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腺瘤组织中黑色素瘤缺乏因子基因表达分析

2020-11-06 190 上传者：管理员

摘要：目的：借助免疫组化技术针对结直肠癌病患的腺瘤组织、癌组织、癌旁正常组织与单纯结直肠腺瘤病患的腺瘤组织内黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)基因表达进行对比分析。方法：选取本院2017年1月至2019年11月收治的50例结直肠腺癌合并腺瘤患者，并且运用合适的方式获得腺瘤组织、癌组织、癌旁正常组织标本，并以2017年至2019年80例结直肠腺瘤患者为研究对象，采集经手术或内镜技术得到腺瘤样本。以EnVision法针对标本进行处理，针对标本间AIM2表达进行分析。结果：AIM2免疫组化染色结果表明，4种组织中AIM2表达差异有统计学意义(x2=22.524,P<0.05)。并且依照本研究的免疫组化数据可知，AIM2表达如下：结直肠癌患者的癌旁组织<结直肠癌患者的腺瘤组织<结直肠腺瘤患者的腺瘤组织<结直肠癌患者的正常组织。结论：AIM2在腺瘤组织、正常组织、腺癌组织内的表达水平逐渐降低，表明AIM2属于典型的抑癌基因，由于AIM2异常会提高结直肠肿瘤的发生率，并对其进展产生极大影响。

关键词：
临床病理
结直肠癌
结直肠腺瘤
黑色素瘤缺乏因子2
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最初是在人类黑色素瘤细胞内找到编码黑色素瘤缺乏因子2(AIM2），这是人体中非常重要的内源性免疫受体之一，根据相关报道可知AIM2在前列腺癌、结肠癌内表达水平并不高，但在口腔鳞状细胞癌、鼻咽癌、肺腺癌内的表达水平较高，可见各种癌症会对AIM2产生不同影响，这种影响的差异非常显著。而在结直肠癌中，由于AIM2的存在，结直肠癌的肿瘤会因此受到较强的抑制[1]。此前有研究提出，针对结直肠癌病患的肿瘤组织进行标本采集与化学检测之后发现，AIM2含量显著降低，且平稳情况相对较差，差异存在统计学意义。而在大肠癌患者体内，AIM2水平相对较低，并且经证实一些患者经检测得知AIM2表达水平明显较低，且预后并不理想。因此，AIM2与炎症小体之间并未存在直接联系，但具备防治结直肠癌的效果[2]。且上述研究均提到给予Aim2-/-小鼠氧化偶氮甲烷（AOM）与葡萄糖硫酸钠（DSS）后会导致结肠炎、息肉甚至出现更加严重的症状。

临床上结直肠腺瘤的发生率相对较高，依照相关研究可知>95%的结直肠癌的来源途径是腺瘤-癌，如今医学界将结直肠腺瘤视作癌前病变，而患者的病情也因此出现急剧恶化现象[3]。如今，AIM2对结直肠腺瘤影响的研究并不成熟，并未研究出结直肠转化过程，且其中的机制也较为模糊。本研究针对AIM2基因进行系统性的化学检测，并且针对其在不同组织中的表达度进行详细分析，以此探究对结直肠腺瘤产生的影响，现报道如下。

1、资料与方法

1.1临床资料

选取本院2017年1月至2019年11月收治的50例结直肠腺癌合并腺瘤患者，并且运用合适的方式获得腺瘤组织、癌组织、癌旁正常组织标本，并以2017年至2019年80例结直肠腺瘤患者为研究对象，采集经手术或内镜技术得到腺瘤样本。

1.2纳入及排除标准

纳入标准：在医疗机构胃肠外科行取结直肠癌手术，并且各项病理资料完整；同一病患手术后经检测确定病患腺瘤性息肉数量超过1处，并且借助肠镜或手术方式进行病灶的切除；手术前活检组织以及手术后的样本均经过一系列的检测确定为结直肠癌[4]。排除标准：手术前患者已经接受了化疗、放射与各项免疫治疗措施；手术前由于结直肠癌外其他区域患有原发性肿瘤，其他区域的肿瘤对结直肠产生损害，并导致出现继发结直肠肿瘤。

1.3方法

采集样本后，烘烤石蜡块，以二甲苯进行脱蜡操作，并且以梯度浓度的乙醇完成载玻片的水化处理。在压力锅中提前放置柠檬酸钠抗原修复液，随后修复抗原。冷却处理后将玻片存储在3%过氧化氢内，并采用苏木素复染液进行复染，每添加1个单位的AIM2需添加1200个单位的抗体稀释液，然后将标本放在4℃恒温箱中，直至第2天。用EnVision二抗针对标本进行处理，37℃恒温箱内处理0.5h[5]。运用DAB显色剂进行5～10min的处理后，以蒸馏水反复冲洗标本。根据乙醇的浓度针对玻片进行脱水处理。取走玻片后以风干的方式进行处理，并且以中性树脂完成封片流程，随后借助显微镜技术完成标本的化学检测。

1.4观察指标及评价标准

借助10×40倍电子显微镜进行视野的选取，共取5个视野，并且将其染色成4个等级，3分为强染色，2分为适度染色，1分为弱染色，0分为无染色。另外，将视野的阳性细胞以率（%）的形式进行分类，4分为75%～100%,3分为50%～75%,2分为25%～50%,1分为5%～25%,0分为<5%。然后将两项得分相乘得出最终染色强度得分。9～12分为高表达（+++），5～8分为中表达（++），1～4分为低表达（+），0分为阴性（-）[6]。

