成为可能，但是由于HPV亚型较多，因此研究体检人群高危型HPV的感染及亚型分布情况，有利于有针对性地进行HPV疫苗的研发和临床应用，对治疗和预防这类病毒引起的疾病有着重要的意义。

本文对2062例体检人群高危型HPV感染情况及亚型分布进行分析，检测到高危型HPV感染293例，阳性率为14.21%，其中单一感染为主，占80.55%，与高超等[17]报道的高危型HPV单一感染感染率81.8%十分接近。最常见的基因型是HPV52，其次是HPV16、HPV58和HPV51。但也与国内部分报道存在差异，李冬梅等[18]报道HPV16、HPV52检出率较高；杨赟平等[19]报道HPV16检出率最高，其次为HPV52和HPV58;LIU等[20]研究发现郑州地区最常见的基因型检出率从高到低依次为HPV52、HPV16、HPV58、HPV81和HPV56;LI等[21]对四川地区的研究发现常见的基因型分别是HPV52、HPV58、HPV16和HPV51；张海伟等[22]报道健康体检人群HPV基因型检出率从高到低为HPV52、HPV58和HPV51；高超等[17]报道长春地区体检人群HPV基因型以HPV16、HPV52为主。由于纳入标本量少、标本选择上存在偏差和检测方法等的不同，结果与其他研究存在差异。

按不同年龄分组，整个体检人群呈“M”型分布。高危型HPV感染率从高到低依次为20～<30岁、60～<70岁、50～<60岁、30～<40岁、40～<50岁。与国内外部分文献[23,24,25,26]报道的不同年龄阶段HPV检出率呈双峰分布结论一致。21～<30岁的高危型HPV感染率最高，可能与性生活活跃及个人卫生情况有密切关系。61～<70岁的老年女性感染率高可能与免疫力降低、雌激素水平变化有关。另外本文纳入的样本量较少，结果可能存在一定的偏倚。

另外，各年龄段高危型HPV感染率差异无统计学意义，与高超等[17]统计的数据结果基本一致。20～<30岁，30～<40岁，40～<50岁及50～<60岁这4个年龄段HPV52型感染均最为常见。但目前市面上的疫苗主要是针对高危型HPV16型和HPV18型、低危型HPV6型和HPV11型[27]。对于本文检测到的体检人群中感染率较高的高危型HPV基因型，疫苗未完全覆盖。因此，可以考虑研制HPV52+HPV58+HPV51+HPV16型四价疫苗，将可能有效降低高危型HPV感染率。