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临床孤立综合征病人肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达及临床意义

2024-09-11 49 上传者：管理员

摘要：目的:分析脑脊液和血清中肥胖抑制素、血清新蝶呤(Npt)及TP53诱导的糖酵解调节磷酸酶(TIGAR)在临床孤立综合征(CIS)病人预后无创检测中的意义。方法:选取2018年5月—2020年5月于我院治疗的110例CIS病人作为CIS组，其中复发病人55例，未复发病人55例，选取年龄、性别相匹配的神经系统非炎症疾病(NIND)的住院病人55例作为NIND组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt及TIGAR表达水平；分析转归为多发性硬化症(MS)病人与未复发CIS病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平；分析转归为MS病人复发前及复发后脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平；受试者工作特征(ROC)曲线分析血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR对病人复发的预测价值。结果:复发病人与未复发病人年龄、白细胞计数、总蛋白升高、寡克隆带(OB)阳性比较，差异有统计学意义(P<0.001)。与NIND组比较，CIS组病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平上调，差异有统计学意义(P<0.001)。转归为MS病人与未复发CIS病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。与复发前比较，复发后病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线显示，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR水平对病人复发均具有诊断价值，曲线下面积(AUC)分别为0.803,0.815,0.809,敏感度分别为91.97%,86.23%,80.83%,特异度分别为80.76%,81.93%,85.14%,3者联合诊断价值更高，AUC为0.921,敏感度为93.92%,特异度为87.58%(P<0.001)。结论:肥胖抑制素、Npt和TIGAR在CIS病人脑脊液和血清中有异常高表达，且趋势一致，血清肥胖抑制素、Npt联合TIGAR对CIS病人的复发预测作用显著，可能是无创检测开发的候选分子。

关键词：
TP53诱导的糖酵解调节磷酸酶;
临床孤立综合征
无创检测
肥胖抑制素
血清新蝶呤
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临床孤立综合征（clinically isolated syndrome,CIS）是特发性炎性脱髓鞘疾病（IIDDs）的一种，女性患病率是男性的2～3倍，好发于20～50岁，60%～70%的病人经过若干年可转归为多发性硬化症（multiple sclerosis,MS），高达85%的MS以CIS起病[1-2]。CIS和MS治疗策略和预后差异显著，早期治疗可以延缓CIS向MS的转化，由于脑组织及脑脊液取材困难且对病人有一定创伤，因此，从血清中寻找无创标志物，鉴定CIS复发及转归对复发风险高的CIS病人的早期干预具有重要的临床意义[3-4]。CIS伴随着严重的炎症反应过程，探究炎症信号分子的表达具有重要的意义。肥胖抑制素是一种新型生长激素释放肽相关肽，可调节代谢细胞功能、抑制不同细胞类型的凋亡和炎症，是一种新型血清生物标志物，研究表明，限制性神经性厌食者体内的肥胖抑制素表达显著异常，可能具有中枢神经功能预测作用[5-6]。血清新蝶呤（serum neopterin,Npt）是三磷酸鸟苷代谢、生物蝶呤合成途径中的一种蝶啶中间代谢产物，在血液、脑脊液中稳定存在。研究表明，血清Npt也是细胞介导免疫激活的象征之一，在中枢神经的临床应用中具有重要价值[7-8]。TP53诱导的糖酵解调节磷酸酶（TP53-induced glycolytic regulatory phosphatase,TIGAR）是神经干细胞增殖分化中的重要调控因子，脑缺血发生后TIGAR表达水平显著增加，其潜在作用和机制可能会促进中枢神经系统疾病治疗靶标[9-10]。基于这3个指标均与神经系统功能有关，并且可以调控炎症反应过程，本研究以脑脊液和血清中TIGAR、Npt、肥胖抑制素的表达为切入点，探索这3个指标血清表达是否与脑脊液表达趋势一致，为无创检测提供理论基础，从而为临床病人复发提供新型无创预测分子标志物。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2018年5月—2020年5月于我院治疗的110例CIS病人作为CIS组，其中复发病人55例，未复发病人55例，年龄20～66(49.95±8.89）岁；体质指数（BMI)7.85～27.12(22.31±4.35)kg/m2。CIS的诊断及分型：大脑型占45.83%，脊髓型占29.17%，视神经炎型占12.50%，脑干型占9.37%，小脑型占3.13%。随访中位时间为23.77个月。选取年龄、性别相匹配的神经系统非炎症疾病（non-inflammatory diseases of nervous system,NIND）的住院病人55例作为NIND组，年龄22～67(49.85±9.09）岁；BMI 17.62～27.08(22.61±5.31)kg/m2；紧张型头痛23例，周期性麻痹32例。本研究已通过本院伦理监察委员会审查，所有参加本研究的病人均充分了解研究目的及注意事项，病人本人或其家属已签署知情同意书。