1.5统计学方法

采用SPSS22.0统计学软件进行数据分析，组间对比分析采用秩和检验，以Spearman秩相关分析技术进行相关性研究，并以双侧检验技术进行研究，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1AIM2在4种组织中表达状况

结直肠黏膜上皮细胞胞质内AIM2能够完成表达，并且经特异性免疫组化染色后，最终结果是棕褐色、淡黄色、棕黄色这4种颜色，见图1。

图1几种不同组织中AIM2的表达状况

2.24种组织中AIM2免疫组化染色比较分析

AIM2免疫组化染色结果表明，4种组织中AIM2表达差异有统计学意义。并且依照本研究的免疫组化数据可知，AIM2表达如下：结直肠癌患者的癌旁组织<结直肠癌患者的腺瘤组织<结直肠腺瘤患者的腺瘤组织<结直肠癌患者的正常组织。

3、讨论

目前，癌症在国内外死亡原因中位列第2，相关报道表明，每年癌症的患病数量超过1400万，死亡数超过800万。在中国每年大约有500万患者被确诊为恶性肿瘤，大约有300万患者因此而死亡，恶性肿瘤也是威胁人类生命的最主要原因[7]。目前，我国正处于人口老龄化的进程，加上人们饮食结构与生活习惯的改变、环境污染等因素的存在，结直肠癌的发生率也逐年上升，现今结直肠癌的致死率和发生率均由肿瘤的前5位提升至前4位[8]。但是，我国结直肠癌的早期检出率仍较低，在这种情况下，不仅要构建完善的筛查系统、调节膳食架构、优化居住条件等，而且要提升结直肠癌早期肿瘤检出率，不断优化癌前病变的治疗方案，分析结直肠癌发生的原因与防治措施[9]。AIM2基因在细胞质上产生的，就架构而言，包括HIN-200域和pyrin域，可以辨识dsD-NA，能够使炎症反应通路得到有效激活，并因此促进炎症因子的成熟，提升炎症因子的水平，借助特定通路对结直肠肿瘤细胞的产生、增多以及扩张产生显著的抑制作用[10]。

本研究结果表明，AIM2的表达水平：结直肠癌患者的癌旁组织<结直肠癌患者的腺瘤组织<结直肠腺瘤患者的腺瘤组织<结直肠癌患者的正常组织。此外，由于标本数量有限，单纯腺瘤组织和结直肠癌病患的腺瘤组织内AIM2表达情况虽然差异无统计学意义，但是单纯腺瘤组织AIM2表达水平仍高于结直肠癌病患的腺瘤组织。AIM2基因能够对结直肠癌的产生及患者病情的进一步发展产生较大的抑制效果，可是在结直肠腺瘤内并未得到系统性的研究结果，根据本研究结果可知AIM2基因可以对结直肠癌的癌前病理性改变产生抑制效果，但对腺瘤的产生及患者病情的发展影响机制并不明确。根据相关报道可知多种慢性炎症，包括非感染性及感染性炎症均会在结直肠肿瘤的产生过程中发挥重要的参与作用。腺瘤性结肠息肉病（APC）基因出现突变现象，还会影响结直肠黏膜细胞的极性，并且影响细胞间的紧密状态，肠道菌群侵害会使黏膜细胞受到持续性受损，并且会促进炎性细胞因子IL-23/IL-17前体的产生，在很大程度上影响结直肠腺瘤最终的表达情况[11]。此外，局部炎症一直存在，KRAS、TP53突变发生率就会居高不下，结直肠腺瘤可能进展为腺癌。而慢性炎症和基因稳定性之间的关系非常密切，由于慢性炎症的存在，稳定性显著减小，基因突变的发生率显著升高，肿瘤发生率也因此升高[12]。可见，AIM2在结直肠炎症中发挥重要的调节作用，对结直肠腺瘤和腺癌的产生发挥关键性的抑制效果，但是其中的机理还是今后研究的重点方向。

参考文献：

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[2]张志,杨晓东,孙亮,等.结直肠癌组织AIM2和血清CEA表达与预后相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志,2018,8(1):20-25,33.

[3]林三仁,李渊.加强炎症在肿瘤发生发展中作用的研究[J].中华内科杂志,2014,12(5):345-346.

[4]冯凯瑜,聂玉强,沈波,等.结直肠腺瘤发生危险因素的病例对照[J].中国老年学杂志,2012,15(12):2616-2617.

[5]叶英海,周晓聪.结直肠腺瘤的危险因素研究[J].中华普通外科杂志,2011,11(3):208-211.

[6]王倩,朱锦明,黄蕾,等.黑色素瘤缺乏因子2在胎膜早破并组织学绒毛膜羊膜炎患者中的表达及临床意义[J].中国临床研究,2020,33(7):865-869.

[7]武勇,张敏敏.黑色素瘤缺乏因子2炎症小体在肾脏疾病中的研究进展[J].中华肾脏病杂志,2020,36(6):492-496.

[8]孙肖霄,许林凌,夏影,等.黑色素瘤缺乏因子2基因rs2276405和rs2793845单核苷酸多态性与1型糖尿病的关联研究[J].中华糖尿病杂志,2019(12):809-813.

[9]张席军,李红莉,赵筱娟.HBV相关性肾炎肾组织AIM2水平及其与炎性因子和肾脏炎症程度的相关性分析[J].肝脏,2019,24(10):1129-1131.

[10]武少贤,李源,郑盼盼,等.黑色素瘤缺乏因子2在胰腺癌组织的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志,2019(9):1668-1671.

[11]陈洪涛,杨智,吴诗品.外周血单个核细胞黑色素瘤缺乏因子2在原发性肝癌中的表达及其临床意义[J].新发传染病电子杂志,2019,4(3):149-151,168.