1.2纳入与排除标准

纳入标准：CIS符合McDonald(2017）的诊断标准，当CIS复发时满足McDonald(2017）标准[2]和《多发性硬化诊断和治疗中国专家共识（2018版）》[11]，诊断为MS；年龄18～70岁；首发症状急性期1周内入院；发病前3个月内未接受任何免疫治疗；细胞间接免疫荧光法检测血清水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4）抗体和抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白免疫球蛋白G抗体（anti-myelinated oligodendrocyte glycoprotein immunoglobulin G antibody,MOG-IgG）阴性。排除标准：合并颅内外感染的急性期者；合并其他免疫相关疾病者。NIND组排除标准同CIS组，且头颅CT或磁共振成像（MRI）正常，脑脊液常规、生化、细胞学正常，寡克隆区带阴性。

1.3方法

1.3.1治疗方案

CIS组病人均给予激素甲泼尼龙（Pfizer Manufacturing Belgium NV，批号H20130301)0.5g静脉输注，每日1次，3日后减量为250mg静脉输注，每日1次，2日后减量为120mg静脉输注，3日后改为强的松片（浙江仙琚制药股份有限公司，批号：X20160174）口服，1 mg/kg，递减后1～3个月停服。同时给予抑酸、补钙、补钾治疗。除急性期激素治疗外，随访期间未给予免疫药物治疗。

1.3.2病人脑脊液、血清分离方法及随访记录

1）记录CIS组病人脑和脊髓MRI病灶部位，扩展残疾状态量表（Extended Disability Status Scale,EDSS);2）腰椎穿刺脑脊液检查脑脊液白细胞计数、总蛋白、寡克隆带（oligoclonalband,OB），血清白细胞计数；3）肥胖抑制素、Npt和TIGAR细胞因子水平：两组病人均在急性期（入院第2天06:00）采集静脉血10mL，立即经1 500r/min离心15min，分离血清，同时腰椎穿刺抽取脑脊液2 mL，立即经3 000r/min离心10min，取上清液分装于EP管内，-80℃冻存待测。

1.3.3酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清肥胖抑制素、Npt表达水平

采集所有病人外周血5mL,4℃条件下暂存。检测时，严格按照人肥胖抑制素（货号：ab264628，美国ABCAM公司），人Npt ELISA（货号：HY21272-96T，上海恒远生物科技有限公司），TIGARELISA Kit(Human,OKEH03298，美国avava公司）ELISA Kit操作，制作标准曲线后于全波长酶标仪下检测450nm吸光度，每个样本重复3次。

1.4统计学处理

采用SPSS 26.0软件进行数据分析。符合正态分布的定量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。定性资料以例数或百分比（%）表示，采用χ2检验。分析转归为MS(CIS-MS）病人与未复发CIS(CIS-CIS）病人基线脑脊液和血清中肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平；分析转归为MS病人复发前及复发后病人脑脊液和血清中肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平。受试者工作特征曲线（ROC）分析确定血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR及3者联合对病人复发的诊断价值。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1复发与未复发病人基线资料比较

复发病人，男28例，女27例；年龄（27.36±4.12）岁；脑脊液白细胞计数（34.32±6.12）%，血液白细胞计数（31.32±5.12）%；总蛋白升高48例，OB阳性47例；结局预测评分量表（PEDSS）评分为（1.52±0.31）分。未复发病人，男27例，女28例；年龄（39.86±5.12）岁；脑脊液白细胞计数（5.12±1.12）%，血液白细胞计数（6.01±1.09）%；总蛋白升高5例，OB阳性6例；PEDSS评分为（1.54±0.29）分。复发病人与未复发病人年龄、白细胞计数、总蛋白升高、OB阳性比较，差异有统计学意义（P<0.001）。

2.2 CIS组与NIND组脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较

与NIND组比较，CIS组病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平上调，差异有统计学意义（P<0.001）。详见图1。

图1 CIS组与NIND组脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较

(A为脑脊液肥胖抑制素比较；B为脑脊液Npt比较；C为脑脊液TIGAR比较；D为血清肥胖抑制素比较；E为血清Npt比较；F为血清TIGAR比较。与NIND组比较，*P<0.001)

2.3转归为MS(CIS-MS,5例）病人与未复发CIS(CIS-CIS,5例）病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较

转归为MS病人与未复发CIS病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。详见图2。

图2 CIS-MS病人与CIS-CIS病人基线脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平比较

（A为CIS-MS与CIS-CIS病人脑脊液肥胖抑制素比较；B为CIS-MS与CIS-CIS病人脑脊液Npt比较；C为CIS-MS与CIS-CIS病人脑脊液TIGAR比较；D为CIS-MS与CIS-CIS病人血清肥胖抑制素比较；E为CIS-MS与CIS-CIS病人血清Npt比较；F为CIS-MS与CIS-CIS病人血清TIGAR比较）

2.4 CIS-MS病人复发前及复发后病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平的比较

与复发前比较，复发后病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平升高，差异有统计学意义（P<0.001）。详见图3。

图3 CIS-MS病人复发前及复发后病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平的比较

(A为CIS-MS病人复发前后脑脊液肥胖抑制素比较；B为CIS-MS病人复发前后脑脊液Npt比较；C为CIS-MS病人复发前后脑脊液TIGAR比较；D为CIS-MS病人复发前后血清肥胖抑制素比较；

2.5血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR对CIS病人复发的诊断价值

ROC曲线显示，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR水平对CIS病人复发均具有诊断价值，曲线下面积（AUC）分别为0.803,0.815,0.809，敏感度分别为91.97%,86.23%,80.83%，特异度分别为80.76%,81.93%,85.14%,3者联合诊断价值更高，AUC为0.921，敏感度为93.92%，特异度为87.58%(P<0.001）。详见表1、图4。

表1血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR水平对病人复发的诊断价值

图4血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR对CIS病人复发预测的ROC曲线图

3、讨论

CIS指病人首次出现中枢神经系统炎性脱髓鞘事件，其单相临床病程类似于MS的1次典型临床发作[12-13]。维生素D缺乏、吸烟等被认为是CIS向MS转归的确切危险因素，寻找CIS发病及预后的无创标志物，降低病人检测痛苦是CIS临床研究的重要方向[14-15]。由于脑组织的结构特殊性，无法通过组织采样进行鉴定，脑脊液采样也会对病人产生一定创伤，因此，是否可以通过血清反映脑脊液情况是CIS无创检测的一个重要方向。

肥胖抑制素是一个由胃促生长素前原体基因编码的厌食肽，在神经体液调节中发挥重要作用[16]，研究表明，肥胖抑制素在外周组织中发挥局部作用，能激活G蛋白偶联受体39，在中枢水平上发挥远距离调控作用[17]，是一种新型无创血清生物标志物。Npt在血液、脑脊液及胸腹水等体液中较稳定存在，且不易在体内灭活或降解，观察其变化有助于监测机体细胞活化及炎症反应状态，进而了解神经系统疾病进展及其活动性[18-19]。TIGAR在控制神经干细胞（NSCs）的增殖、分化和静止中发挥至关重要的作用，研究表明，TIGAR广泛分布于神经元中，并在缺血性脑卒中模型中参与缺血/再灌注诱导的神经元损伤，同时调控神经细胞有氧糖酵解到氧化磷酸化的代谢转变，是重要的神经信号调控分子，但是其是否参与CIS的进展尚不明确[20-21]。本研究分析脑脊液和血清中的肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平，发现与NIND组比较，CIS组病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR水平均显著上调，并且脑脊液与血清趋势一致，提示血清可以反映脑脊液的趋势，这与肥胖抑制素、Npt、TIGAR广泛分布于神经元中并参与神经元损伤结果相一致[7,9,20]。同时，本研究对比了转归为MS病人与未复发CIS病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平，结果表明两组病人肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平无显著差异，提示这种肥胖抑制素、Npt和TIGAR的高表达是疾病造成的。同时本研究发现，复发后病人脑脊液和血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达水平显著升高，提示血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达可能与病人复发有关，并且可以代表脑脊液表达水平。血清肥胖抑制素、Npt和TIGAR表达的ROC曲线结果表明，肥胖抑制素、Npt、TIGAR指标对病人均具有诊断价值，且3者联合诊断价值更高。

由于肥胖抑制素、Npt、TIGAR在脑脊液和血清中表达水平变化趋势一致且血清预测较高，推测当快速神经细胞生长的代谢异常时，需求超过细胞所能提供的极限，细胞可能通过促进肥胖抑制素、Npt、TIGAR的活化，增加代偿性细胞代谢，从而导致脑脊液肥胖抑制素和Npt以及TIGAR表达水平上升，同时通过血液循环进入外周发挥作用，因此，在血清中可以检测到，从而成为较好的无创分子标志物。

综上所述，血清肥胖抑制素、Npt、TIGAR在CIS病人组织和血清中异常高表达，与脑脊液表达趋势一致，且与病人复发有关，是无创检测的良好生物标志物，有利于临床医师采取有效治疗措施，增加病人诊疗效果。未来的研究可进一步提高样本量并通过分子机制方面的研究，为本研究中的指标变化情况进行进一步论证，从而为临床提供更准确依据。

文章来源:孙宏贤,蒋华玉,陈淑华.临床孤立综合征病人肥胖抑制素､Npt和TIGAR的表达及其临床意义[J].中西医结合心脑血管病杂志,2024,22(17):3252-3256.